功勞木的化學(xué)成分研究

叢 悅， 王 艷， 王天曉， 李 欽

(河南大學(xué)藥物研究所，河南開封 475004)

功勞木為小檗科植物闊葉十大功勞Mahonia bealei(Fort)Carr.的干燥莖。廣泛分布于我國長江以南各省。功勞木味苦，寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，主治濕熱瀉痢、黃疸、目赤腫痛、瘡癤、癰腫、黃疸型肝炎。功勞木也是傣族民間用藥，單用治療肝炎。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)功勞木具有抗癌、抗菌、消炎、抗病毒、抗心律失常、降血糖等藥理活性［1－4］。本實驗采用多種柱色譜手段對功勞木70%乙醇提取物的化學(xué)成分進行了分離純化得到8個化合物，其中化合物1～4皆為首次從該屬植物中分離得到，并且發(fā)現(xiàn)化合物3、6、8顯示出不同程度的抑制肝癌HepG2細胞活性。

1 材料

閃式濃縮器(金鼐科技);AVANCE400M型核磁共振儀(德國Bruker公司);硅膠G，粒度200～300目(青島海洋化工廠)。大孔樹脂(滄州寶恩化工有限公司);葡聚糖凝膠Sephadex LH－20(GE Healthcare);所有化學(xué)試劑均為分析純。

實驗樣品購于安徽亳州藥材市場，由河南大學(xué)藥學(xué)院中藥研究室袁王俊副教授鑒定為闊葉十大功勞Mahonia bealei(Fort.)Carr.的干燥莖。

2 提取分離

功勞木干燥莖(切片)7.0 kg，用34 L 70%乙醇加熱提取，提取5次，每次2.5 h，合并提取液，減壓濃縮回收乙醇，得到乙醇提取物900 g，提取物經(jīng)硅膠干柱色譜分離，用三氯甲烷－甲醇－水(8∶2∶0.2)展開，均分為8份，每份均用三氯甲烷－甲醇(3∶2→甲醇)梯度洗脫，回收溶劑濃縮。第2份經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚－丙酮(10∶1→9∶1)梯度洗脫分離得化合物5(20 mg)，第3、4、5份合并經(jīng)硅膠柱色譜，用三氯甲烷－甲醇(200∶1→甲醇)梯度洗脫，500 mL/餾份，第85～89餾份經(jīng)反復(fù)硅膠柱和大孔樹脂柱分離，10%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱純化，洗脫劑三氯甲烷－甲醇(12∶1)得化合物7(62 mg)。第135～137餾份經(jīng)大孔樹脂柱，10% ～20%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱純化，洗脫劑為正丁醇－冰乙酸－水(7∶2∶1)得化合物6(50 mg);30%乙醇洗脫部分用甲醇洗滌得沉淀，經(jīng)葡聚糖凝膠LH－20純化得化合物3(15 mg)。第166～173餾份經(jīng)硅膠柱色譜，洗脫劑為石油醚－丙酮(4∶6)，得化合物2(10 mg)。第177～181餾份經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚－丙酮－甲醇(6∶4∶1→2∶3∶2)系統(tǒng)梯度洗脫，其中第8份經(jīng)硅膠柱純化，洗脫劑石油醚－乙酸乙酯－甲醇(4∶6∶0.8)得化合物4(24 mg)。第205餾份用35%甲醇水重結(jié)晶得化合物1(150 mg)。第212～213餾份經(jīng)大孔樹脂柱，5% ～10%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，洗脫劑為三氯甲烷－甲醇(8∶2)洗脫(加少量36%乙酸，100 mL洗脫液加1 mL 36%乙酸)，得化合物8(76 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末，ESI－MSm/z:429.1［M+Na］+，1H－NMR(C5D5N，400 MHz)δ:6.92(2H，s，H－2，6)，5.83(1H，Glc－1)，4.94(1H，d，J=3.6 Hz，H－7)，4.03(1H，d，J=3.2 Hz，Glu－6)，4.20～4.41(6H，m，Glc－2，Glc－3，Glc－5，8，9)，3.93(1H，m，Glc－6)，3.15(1H，m，Glc－4)，3.79(6H，2 × OCH3)。13C NMR(C5D5N，100 MHz)δ:153.7(C－3，5)，138.1(C－4)，135.2(C－1)，104.7(Glc－1)，104.6(C－2，6)，86.0(C－7)，71.3(C－8)，54.6(C－9)，56.4(2 × OCH3)，62.3(Glc－6)，72.0(Glc－4)，75.8(Glc－2)，78.1(Glc－3)，78.4(Glc－5)。經(jīng)與文獻［5］數(shù)據(jù)對照基本一致，因此鑒定該化合物為erythro－syringoylglycerol 8－O-β－D－glucoside。

化合物2 白色針晶，mp 200～202℃。ESI－MSm/z:369.2［M+Na］+，1HNMR(C5D5N，400 MHz)δ:6.78(2H，s，H－2，6)，5.60(1H，m，Glc－1)，3.83(3H，s，OCH3)，3.71(6H，s，2 × OCH3)。13C NMR(C5D5N，100 MHz)δ:155.0(C－1)，154.0(C－3，5)，133.7(C－4)，102.7(Glc－1)，95.2(C－2，6)，78.9(Glu－5)，78.5(Glc－3)，74.8(Glc－2)，71.4(Glc－4)，62.3(Glc－6)，60.4(OCH3)，55.7(2 ×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］報道3，4，5－三甲氧基苯酚 1－O-β－D－葡萄糖苷一致。

化合物3 白色粉末，ESI－MSm/z:417.0［MH］－，1H－NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.60(2H，s，H－2′，6′)，6.59(2H，s，H－2，6)，4.85(1H，d，J=5.2 Hz，H－7)，4.42(1H，d，J=7.2 Hz，H－7′)，4.14(1H，d，J=9.6 Hz，Ha－9′)，3.90(12H，s，3，3′，5，5′－OCH3)，3.86(2H，m，Hb－9，9′)，3.33(1H，m，H－8)，3.33(1H，m，Ha－9)，2.90(1H，m，H－8′);13C－NMR(CDCl3，100 MHz)δ:147.1(C－3′，5′)，147.0(C－3，5)，134.3(C－4′)，133.6(C－4)，132.1(C－1′)，129.4(C－1)，102.8(C－2′，6′)，102.3(C－2，6)，87.9(C－7′)，82.2(C－7)，71.0(C－9′)，69.7(C－9)，56.3(3，3′，5，5′－OCH3)，54.6(C－8′)，50.1(C－8)。結(jié)合文獻［7］推斷其結(jié)構(gòu)為表丁香脂素。

化合物4 白色粉末，ESI－MSm/z:605［M+Na］+，1H－NMR(DMSO，400 MHz)δ:8.20(1H，s，OH)，6.53(2H，s，H－2，6)，6.51(2H，s，H－2′，6′)，4.84(1H，d，J=7.2 Hz，Glc－1)，4.65(1H，d，J=6.0 Hz，H－7)，3.91(1H，m，H－9′b)，3.67(1H，m，H－9b)，3.59(1H，m，H－9′a)，3.48(1H，m，H－9a)，2.63(1H，m，H－8′)，2.86(1H，dd，J=4.8，4.4 Hz，H－7′b)，2.46(1H，m，H－7′a)，2.22(1H，m，H－8)，3.74(2 × OCH3)，3.73(2 ×OCH3)，3.03 ～ 4.28(6H，m，Glc－2 ～ Glc－6)。13CNMR(DMSO，100 MHz)δ:152.4(C－3′，5′)，147.7(C－3，5)，136.6(C－4，1′)，132.6(C－1，4′)，106.7(C－2′，6′)，103.1(C－2，6)，102.7(Glc－1)，81.8(C－7)，77.0(Glc－5)，76.4(Glc－3)，74.1(Glc－2)，71.7(C－9′)，69.8(Glc－4)，60.7(Glc－6)，58.5(C－9)，52.3(C－8)，41.6(C－8′)，32.8(C－7′)，56.2(2 × OCH3)，55.8(2 × OCH3)。1H－NMR、13C－NMR數(shù)據(jù)和文獻報道［8］基本一致，故確定為5，5′－二甲氧基落葉松脂醇 4′－O－β－D－葡萄糖苷。

化合物5 無色針狀結(jié)晶，與β－谷甾醇對照品共薄層色譜，Rf值一致。鑒定該化合物為β－谷甾醇。

化合物6 黃色針晶，mp 189℃ ～191℃，碘化鉍鉀顯色陽性。與小檗堿對照品對照，硅膠薄層色譜 Rf值完全一致。1H－NMR，13C－NMR 數(shù)據(jù)和文獻報道［9－10］基本一致，故確定為小檗堿(berberine)。

化合物7 黃色針晶，mp 194℃ ～196℃，碘化鉍鉀顯色陽性。ESI－MSm/z:353［M+H］+，1HNMR(DMSO，400 MHz)δ:9.86(1H，s，H－8)，9.00(1H，s，H－13)，8.20(1H，d，J=9.2Hz，H－12)，8.02(1H，d，J=9.2Hz，H－11)，7.69(1H，s，H－4)，7.08(1H，s，H－1)，4.93(2H，t，J=6.4 Hz，H－6)，4.09，4.06，3.93，3.86(4 × 3H，4 ×OCH3)，3.22(2H，t，J=6.4 Hz，H－5)，3.38(水峰)。13C－NMR(DMSO，100 MHz)δ:151.4(C－9)，150.2(C－3)，148.6(C－2)，145.3(C－13a)，143.5(C－10)，137.6(C－8)，133.0(C－12a)，128.5(C－13)，126.7(C－4a)，123.3(C－12)，121.3(C－4b)，119.8(C－8a)，118.8(C－1)，111.2(C－4)，108.6(C－11)，61.8(－OCH3)，56.9(C－6)，56.0(－OCH3)，55.8(－OCH3)，55.3(－OCH3)，25.9(C－5)。1H－NMR，13C－NMR 數(shù)據(jù)和文獻［9－10］報道基本一致，故確定為巴馬汀(palmatine)。

化合物8 黃色針晶，mp 198℃ ～199℃，碘化鉍鉀顯色陽性。ESI－MSm/z:339［M+H］+，1H－NMR(DMSO，400 MHz)δ:10.09(1H，s，OH)，9.85(1H，s，H－8)，9.00(1H，s，H－13)，8.20(1H，d，J=9.2 Hz，H－12)，8.02(1H，d，J=9.2 Hz，H－11)，7.70(1H，s，H－4)，6.87(1H，s，H－1)，4.91(2H，t，J=6.4 Hz，H－6)，3.14(2H，t，J=6.4 Hz，H－5)，4.09，4.06，3.94(3 ×3H，3 ×OCH3)。13C－NMR(DMSO，100 MHz)δ:150.6(C－9)，150.5(C－3)，148.3(C－2)，145.6(C－13a)，144.0(C－10)，138.6(C－8)，133.7(C－12a)，129.3(C－13)，127.2(C－4a)，123.7(C－12)，121.6(C－4b)，119.8(C－8a)，117.4(C－1)，115.4(C－4)，109.9(C－11)，62.3(－OCH3)，57.5(C－6)，56.7(－OCH3)，49.0(－OCH3)，26.2(C－5)。1H－NMR，13CNMR數(shù)據(jù)和文獻報道［9－10］基本一致，故確定為藥根堿。

4 體外抗腫瘤活性

應(yīng)用 MTT方法［11］檢測化合物1～8對肝癌HepG2細胞的抑制作用。化合物 3，6，8對肝癌HepG2 細胞的 IC50值分別為 86.5，13.3，54.6 μM/L。其余化合物IC50值均大于100 μM/L。陽性對照絲裂霉素對肝癌 HepG2細胞的 IC50為1.62 μM/L。結(jié)果顯示，化合物3，6，8對肝癌HepG2細胞具有不同程度的抑制作用，其中小檗堿活性最強。

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