鞘內注射士的寧對依托咪酯鎮痛作用的影響

馮 濤， 陳 虎， 陳 功， 楊進國 (湖北醫藥學院附屬東風醫院麻醉科， 十堰 442008)

鞘內注射士的寧對依托咪酯鎮痛作用的影響

馮 濤， 陳 虎， 陳 功， 楊進國 (湖北醫藥學院附屬東風醫院麻醉科， 十堰 442008)

目的 初步探討依托咪酯(etomidate，ET)的鎮痛作用及鞘內注射甘氨酸受體(GlyR)阻斷劑士的寧(Stry)對依托咪酯鎮痛作用的影響。 方法 240只昆明種小鼠隨機分為熱板和扭體2大組，每大組再分Stry組、ET組和ET+Stry組3小組，各小組再按給予ET及Stry的劑量不同分為4亞組，各亞組小鼠10只。小鼠靜脈注射生理鹽水(NS)或不同劑量的ET后，鞘內注射人工腦脊液(aCSF)或不同劑量的Stry，在熱板法和扭體法實驗中分別觀察小鼠熱板法疼痛指數(pain threshold index in hot-plate test，HPPI)和扭體次數的變化。 結果 ET 0.5 mg/kg靜脈注射對各組小鼠HPPI及扭體次數均無影響(P＞0.05);ET 1.0，2.0 mg/kg靜脈注射可增加各組小鼠 HPPI(P＜0.05)及減少扭體次數(P＜0.05);Stry 0.1，0.2 μg 鞘內注射對 ET+Stry亞組小鼠HPPI及扭體次數均無影響(P＞0.05);Stry 0.4 μg鞘內注射能減少ET+Stry亞組小鼠的HPPI(P＜0.05)，但對Stry+ET亞組小鼠扭體次數無影響(P＞0.05)。 結論 依托咪酯具有鎮痛作用，且其在熱板法和扭體法中產生的鎮痛作用的機制是不相同的，前者可能與甘氨酸受體有關，而后者與甘氨酸受體的關系不大。

鎮痛; 依托咪酯; 甘氨酸受體; 士的寧; 小鼠

依托咪酯(etomidate，ET)是一種催眠性靜脈全麻藥，具有起效快、時效短、對呼吸循環影響輕微等優點，臨床上常用于全麻誘導發揮其鎮靜催眠作用，而ET有否鎮痛作用目前少有報道。甘氨酸(glycine，Gly)是哺乳動物腦內重要的抑制性神經遞質［1］。一般認為，大多數的全麻藥都可以增強或模擬中樞抑制性遞質甘氨酸的作用，并且通過激活甘氨酸受體(glycine receptor，GlyR)發揮鎮痛作用，但尚未完全證實，且大多限于離體研究［2－5］，而依托咪酯是否也有類似的作用目前研究尚少。本實驗擬通過小鼠靜脈注射不同劑量的依托咪酯后，鞘內注射不同劑量的甘氨酸受體(GlyR)阻斷劑士的寧(Stry)，在熱板法和扭體法實驗中分別觀察小鼠熱板法疼痛指數(pain threshold index in hot-plate test，HPPI)和扭體次數的變化，初步探討ET是否具有鎮痛作用及鞘內注射士的寧對依托咪酯鎮痛作用的影響。

1 材料和方法

1.1 試劑及儀器 依托咪酯(江蘇恩華藥業集團有限公司，20091206)，用生理鹽水(NS)稀釋成所需濃度;士的寧(Fluka公司)，用人工腦脊液(artificial cerebral spinal fluid，aCSF)稀釋成所需濃度。微量進樣器(寧波，中國);恒溫水浴箱(上海，中國)。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，平均質量20－25 g，由湖北醫藥學院實驗動物中心提供，動物合格證號(SCXK鄂)2003－0005。自由攝食飲水，實驗前使動物熟悉實驗室環境3 d，每日8:00－12:00在隔音環境中實驗。

1.3 分組及處理 240只小鼠先隨機分為熱板和扭體2大組，每大組再分Stry組、ET組和ET+Stry組 3 小組。Stry組分 aCSF 組、Stry 0.1，0.2，0.4 μg 4 亞組;ET 組分 NS 組、ET 0.5，1.0，2.0 mg/kg 4 亞組;ET+Stry組分為 ET+aCSF組、ET+Stry 0.1，0.2，0.4 μg 4 亞組。各亞組小鼠 10 只。Stry 組鞘內注射aCSF或不同劑量的Stry;ET組靜脈注射NS或不同劑量的ET(容積均為0.01 ml/g，注射時間10 s);ET+Stry組，首先鞘內注射aCSF或不同劑量的 Stry(容積均為 5 μl，注射時間 5 s，留針 25 s)，5 min后靜脈注射ET 2.0 mg/kg。各組小鼠末次給藥后 5 min，行熱板或扭體實驗［6］。

1.4 熱板實驗 將小鼠置于恒溫水浴箱(55±0.5)℃，記錄從足部接觸熱板到開始舔后足的時間即熱板法痛閾(pain threshold in hot-plate test，HPPT)。給藥前每只小鼠測HPPT 2次，間隔5 min，取平均值為基礎痛閾(basal HPPT)。剔除基礎

HPPT＞30 s或＜5 s的小鼠。為避免足部燙傷，停留時間不超過60 s，超過60 s者，其HPPT記為60 s。觀察各組小鼠給藥后 5，15，25，35，45 min 的HPPT的變化。計算各組小鼠的熱板疼痛指數(pain index in hot-plate test，HPPI)，HPPI=HPPT/基礎HPPT。

1.5 扭體實驗 各組小鼠給藥5 min后，腹腔注射0.6%冰醋酸0.01 ml/L，立即記錄15 min內小鼠扭體次數(writhing times)。

1.6 統計學分析數據均采用±s表示，SPSS 13.0軟件進行統計學處理，組內比較采用配對t檢驗，組間比較采用方差分析，P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 熱板法

2.1.1 Stry對清醒小鼠 HPPI的影響 單純 Stry組，各亞組間小鼠的HPPI無統計學意義(P＞0.05，見表1)。

表1士的寧對清醒小鼠HPPI的影響±s，n=10)Tab 1Effect of Stry on the pain index in hot-plate test(HPPI)in conscious mice(±s，n=10)

表1士的寧對清醒小鼠HPPI的影響±s，n=10)Tab 1Effect of Stry on the pain index in hot-plate test(HPPI)in conscious mice(±s，n=10)

給藥后5 min 15 min 25 min 35 min 45 min aCSF 組 － 1.00 1.01 ±0.21 1.02 ±0.29 1.04.±0.27 1.04 ±0組別 劑量/μg 基礎值.26 1.03 ±0.25 Stry 組 0.1 1.00 1.02 ±0.17 1.06 ±0.42 1.05 ±0.35 1.07 ±0.43 1.06 ±0.24 0.2 1.00 1.05 ±0.30 1.03 ±0.30 1.05 ±0.31 1.04 ±0.29 1.00 ±0.13 0.4 1.00 0.96 ±0.32 0.97 ±0.22 1.01 ±0.28 1.00 ±0.22 0.97 ±0.23

2.1.2 ET對小鼠HPPI的影響 與NS亞組、基礎HPPI相比，ET 0.5 mg/kg靜脈注射對小鼠HPPI均無明顯影響(P＞0.05)。與 NS亞組相比，ET 1.0，2.0 mg/kg靜脈注射5，15 min時均可增加小鼠的HPPI(P＜0.01)，25 min后均無明顯差異(P＞0.05);與基礎 HPPI相比，ET1.0 mg/kg 靜脈注射5，15 min時增加小鼠的 HPPI(P＜0.01)，25 min后無明顯差異(P＞0.05)，ET 2.0 mg/kg靜脈注射 5，15，25 min時增加小鼠的 HPPI(P＜0.01)，35 min后無明顯差異(P＞0.05，見表2)。

表2依托咪酯對小鼠HPPI的影響(±s，n=10)Tab 2Effect of etomidiate on the pain index in hot-plate test(HPPI)in mice(±s，n=10)

表2依托咪酯對小鼠HPPI的影響(±s，n=10)Tab 2Effect of etomidiate on the pain index in hot-plate test(HPPI)in mice(±s，n=10)

與 NS亞組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01;同組與基礎 HPPI比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 劑量/(mg/kg) 基礎值給藥后5 min 15 min 25 min 35 min 45 min NS組 － 1.00 1.02 ±0.24 1.05 ±0.38 1.07 ±0.36 1.04 ±0.26 1.04 ±0.21 ET 組 0.5 1.00 1.07 ±0.29 1.07 ±0.31 1.02 ±0.26 1.08 ±0.31 1.05 ±0.33 1.0 1.00 1.67 ±0.32＊＊▲▲ 1.59 ±0.32＊＊▲▲ 1.24 ±0.31 1.10 ±0.25 1.04 ±0.25 2.0 1.00 2.00 ±0.30＊＊▲▲ 1.94 ±0.45＊＊▲▲ 1.36 ±0.33＊＊1.15 ±0.24 1.04 ±0.31

2.1.3 Stry對ET鎮痛小鼠的HPPI影響 與ET+aCSF 亞組相比，Stry 0.1，0.2 μg 鞘內注射對 ET 鎮痛小鼠的HPPI均無明顯影響(P＞0.05);Stry 0.4 μg鞘內注射在5 min時能夠減少ET鎮痛小鼠的HPPI(P＜0.05)，15 min后無明顯差異(P＞0.05);與基礎 HPPI相比，Stry 0.1，0.2 μg 鞘內注射在 5，15，25 min增加小鼠 HPPI(P＜0.05)，35 min 后無明顯差異(P＞0.05)，Stry 0.4 μg 則在 5，15 min 增加小鼠HPPI(P＜0.05)，25 min后無明顯差異(P＞0.05，見表 3)。

表3士的寧對依托咪酯鎮痛小鼠的HPPI影響(±s，n=10)Tab 3Effect of Stry on the pain index in hot-plate test(HPPI)in etomidiate-treated mice(±s，n=10)

表3士的寧對依托咪酯鎮痛小鼠的HPPI影響(±s，n=10)Tab 3Effect of Stry on the pain index in hot-plate test(HPPI)in etomidiate-treated mice(±s，n=10)

與 ET+aCSF亞組比較，▲P ＜0.05，▲▲P＜0.01;同組與基礎值比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

給藥后5 min 15 min 25 min 35 min 45 min ET+aCSF － 1.00 2.13 ±0.43＊＊ 1.96 ±0.48＊＊ 1.40 ±0.32＊＊組別 劑量/μg 基礎值1.17 ±0.19 1.03 ±0.23 ET+Stry 0.1 1.00 2.02 ±0.24＊＊ 1.93 ±0.27＊＊ 1.37 ±0.17＊＊ 1.15 ±0.25 1.04 ±0.21 0.2 1.00 1.99 ±0.26＊＊ 1.91 ±0.41＊＊ 1.40 ±0.30＊＊ 1.17 ±0.20 1.06 ±0.34 0.4 1.00 1.69 ±0.32▲＊＊ 1.68 ±0.43＊＊1.28 ±0.31 1.15 ±0.31 1.04 ±0.35

2.2 扭體法 Stry組內各亞組小鼠的扭體次數相似(P＞0.05);在 ET 組內，與 NS亞組相比，ET 0.5 mg/kg亞組小鼠扭體次數無明顯變化(P＞0.05)，ET 1.0，2.0 mg/kg亞組小鼠的扭體次數減少(P＜0.01);在 ET+Stry組內，與 ET+aCSF亞組相比，Stry 0.1，0.2，0.4 μg 鞘內注射對 ET 鎮痛小鼠的扭體次數均無明顯影響(P＞0.05，見表4)。

表4 士的寧、依托咪酯對小鼠扭體次數及士的寧對依托咪酯鎮痛小鼠扭體次數的影響(±s，n=10)Tab 4 Effects of Stry and etomidiate on writhing times of mice and effects of Stry on writhing times of etomidiate-treated mice(±s，n=10)

表4 士的寧、依托咪酯對小鼠扭體次數及士的寧對依托咪酯鎮痛小鼠扭體次數的影響(±s，n=10)Tab 4 Effects of Stry and etomidiate on writhing times of mice and effects of Stry on writhing times of etomidiate-treated mice(±s，n=10)

ET組內與 NS亞組比較，＊＊P ＜0.01

組別 亞組 扭體次數Stry組aCSF 43±11 0.1 μg 48 ±12 0.2 μg 43 ±8 0.4 μg 42 ±12 ET組 NS 43±10 0.5 mg/kg 39 ±7 1.0 mg/kg 24 ±6＊＊2.0 mg/kg 18 ±5＊＊ET+Stry組 ET+aCSF 16±6 0.1 μg 19 ±7 0.2 μg 20 ±6 0.4 μg 21±5

3 討論

依托咪酯是咪唑類衍生物，安全性大，是麻醉誘導常用的藥物之一。傳統的觀念認為依托咪酯為非巴比妥類靜脈鎮靜催眠藥，其作用機制可能與興奮γ－氨基丁酸(GABAA)受體、抑制電壓依賴性鈣通道和N－甲基 －D－天冬氨酸(NMDA)受體有關［7］，而依托咪酯是否具有鎮痛作用及其作用機制目前少見報道，為了研究依托咪酯是否具有鎮痛作用，本實驗中我們選用了熱板法和扭體法二種疼痛模型進行研究。熱板法中動物的舔后足和跳躍均被認為是經脊髓上中樞整合后的行為，熱板法對小鼠幾乎不引起組織損傷，可以多次測量，因此可用于研究藥物的起效時間和時效關系。扭體法是將一定量的化學刺激物質注入小鼠腹腔內，刺激內臟神經末梢，引起致痛物質釋放，引起深部較大面積較長時間的炎性疼痛，致使小鼠出現扭體反應，其特點是易于發現較弱的鎮痛作用［7］。本實驗發現依托咪酯可劑量依賴地增加熱板小鼠HPPI，并減少小鼠扭體次數，說明依托咪酯對物理熱刺激及化學刺激均有鎮痛作用，從而加深了我們對依托咪酯的認識，并對臨床用藥具有一定的參考價值。

士的寧是甘氨酸受體(glycine receptor，GlyR)阻斷劑，GlyR是中樞神經系統中的重要抑制性門控離子通道受體［8］，GlyR激活引起的Cl－內流可使突觸后膜超極化，神經元興奮性降低;反之，GlyR阻斷則會使神經元興奮性增高。本實驗中發現士的寧0.1，0.2 μg鞘內注射不能拮抗依托咪酯的鎮痛作用，這可能與士的寧劑量太小未充分阻斷甘氨酸受體有關;而士的寧0.4 μg鞘內注射可減少依托咪酯鎮痛小鼠HPPI，說明依托咪酯對物理熱刺激產生的鎮痛作用與甘氨酸受體有關;而鞘內注射不同劑量士的寧對依托咪酯鎮痛小鼠扭體次數無明顯影響，提示依托咪酯對化學性刺激產生的鎮痛作用與甘氨酸受體關系不大，說明依托咪酯除通過作用于甘氨酸受體外尚有其他途徑發揮鎮痛作用，其具體機制還有待進一步研究。

［1］ Milutinovic PS，Yang L，Cantor RS，et al.Anesthetic-like modulation of a gamma-aminobutyric acid type A，strychnine-sensitive glycine，and N-methyl-d-aspartate receptors by coreleased neurotransmitters［J］.Anesth Analg，2007，105(2):386 －392.

［2］ Grasshoff C，Antkowiak B.Effects of isoflurane and enflurane on GABAA and glycine receptors contribute equally to depressant actions on spinal ventral horn neurons in rats［J］.Br J Anaesth，2006，97(5):687 －694.

［3］ Yamauchi M，Sekiyama H，Shimada SG，et al.Halothane suppression of spinal sensory neuronal responses to noxious peripheral stimuli is mediated，in part，by both GABA(A)and glycine receptor systems［J］.Anesthesiology，2002，97(2):412 －417.

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［5］ Ahrens J，Haeseler G，Leuwer M，et al.2，6 di-tert-butylphenol，a nonanesthetic propofol analog，modulates alpha1beta glycine receptor function in a manner distinct from propofol［J］.Anesth Analg，2004，99(1):91 －96.

［6］ 宋必衛，徐叔云，馬傳庚，等.小鼠熱板法［M］//徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學.3版.北京:人民衛生出版社，2002:886 －887，882 －883，893.

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Effects of intrathecal injection of strychnine on analgesic effect of etomidate in mice

FENG Tao，CHEN Hu，CHEN Gong，YANG Jin-guo(Dept of Anesthesiology，Affiliated Dongfeng Hospital of Hubei Medical College，Shiyan 442008，China)

ObjectiveTo investigate the analgesic effect of etomidate(ET)，and to explore the effects of intrathecal injection of strychnine(Stry)on analgesic effect of etomidate in mice.MethodsTwo hundred and forty Kunming mice were randomly divided into two groups:hot-plate group and writhing group，each group was randomly divided into three subgroups:Stry group，ET group and Stry+ET group，and then each subgroup was divided into four subgroups(n=10 each group)according to different doses of etomidate or strychnine.Etomiate was intravenously injected and strychnine was intrathecally injected after the etomidate injection.Then hot-plate test and acetic acid-induced writhing test were employed to evaluate the pain index in hot-plate test(HPPI)and the writhing times.ResultsEtomidate 0.5 mg/kg had no effect on HPPI and writhing times in mice(P＞0.05)，while etomidate 1.0 mg/kg and 2.0 mg/kg increased the HPPI(P＜0.05)and decreased the writhing times(P＜0.05).Strychnine 0.1 μg and 0.2 μg had no effect on HPPI and writhing times in mice in Stry+ET group(P＞0.05)，while strychnine 0.4 μg decreased the HPPI(P＜0.05)but had no effects on writhing times(P＞0.05).ConclusionEtomidate has analgesic effect and its mechanism may be different in hot-plate test and acetic acid-induced writhing test.The former may exert the effects through glycine receptor，but the latter is not related to glycine receptor.

analgesia;etomidate;glycine receptor;strychnine;mice

R614

A

1007 －6611(2011)01 －0018 －04

10.3969/J.ISSN.1007 －6611.2011.01.005

馮濤，男，1979－09生，碩士，主治醫師，E-mail:greathare@163.com.

2010－11－08］