藏藥濕生扁蕾提取物的止瀉作用及其急性毒性研究

景 明， 羅永皎， 劉喜平， 藺興遙

(甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000)

濕生扁蕾為龍膽科扁蕾屬植物Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.的干燥全草，多生長于甘肅、青海、四川、西藏等藏區(qū)林緣草地和高山草地，藏名機(jī)合滴，藏醫(yī)習(xí)用。具有清熱解毒、健脾止瀉等功能，藏醫(yī)用全草治療肝炎、膽囊炎、熱病發(fā)斑、目赤腫痛、消化不良、腸胃炎等，用濕生扁蕾制成的顆粒劑對(duì)小兒腹瀉有顯著的療效［1］。對(duì)濕生扁蕾提取物的止瀉作用及其急性毒性的研究目前尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用番瀉葉誘導(dǎo)的小鼠腹瀉模型，以腹瀉潛伏期和濕便總數(shù)為指標(biāo)評(píng)價(jià)濕生扁蕾提取物的止瀉作用，同時(shí)測定灌胃給藥的半數(shù)致死量(LD50)，評(píng)價(jià)濕生扁蕾的急性毒性，為濕生扁蕾的臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 HWZ10-B微波干燥機(jī)(天水華園制藥設(shè)備有限公司);AR-140電子天平(上海奧豪斯公司);CXT-64-01電動(dòng)離心機(jī)(北京醫(yī)療儀器廠);R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士布奇)。

1.2 試藥 濕生扁蕾藥材采自甘肅省甘南藏族自治州臨潭縣冶力關(guān)鎮(zhèn)，經(jīng)甘肅省藥品檢驗(yàn)所宋平順主任中藥師鑒定為龍膽科植物濕生扁蕾Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.的干燥全草。

1.2.1 濕生扁蕾提取物(GTP)的制備 取濕生扁蕾干燥全草，粉碎，過三號(hào)篩，稱取286 g，加10倍量水煎煮2次，每次1.5 h，濾過，濾液放冷，以3 000 r/min離心分離10 min，上清液備用;藥渣加10倍量95%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，濾過，濾液放冷，以3 000 r/min離心分離10 min，上清液減壓回收乙醇后與水提液合并，微波干燥，粉碎，用HPLC法［2］測定提取物中含主要成分木犀草素和1，7-二羥基-3，8-二甲氧基酮分別為2.93 mg/g和5.59 mg/g。在給藥前將浸膏粉用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配成不同濃度的混懸液作為樣品溶液。

1.2.2 番瀉葉煎劑的制備 取番瀉葉20 g，剪碎，加入200 mL蒸餾水，加熱保持微沸5 min，濾過，濾液60℃以下減壓濃縮至20 mL，質(zhì)量濃度為1.0 g/mL。

1.2.3 思密達(dá)混懸液的制備 取思密達(dá)(博福-益普生天津制藥有限公司，批號(hào)s0468)2 g，加入10 mL蒸餾水，攪拌使其混合均勻，質(zhì)量濃度為0.2 g/mL。冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。

1.3 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證SCXK(甘)2004～0006。動(dòng)物顆粒飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。

2 方法［3-5］與結(jié)果

2.1 對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響 昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組，陽性對(duì)照組，GTP大、中、小劑量組，每組10只。模型組灌胃等容量生理鹽水，陽性對(duì)照組灌胃給予思密達(dá)混懸液(5 g/kg)，GTP大、中、小劑量組分別灌胃1.8 g/kg、0.90 g/kg、0.45 g/kg。給藥體積均為0.2 mL/10 g體質(zhì)量。30 min后分別灌胃給予番瀉葉煎劑(1 g/mL，0.2 mL/10 g體質(zhì)量)。將小鼠單個(gè)罩于鋼絲網(wǎng)上，網(wǎng)下墊上濾紙，每隔1 h換墊紙，記錄小鼠腹瀉潛伏期以及6 h內(nèi)的濕糞總數(shù)。GTP各劑量組對(duì)番瀉葉所致的小鼠腹瀉有明顯的對(duì)抗作用，表現(xiàn)在使腹瀉潛伏期延長和在相同時(shí)間內(nèi)累積腹瀉次數(shù)減少，而且有一定的量效關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 GTP對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響(±s，n=10)

表1 GTP對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，﹡ P＜0.05，﹡﹡P ＜0.01。

組 別 劑量/(g/kg)腹瀉潛伏期/min 濕便總數(shù)/個(gè)模型對(duì)照 —116.00±18.88 6.66±1.22 GTP低劑量 0.45 123.56±19.88 5.78±1.27 GTP中劑量 0.90 150.78±24.19﹡ 4.22±1.32﹡GTP高劑量 1.80 154.44±49.37﹡﹡ 1.66±1.45﹡陽性對(duì)照 5.0 190.67±21.05﹡﹡ 0.88±0.73﹡﹡

2.2 半數(shù)致死量(LD50)測定 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，雌雄各半，給藥前禁食，不禁水，各組小鼠灌胃給予不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的GTP 2次，間隔時(shí)間為6 h，給藥后自由飲水，連續(xù)觀察14 d。給藥后的第2天，各組小鼠均表現(xiàn)為萎靡、豎毛、拱背、懶動(dòng)、厭食，第4、5組小鼠均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、便血、呼吸困難等癥狀，第5組有一只小鼠死亡;第3天，第1、2、3組小鼠均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、便血、呼吸困難等癥狀，第3、4組各有一只小鼠死亡;第4天，第2組有一只小鼠死亡。用Bliss法計(jì)算LD50及95%的可信限，GTP小鼠灌胃給藥的 LD50為127.4 g/kg，其95%的可信限為(116.6～139.4)g/kg。結(jié)果見表2。

表2 小鼠灌胃GTP的死亡率

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，濕生扁蕾提取物對(duì)番瀉葉所致的小鼠腹瀉有明顯的對(duì)抗作用。表現(xiàn)在腹瀉潛伏期延長和在相同時(shí)間內(nèi)累積腹瀉次數(shù)減少。LD50為127.4 g/kg，其95%的可信限為(116.6～139.4)g/kg。濕生扁蕾提取物有一定毒性，但毒性較低，表明浸膏口服安全可靠，為濕生扁蕾的開發(fā)提供了一定的理論依據(jù)。

［1］米 琴，曹長年，王慧春，等.濕生扁蕾有效成分抑菌活性的測定［J］.青海大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2004，22(2):84.

［2］景 明，李季文，樊 秦，等.HPLC測定濕生扁蕾中木犀草素和 1，7-二羥基-3，8-二甲氧基酮的含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2008，15(3):43.

［3］陳 琦.中藥藥效研究思路與方法［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:427.

［4］王麗娟，張明春，閆 超，等.酸棗仁提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(7):1610.

［5］樓宜嘉主編.藥物毒理學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:176.