艾葉用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的效果觀察及吸入刺激實(shí)驗(yàn)

韓志剛，韋 莉，吳登虎，楊俊卿，潘永全

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，重慶 400016；2.重慶動(dòng)物園，重慶 400050； 3.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，重慶 400016）

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室常用的空氣消毒方法包括甲醛熏蒸、過氧乙酸噴霧、紫外線照射等。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者開始嘗試使用艾葉進(jìn)行室內(nèi)空氣消毒并取得了一定效果。本實(shí)驗(yàn)觀察艾葉用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的效果及其對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的吸入刺激性，希望能為其應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品及試劑

艾葉由重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院提供并鑒定；血液瓊脂培養(yǎng)基由重慶龐通醫(yī)療器械有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠20只，體重（200±10）g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（生產(chǎn)許可證號：SCXK（渝） 2007-0001）。

1.3 主要儀器設(shè)備

303AS-2型電熱培養(yǎng)箱，上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠；PY4型大、小鼠隔離器，蘇州新區(qū)楓橋?qū)嶒?yàn)動(dòng)物籠具廠。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 艾葉熏蒸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的效果觀察

2.1.1 消毒方法：分別用艾葉1 g/m3、2 g/m3、4 g/ m3的劑量對大小相同（25 m2）的三間空動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行熏蒸消毒。將艾葉放在金屬網(wǎng)上置于房間中央地上，點(diǎn)燃艾葉，但不需燃成火苗，只需不斷產(chǎn)生煙霧狀氣體擴(kuò)散到室內(nèi)空間，立即離開，密閉房間，讓其自然燃燒怠盡，采樣后開窗通風(fēng)。

2.1.2 采樣方法：消毒前及消毒后12 h各采樣1次。按照國標(biāo)14925-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境空氣落下菌數(shù)檢測方法，每5～10 m2設(shè)置1個(gè)測定點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)，將4個(gè)血液瓊脂培養(yǎng)皿放于房間地面上，均勻分布。平皿打開后放置30 min，加蓋，放于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后計(jì)CFU［（colony form ing units，CFU），個(gè)/皿］。

按照以上方法分別對三間動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行空氣消毒及采樣，每周1次，連續(xù)10周。

2.1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算、統(tǒng)計(jì)方法：按照國標(biāo)14925-2001動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境落下菌數(shù)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：普通環(huán)境CFU≤30個(gè)/皿為合格。4個(gè)測定點(diǎn)CFU的平均值作為該組該次采樣的CFU，以此數(shù)據(jù)判斷該次檢測CFU是否合格，消毒10次后計(jì)算各組消毒合格率（％）。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，以P＜0.05為差異有顯著性。

2.2 艾葉熏蒸消毒對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的吸入刺激實(shí)驗(yàn)

將40只SD大鼠分為對照組和艾葉低、中、高劑量組，每組10只，分別放在空間為1.5 m3的4個(gè)隔離器內(nèi)。分別用艾葉1 g/m3、2 g/m3、4 g/m3的劑量對低、中、高劑量組隔離器進(jìn)行熏蒸消毒，方法同上。消毒12 h后將各組大鼠脫頸椎處死并解剖，取肺組織，用4％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)的變化。

3 結(jié)果

3.1 艾葉熏蒸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的效果觀察

三個(gè)劑量艾葉消毒結(jié)果顯示（表1）：消毒前，低、中、高劑量組CFU均不合格，且組間差異無顯著性。消毒后12 h，各組CFU均合格，低劑量組與中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組組間差異不顯著；消毒10次，低劑量組合格率為80％，中、高劑量組均為100％。

表1 不同劑量艾葉消毒前后CFU（±s）及合格率Tab.1 CFU（±s）before and after air disinfection with Folium Artemisiae argyi and the eligible rate in different dose groups

表1 不同劑量艾葉消毒前后CFU（±s）及合格率Tab.1 CFU（±s）before and after air disinfection with Folium Artemisiae argyi and the eligible rate in different dose groups

*分別與中、高劑量組比較，P＜0.05Note：vs.midd le-dose group and high-dose group，P＜0.05

分組Groups n消毒前菌落數(shù)CFU before disinfection消毒后菌落數(shù)CFU after disinfection合格次數(shù)Eligible times合格率（％） Eligible rate低劑量組Low dose group 10 61.8±22.7 28.2±2.3*8 80中劑量組Middle dose group 10 65.2±14.9 14.8±3.0 10 100高劑量組High dose group 10 52.4±8.3 13.4±5.0 10 100

3.2 艾葉熏蒸消毒對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的吸入刺激實(shí)驗(yàn)

光鏡下觀察，對照組大鼠肺內(nèi)小支氣管上皮無倒?fàn)睿鼙跓o炎癥細(xì)胞浸潤，管腔內(nèi)無分泌物；肺泡管及肺泡無擴(kuò)張、萎陷；肺泡腔內(nèi)無出血和水腫液，肺泡上皮無損傷；肺泡壁無增厚和炎癥細(xì)胞浸潤，肺毛細(xì)血管無擴(kuò)張、充血（圖1A-B）。與對照組比較，低、中、高劑量組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的病理變化，表現(xiàn)為肺內(nèi)小支氣管腔內(nèi)分泌物增多；肺毛細(xì)血管充血；肺泡壁增寬，肺泡壁內(nèi)見中性粒細(xì)胞浸潤；肺泡上皮腫脹，個(gè)別肺泡腔內(nèi)見出血（圖1C-H）（圖1見彩插5）。

4 討論

對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行日常空氣消毒是預(yù)防疾病、防止交叉感染的重要措施，也是控制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境質(zhì)量的重要內(nèi)容之一。傳統(tǒng)的空氣消毒法包括甲醛熏蒸、過氧乙酸噴霧、紫外線照射等［1］，但都存在一定局限性，如甲醛、過氧乙酸對人體、動(dòng)物的刺激性和毒性［2-6］，紫外線的毒性及消毒效果的受限性等［7］。

中藥艾葉（Folium Artemisiae argyi）是中醫(yī)常用藥之一，為菊科植物艾的干燥葉，藥用歷史悠久。艾葉對多種病原微生物有殺滅或抑制作用［8］。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者開始嘗試使用艾葉進(jìn)行室內(nèi)空氣消毒并取得了一定效果［9-13］。筆者查閱大量文獻(xiàn)，未見艾葉用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的實(shí)驗(yàn)研究。

三種劑量艾葉消毒結(jié)果顯示，消毒前，三個(gè)組CFU均不合格，且組間差異無顯著性，表明消毒前三個(gè)房間菌落數(shù)水平相當(dāng)。消毒后12 h，各組CFU均合格，這表明三種劑量艾葉對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣均有一定的消毒作用。消毒10次后統(tǒng)計(jì)，低劑量組合格率為80％，中、高劑量組合格率均為100％。低劑量組菌落數(shù)與中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組組間差異不顯著。這表明中、高劑量組消毒效果相當(dāng)且優(yōu)于低劑量組。由此提示，艾葉用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室空氣消毒的較佳劑量為中劑量組的2 g/m3。

由于大鼠對空氣污染非常敏感，常被用作空氣污染、有害氣體慢性中毒等方面的研究［14］，故本實(shí)驗(yàn)選用大鼠進(jìn)行吸入刺激實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，與對照組比較，低、中、高劑量組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的炎性病變，表明艾葉薰蒸消毒對大鼠呼吸系統(tǒng)有刺激性損傷。此結(jié)果與張大維等［4］所做過氧乙酸吸入刺激實(shí)驗(yàn)的結(jié)果類似。盡管三個(gè)劑量的大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的損傷，但其表現(xiàn)卻并不規(guī)律。同組10只大鼠肺組織的損傷程度并不一致；組間比較，也不能看出損傷程度與艾葉劑量之間的關(guān)系。于此，作者正在做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究，以探索其中的相關(guān)性，希望對今后的實(shí)際應(yīng)用作出指導(dǎo)。

綜上所述，艾葉熏蒸對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室有一定消毒效果，可以作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室日常消毒的方法之一，但由于其對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物呼吸系統(tǒng)有刺激性損傷，表明此方法也存在類似傳統(tǒng)消毒方法的局限性，因此使用時(shí)須控制好濃度和劑量，且不宜長期使用，應(yīng)與其它消毒方法交替使用為宜。

［1］劉恩岐，尹海林，顧為望，主編.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，2008：54.

［2］顧為望，黃韌，潘甜美，主編.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障設(shè)施建設(shè)與管理［M］.西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，2002：66-67.

［3］張大維，邴國強(qiáng)，李萍，等.2％含量的過氧乙酸眼刺激實(shí)驗(yàn)［C］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)年會論文集.桂林：中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會，2006：278-281.

［4］張大維，邴國強(qiáng)，李萍等.2％含量的過氧乙酸吸入刺激實(shí)驗(yàn)［C］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)年會論文集.桂林：中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會，2006：282-284.

［5］張大維，邴國強(qiáng)，李萍，等.0.2％戊二醛、0.2％過氧乙酸、2％過氧乙酸、0.2％次氯酸鈉皮膚毒性實(shí)驗(yàn)［C］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)年會論文集.桂林：中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會，2006：285-287.

［6］張大維，邴國強(qiáng)，李萍等.2％過氧乙酸吸入毒性實(shí)驗(yàn)［C］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會第七屆學(xué)術(shù)年會論文集.桂林：中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會，2006：288-290.

［7］梅全喜，高玉橋.中藥艾葉空氣消毒研究近況［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2005，23（9）：1581-1582.

［8］李慧.艾葉的藥理研究進(jìn)展及開發(fā)應(yīng)用［J］.基層中藥雜志，2002，16（3）：51-53.

［9］趙俐玲，余素飛.3種空氣消毒法的效果比較［J］.中華現(xiàn)代護(hù)理雜志，2001，7（12）：5-6.

［10］姜文全，崔彩萍.艾葉熏蒸用于母嬰同室空氣消毒［J］.西北藥學(xué)雜志，2 002，17（2）：80-81.

［11］賴勝芳，梁秀蘭，馮超英，等.蒼術(shù)、艾葉熏蒸發(fā)熱門診空氣的消毒效果分析［J］.現(xiàn)代臨床護(hù)理，2004，3（2）：17-18.

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［14］孫靖，主編.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)基礎(chǔ)［M］.北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2005：56.