不同產地丹參中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量比較

孔祥文，韓杰

（1.北京中醫藥大學第三附屬醫院，北京市 100029；2北京市海淀區藥品檢驗所，北京市 100083）

不同產地丹參中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量比較

孔祥文1＊，韓杰2#

（1.北京中醫藥大學第三附屬醫院，北京市 100029；2北京市海淀區藥品檢驗所，北京市 100083）

目的：建立測定不同產地丹參中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-水（75∶25），流速為1mL·min-1，檢測波長為270nm，柱溫為30℃，進樣量為10μL。結果：隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA進樣量的線性范圍分別為1.45～10.19、2.16～15.12、3.15～22.06μg（r分別為0.9998、0.9996、0.9997）；平均回收率分別為99.44%、99.48%、99.34%，RSD分別為0.2%、0.1%、0.1%（n均為6）。不同產地丹參中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量差別較大。結論：本方法穩定、可靠、重復性好，可用于丹參的質量控制。

丹參；隱丹參酮；丹參酮Ⅰ；丹參酮ⅡA；反相高效液相色譜法；產地；含量測定

丹參是唇形科植物丹參的根及根莖，主產四川、山西、河北、江蘇、安徽等省。中醫理論認為丹參性味苦、微寒，歸心、肝二經，具有祛瘀止痛、活血通絡、清心除煩的功效。丹參的有效成分包括脂溶性成分（二萜醌類）和水溶性成分（酚酸類），均具有一定的生理活性。由于受產地、品種、氣候和生態環境、炮制方法等影響，不同丹參藥材所含主要活性成分差異較大。《中國藥典》丹參項下脂溶性成分以丹參酮ⅡA作為質控指標[1]，而近年研究表明，丹參的脂溶性成分還包括隱丹參酮、丹參酮Ⅰ等，且含量較高、活性較強[2，3]。本試驗收集了河北、山東、江蘇、河南和安徽等主產地的丹參，包括不同栽培方法的丹參，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法對其中所含隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量進行測定和比較，以為丹參的選優與臨床應用提供一定的參考依據[4]。

1 儀器與試藥

LC-2010型HPLC儀、CLASS-VP色譜工作站、SPD-20A紫外-可見檢測器（日本島津公司）；KQ118超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP211十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）。

隱丹參酮（批號：110852-200305，供含量測定用）、丹參酮Ⅰ（批號：0867-200205，供含量測定用）、丹參酮ⅡA（批號：110766-200417，供含量測定用）均購自中國藥品生物制品檢定所；丹參購于不同產地（1、2號：河北；3、4號：山東；5、6號：江蘇；7、8號：河南；9、10號：安徽），均經北京市海淀區藥品檢驗所韓杰副主任中藥師鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：1mL·min-1；檢測波長：270nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL[5]。在該色譜條件下，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的保留時間分別為15.9、17.3、27.4min[6，7]。3種成分與樣品中其他組分分離良好，理論板數按隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA峰計算均＞5000；陰性對照無干擾。色譜見圖1。

2.2 混合對照品溶液的制備

分別精密稱取隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA對照品適量，加甲醇制成每1mL含隱丹參酮85μg、丹參酮Ⅰ102μg和丹參酮ⅡA107μg的混合對照品溶液，置棕色瓶中，待用。

2.3 供試品溶液的制備

取丹參粉末（過3號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：200W，頻率：40kHz）30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察

精密吸取混合對照品溶液2、4、6、8、10、12μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以對照品進樣量（X，μg）對峰面積積分值（Y）進行線性回歸，得3種成分的回歸方程、線性范圍和相關系數（r），詳見表1。

表13 種成分的回歸方程、線性范圍和相關系數Tab1 Regression equation，linear range and relevant coefficient of 3kinds of components

2.5 精密度試驗

取混合對照品溶液10μL，按上述色譜條件連續進樣6次，測定峰面積。結果，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的RSD分別為0.98%、1.08%、0.86%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取丹參粉末適量，按“2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定。結果，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的RSD分別為1.13%、0.95%、1.25%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，室溫放置，分別于0、1、2、4、8、12、24h進樣，按上述色譜條件進樣測定。結果，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的RSD分別為1.05%、0.85%、1.15%（n＝7），表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

取已知隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量的樣品（批號：6174241）0.5g，共6份，分別對應加入一定量的對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結果見表2。

2.9 樣品含量測定

取不同產地的丹參適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定，計算樣品含量，結果見表3。

3 討論

本試驗曾參考2005年版《中國藥典》（一部）丹參項下含量測定方法操作，發現供試品色譜圖中不僅有丹參酮ⅡA色譜峰，而且有隱丹參酮、丹參酮Ⅰ色譜峰，故通過查閱文獻，確立了本試驗方法。本方法穩定、可靠、重復性好，可用于丹參藥材的質量控制。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab2 Results of recovery tests（n＝6）

表3 樣品含量測定結果（n＝3）Tab3 Results of content determination of samples（n＝3）

筆者對樣品超聲提取時間進行了考察，以甲醇為提取溶劑，分別超聲提取10、20、30、40、50min。結果表明，超聲提取40min，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量已基本穩定，故確定超聲提取時間為40min。

不同產地丹參中的隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量差別較大，山東的野生丹參含量最高，安徽的栽培丹參含量最低，而同一地區中野生品的含量普遍高于栽培品。這與丹參的產地與加工方法有關，所以應對丹參的產地加以分類。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：52.

[2] 李曉莉，李曉蓉，王麗娟，等.RP-HPLC測定丹芎方中丹參素、阿魏酸、隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量[J].中成藥，2008，30（1）：77.

[3] 安 睿，王新宏，周思麗，等.HPLC測定不同產地丹參藥材中脂溶性成分[J].中成藥，2004，26（4）：294.

[4] 趙瑞娜，謝培山，尹衛平，等.河南欒川地區“白化”丹參的TLC和HPLC圖譜分析[J].中草藥，2006，37（1）：119.

[5] 韓鳳梅，張 玲，陳懷俠，等.丹參脂溶性成分的ESI-MS行為及其特征圖譜研究[J].中草藥，2006，37（1）：122.

[6] 王 穎.復方丹參片的HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥房，2010，21（23）：2162.

[7] 潘 瑩.HPLC法同時測定通脈顆粒中丹參素、阿魏酸和葛根素的含量指紋圖譜研究[J].中國藥房，2011，22（4）：376.

Comparison of the Contents of Cryptotanshinone，Tanshinone I and TanshinoneⅡAinSalviae miltiorrhizaefrom Different Habitats

KONG Xiang-wen
（The Third Affiliated Hospital of Beijing University of TCM，Beijing 100029，China）
HAN Jie
（Beijing Haidian District Institute for Drug Control，Beijing 100083，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡAinSalviae miltiorrhizaefrom different habitats.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phase consisted of methanol-water（75∶25）at flow rate of 1mL·min-1.The detection wavelength was set at 270nm and the column temperature was 30℃.The injection size was 10μL.RESULTS：The linear ranges of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡAinS.miltiorrhizaewere 1.45～10.19μg（r＝0.9998），2.16～15.12μg（r＝0.9996），3.15～22.06μg（r＝0.9997），repsectively.The average recoveries were 99.44%，99.48%，99.34%，respectively.RSDs were 0.2%，0.1%，0.1%（n＝6）.There were significant differences in the contents of cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡAinS.miltiorrhizaefrom different habitats.CONCLUSION：The method is stable，reliable and reproducible for the quality control ofS.miltiorrhizae.

Salviae miltiorrhizae；Cryptotanshinone；Tanshinone Ⅰ；TanshinoneⅡA；RP-HPLC；Habitats；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1794-03

＊副主任藥師。研究方向：臨床藥學。電話：010-52075316。E-mail：gongboran1991228@sina.com

#通訊作者：副主任中藥師。研究方向：藥品檢驗。電話：010-62310830

2010-12-17

2011-03-24）