中藥復方顆粒劑對肉仔雞腸道菌群的影響

趙 娟,賀東昌,武果桃,張李俊,姚敬明,薛俊龍,任 杰,劉文俊,隋 超

(山西省農業科學院畜牧獸醫研究所,山西太原 030032)

肉仔雞腸道內的益生菌菌群的平衡,可促進胃腸蠕動,幫助消化食物,代謝藥物和有害外源物,其代謝產生的有機酸,降低腸道pH值,其酸性環境可抑制有害菌群,阻止病原菌侵入,對抗病防病,增強免疫力,具有極其重要的作用[5]。其代謝產生的必需氨基酸和多種維生素具有豐富的營養價值[1]。本研究擬進一步考察中藥復方顆粒劑對肉仔雞腸道大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌數量的影響,為中藥復方的抗菌防腹瀉作用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 中藥復方制備 中藥復方由北黃芪、黨參、炒白術、枸杞、茯苓、炒山楂、炒麥芽、炒神曲、淮山藥、金銀花、黃芩和連翹等組成,山西省農業科學院畜牧獸醫研究所中獸醫藥研究室研制,山西省中醫研究所煎制。

1.2 抗生素的配制 廣譜抗生素鹽酸林可霉素用pH值7.4的生理鹽水配制成濃度為100 mg/m L待用。

1.3 試驗動物飼養管理及處理 試驗選用大腸桿菌感染腹瀉的25日齡肉仔雞300只,隨機分為3組,每組100只,分群飼養,Ⅰ組只添加抗生素,即上述配好的廣譜抗生素鹽酸林可霉素溶液,以0.5 m L/只飲水,3次/d,間隔 8 h,連用14 d,期間觀察臨床癥狀。Ⅱ組為中藥復方顆粒劑治療組,即采用日糧中添加2%中藥復方顆粒劑,連續添加14 d。Ⅲ組為不用任何藥品治療的空白對照組。

1.4 腸道大腸桿菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌數量測定

在治療前,及治療開始后第7天,第14天和第21天時,每個處理組隨機抽取10只雞,處死后無菌采集空腸、回腸和盲腸內容物,每個試驗組各腸段病料分別混勻,分別精確稱取0.5 g放入無菌試管中,加入4.5 m L無菌稀釋液(營養肉湯)并在漩渦混勻器上混勻制成10-1稀釋液,再吸取0.5m L該稀釋液,用4.5 m L無菌稀釋液稀釋成10-2稀釋液,用同樣的方法制得 10-3～10-6倍稀釋液,分別吸取10-3～10-6稀釋度的稀釋液0.1 m L均勻涂于培養基上,每個稀釋度接種3個培養基的平皿,大腸桿菌會生長于伊紅美藍瓊脂(EMB)培養基,雙歧桿菌會生長于Blb培養基和乳酸桿菌會生長于(LBS)培養基平板上,大腸桿菌在普通溫箱中37℃培養48 h,雙歧桿菌和乳酸桿菌在厭氧條件下37℃培養72 h后進行菌落計數,細菌數量采用平板劃線菌落計數法進行統計,最后用1 g腸道內容物中細菌個數的對數(logCFU)/g表示。即每克樣本所含細菌數=菌落數均值×稀釋倍數/樣品重量[2-4]。

1.5 統計分析 測定結果應用SPSS 1.0軟件進行方差分析,結果以平均數±標準差表示。

2 結果

2.1 治療前肉仔雞腸道內大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌數量的測定結果見表1。

表1 治療前菌種含量的測定

由表1可以看出,各組各腸段大腸桿菌含量較高,雙歧桿菌和乳酸桿菌含量較低。腸道菌群失衡。

2.2 試驗開始第7天時肉仔雞腸道內大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌數量的測定結果見表2。

由表2可以看出,試驗開始后第7天時,中藥復方組各腸段內容物中大腸桿菌數量顯著小于空白對照組(P＜0.05);單純抗生素組空腸和回腸內容物中大腸桿菌數量顯著小于空白對照組(P＜0.05);中藥復方組空腸和回腸內容物中雙歧桿菌和乳酸桿菌數量極顯著大于單純抗生素組(P＜0.01),并顯著大于空白對照組(P＜0.05);抗生素組各腸段乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量顯著低于對照組(P＜0.05)。

表2 治療第7天時菌種含量的測定

2.3 試驗開始第14天時肉仔雞腸道內大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌數量的測定結果見表3。

表3 治療第14天時菌種含量的測定

由表3可以看出,第14天時,中藥復方組和抗生素組空腸和回腸內容物中大腸桿菌數量均顯著小于對照組(P＜0.05);中藥復方組盲腸內容物中大腸桿菌數量小于抗生素組及空白對照組(P＜0.05);中藥復方組各腸段內容物中雙歧桿菌和乳酸桿菌數量極顯著大于抗生素組(P＜0.01),并顯著大于空白對照組(P＜0.05);抗生素組各腸段乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量顯著小于對照組(P＜0.05)。

2.4 試驗開始第21天時肉仔雞腸道內大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌數量的測定結果見表4。

表4 治療第21天時菌種含量的測定

由表4可以看出,第21天時,中藥復方組和抗生素組各腸段內容物中大腸桿菌數量均極顯著小于空白對照組(P＜0.01);中藥復方組和抗生素組各腸段內容物中大腸桿菌數量差異不顯著(P＞0.05);中藥復方組各腸段內容物中雙歧桿菌和乳酸桿菌數量極顯著大于抗生素組(P＜0.01),并顯著大于空白對照組(P＜0.05);抗生素組各腸段乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量顯著低于空白對照組(P＜0.05)。

3 討論

3.1 在本試驗中,抗生素治療組各腸段各時期大腸桿菌,雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量均顯著小于空白對照組(P＜0.05)。雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量極顯著小于中藥復方組(P＜0.01),分析主要是因為抗生素在抑制和殺滅病原微生物的同時,也破壞腸道正常菌群,導致動物腸道正常微生物菌群減少,破壞動物微生態平衡,而微生態平衡一旦破壞,動物就會消化能力降低,抗病力減弱繼而造成疾病和死亡。

3.2 在本試驗中,與抗生素組及對照組相比,中藥復方組不同腸段雙歧桿菌和乳酸桿菌含量每個時間點均顯著上升(P＜0.05),大腸桿菌含量均顯著下降(P＜0.05),表明該中藥復方能夠促進腸道有益菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長,抑制有害菌大腸桿菌的繁殖。分析主要是因為中藥對病原微生物也有抑殺作用,但不像抗生素那樣斬盡殺絕,而往往比較寬容,而中藥對致病微生物的這種寬容,正好使少量病原微生物留在動物體內,不僅不會致病,還可以成為抗原,刺激動物產生抗體[8]。同時也保護了胃腸道正常菌群的存活[3,6-7],有效提高腸道健康。并因其具有天然性和多功能性的優勢,對于防治動物疾病保護畜禽健康,促進養殖業的發展具有重要意義。

志謝:本試驗由西北農林科技大學教授王建華老師及博士余永濤協作完成。

[1] 蘇勇,朱偉云.仔豬哺乳期和斷奶后胃中細菌和乳酸桿菌菌群的變化[J].腸外與腸內營養,2006,13(1):1-4.

[2] 王金全,蔡輝益,周巖華,等.小麥日糧非淀粉多糖和木聚糖酶對肉仔雞腸道微生物區系的影響[J].畜牧獸醫學報,2005,36(10):1014-1020.

[3] 曹國文,曾代勤,戴榮國,等.中草藥添加劑對斷奶豬腸道菌群與生產性能的影響[J].中國獸醫科技,2003,33(11):54-58.

[4] 朱偉云,姚文,毛勝勇.變性梯度凝膠電泳法研究斷奶仔豬糞樣細菌區系變化[JJ.微生物學報,2003,43(4):503-508.

[5] MUYZER G,SMALLA K.Application of denaturing g radient gel electrophonesis(DGGE)and temperature gradient gel electrophonesis(TGGE)in m icrobial ecology[J].Antonie Van I Leeuw enhoek,1998,73:127-141.

[6] 田碧文,胡宏.阿膠、五味子、刺五加、枸杞對雙歧桿菌生長的影響[J].中國微生物學雜志,1996,8(2):211-213.

[7] 嚴梅楨,宋月紅.四君子湯對實驗性小白鼠腸道菌群的影響[J].中國微生物學雜志,1989,1(1):40.

[8] Jacobs L R,H am pson D J.A ltcRations in piglet small intestinal strusture at weaning[J].Research in veterinary science,1986,40:32-41.