冷凝集素對(duì)血型鑒定和交叉配血的干擾及處理方法

馬鳳蓮 劉祥朝 周艷麗

高效價(jià)冷凝集素往往是由于某些病理因素所致，其效價(jià)一般在16以上，作用的溫度可達(dá)32℃。高效價(jià)冷凝集素不僅給ABO血型和Rh血型鑒定、抗體鑒定及交叉配血帶來困難，同時(shí)還掩蓋了具有臨床意義的同種異型抗體的存在［1，2］。通過對(duì)18例存在高效價(jià)冷凝集素的標(biāo)本進(jìn)行多種方法的處理，解決了血型鑒定和交叉配血的困難，經(jīng)輸血后患者貧血癥狀緩解，病情好轉(zhuǎn)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 冷凝集素增高的患者18例，男15例，女3例，年齡8～85歲。其中，腎移植患者14例，感染性心內(nèi)膜炎3例，慢性肺心病患者1例。效價(jià)在521～4096之間。

1.2 試劑 ABO血型鑒定試劑、Rh血型鑒定試劑均由北京金豪制藥股份有限公司提供，抗人球蛋白試劑、抗體篩查試劑、譜紅細(xì)胞、二巰基乙醇(2-me)應(yīng)用液均由上海醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，ABO反定型細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供。

1.3 標(biāo)本采集 靜脈采集EDTA抗凝血2 ml和不抗凝血5 ml。

1.4 方法

1.4.1 紅細(xì)胞的處理 從抗凝管中取紅細(xì)胞，將自身凝集的紅細(xì)胞37℃水浴30 min，或用37℃的生理鹽水洗滌3遍，洗滌后的紅細(xì)胞鏡檢無凝集，然后做ABO正定型、Rh血型鑒定、直接抗人球蛋白試驗(yàn)、自身吸收試驗(yàn)和交叉配血;洗滌后鏡下凝集的可將標(biāo)本置于37℃水浴或用37℃鹽水洗滌3遍，洗滌后的紅細(xì)胞鏡檢無凝集可進(jìn)行上述操作。

1.4.2 血清的處理 用二巰基乙醇處理血清，從干燥管中取出血清，加入等量的二巰基乙醇置37℃水浴40 min，取出后進(jìn)行反定型、抗體篩查和交叉配血。取處理后無凝集的患者紅細(xì)胞與自身血清1:1混合，置于4℃冰箱內(nèi)吸收30 min，冷凝集較強(qiáng)的可進(jìn)行多次重吸收，吸收后的血清進(jìn)行ABO反定型、抗體篩查和交叉配血。

1.4.3 血清學(xué)試驗(yàn) 未處理的標(biāo)本因血型正、反定型不一致，處理后標(biāo)本ABO正反定型一致、RhD鑒定為陽性。冷凝集素效價(jià)的測(cè)定，患者血清在未稀釋的情況下與O型成人紅細(xì)胞發(fā)生凝集并作效價(jià)滴定，記錄其效價(jià)，判定冷凝集素的特異性。

2 結(jié)果

2.1 在23℃進(jìn)行ABO血型鑒定結(jié)果18例患者正定型均為AB型，反定型為O型，自身對(duì)照凝集。

2.2 處理后標(biāo)本或水浴中血型正反定型結(jié)果及用二巰基乙醇處理后的血標(biāo)本正反定型的結(jié)果為14例O行患者正反定型均為O型，3例B型患者正反定型均為B型，1例A型患者正反定型為A型。

2.3 18例血型物質(zhì)測(cè)試均為分泌型，正定型為O型的14例患者通過血型物質(zhì)檢測(cè)均含有H物質(zhì)，正定型為B型的均含有B、H物質(zhì)，正定型為A型的均含有A和H物質(zhì)。

2.4 直接抗人球蛋白試驗(yàn)均為陽性，抗C3 d也均為陽性，冷凝集素具有抗-I特異性。本組所作的18例患者經(jīng)過冷凝集素去除后交叉配血均相合，多次輸血均沒有發(fā)生輸血反應(yīng)。

3 討論

冷凝集素的效價(jià)低于16，在室溫和37℃幾乎不影響血型血清學(xué)試驗(yàn)，屬生理性冷凝集素;病理狀態(tài)下的冷凝集素是因?yàn)槟承┎±碓驅(qū)е缕湫r(jià)升高，冷凝集素效價(jià)和反應(yīng)溫度較高會(huì)導(dǎo)致ABO和Rh血型鑒定、抗體效價(jià)和交叉配血困難。本文調(diào)查18例冷凝集素效價(jià)均大于16，效價(jià)在521～4096之間，室溫下血型鑒定正反定型結(jié)果不一致，經(jīng)過37℃水浴或洗滌后正反定型結(jié)果一致。建議在鑒定血型時(shí)遇到正反定型不符又懷疑是冷凝集素引起時(shí)，最好把標(biāo)本放在37℃水浴或用37℃生理鹽水洗滌3次。

IgM抗體是由5個(gè)免疫球蛋白單體通過二硫鍵連接起來的大分子，二巰基乙醇是巰基化合物，可滅活I(lǐng)gM抗體，使其亞單位間的二硫鍵斷裂，導(dǎo)致IgM大分子降解而失效。同時(shí)巰基化合物又可還原IgG抗體間的二硫鍵，使連接重鏈的二硫鍵被打開，使IgG抗體的兩個(gè)Fab片段間具有較大的舒展性。冷凝集素屬分子量大的完全抗體，能直接凝集紅細(xì)胞。本文18例受冷凝集素影響的ABO正反定型病例，通過二巰基乙醇滅活后使IgM抗體聚合力喪失，從而使正反定型結(jié)果一致。有資料顯示，血清中的抗-A、抗-B、抗-AB抗體大多數(shù)是IgM性質(zhì)的抗體，也有IgG成分，在正常獻(xiàn)血員中，IgG1和IgG2多于IgG3和IgG4，因此IgG成分的反定型通過間接抗人球蛋白試驗(yàn)會(huì)得出與正定型一致的結(jié)論。劉建平等唾液、二巰基乙醇處理血清IgM、IgG效果分析顯示，二巰基乙醇有對(duì)高效價(jià)的IgM去除不徹底的情況，但處理后不影響IgG效價(jià)的測(cè)定。本文結(jié)果與報(bào)道相似，所以二巰基乙醇處理后的18例血清因IgM去除不徹底而直接離心得出有A、B、O、AB血型，但不影響IgG效價(jià)的測(cè)定，所以反定型通過間接抗人球蛋白試驗(yàn)后會(huì)得出與正定型一致的結(jié)論。

若因高效價(jià)冷凝集素影響血型鑒定和交叉配血，最好用上述幾種方法配合應(yīng)用，以便輸血能順利、安全進(jìn)行。本組18例患者經(jīng)上述處理后，輸注相合的血液后，沒有發(fā)生輸血反應(yīng)，配血逐漸得到改善，患者病情得到緩解。

［1］林國連，詹奕榮，等.冷凝集素對(duì)血型鑒定和交叉配血的影響相關(guān)研究分析.河北醫(yī)學(xué)，2010，16(3):302-304.

［2］姜燕娟，龐佳芝，張趁利.高效價(jià)冷自身抗體引起血型鑒定及配血困難1例.臨床血液學(xué)雜志，2008，21(10):520.