內關穴位注射香丹注射液預處理對急性心肌缺血大鼠TNF-α、VEGF的影響

陳 琪，李勝濤，陳志偉，

（1.重慶市長壽區人民醫院中西醫結合科，重慶 401220；2.湖北黃石市中醫院，黃石 435100；3.成都中醫藥大學，成都 610075）

內關穴位注射香丹注射液預處理對
急性心肌缺血大鼠TNF-α、VEGF的影響

陳 琪1，李勝濤2，陳志偉3，

（1.重慶市長壽區人民醫院中西醫結合科，重慶 401220；2.湖北黃石市中醫院，黃石 435100；3.成都中醫藥大學，成都 610075）

[目的]探討內關穴位注射香丹注射液對大鼠急性心肌缺血腫瘤壞死因子ɑ（TNF-ɑ）、血管內皮生長因子（VEGF）的影響。[方法]SD大鼠內關穴注射香丹注射液14 d，然后腹腔皮下注射異丙腎上腺素（ISO）造成急性心肌缺血模型，免疫組化法檢測心肌TNF-ɑ、VEGF。[結果]1）TNF-α在心肌缺血后表達增多，內關組、曲池組及藥物組均可以降低其表達，內關組的這一作用明顯優于曲池組及藥物組。2）VEGF在心肌缺血后表達有所增高，藥物組和曲池組可以明顯增高其表達，與內關組比較有統計學意義。[結論]內關穴位注射香丹注射液預處理對急性心肌缺血大鼠的心肌具有保護作用，它可以降低TNF-α含量，增高VEGF的表達。

內關；穴位注射；預處理；心肌缺血；TNF-ɑ；VEGF

從20世紀90年代起，越來越多的證據表明動脈粥樣硬化（AS）是血管壁的慢性炎癥，是對血管壁損害的反應。各種炎癥因子在其中起著復雜的作用。冠心病（CHD）患者腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的水平比對照組均顯著增高，并隨著冠脈病變加重、冠脈受累范圍的增加而逐漸升高，說明炎癥反應可能參與了CHD的發生、發展。血管內皮生長因子（VEFG）是一種高度特異性促血管生長因子，可直接誘導血管平滑肌細胞和血管內皮細胞增殖與血管化，產生心肌梗死區域新生血管的效應，而CHD患者VEGF水平變化與機體缺血缺氧密切相關。本實驗采用大鼠急性心肌缺血模型，觀察內關穴位注射香丹注射液對大鼠心肌缺血TNF-ɑ、VEGF的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑 TNF-ɑ、VEGF試劑盒（購自北京中杉生物科技有限公司）、10%水合氯醛、10%福爾馬林液，異丙腎上腺素（ISO）（上海禾豐制藥有限公司生產，2 mL∶1 mg/支，批號：071201，國藥準字：H31021344），香丹注射液（湖北清大康迪藥業有限公司生產，2 mL/支，批號：20070404，國藥準字：Z42020391），復方丹參滴丸（天津天士力聯合制藥股份有限公司生產，27mg/粒，批號：20071009。國藥準字：Z10950111），生理鹽水等。

1.2 動物模型的建立及分組 SD大鼠50只，體質量200～300 g，雌雄各半，由成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供。適應性喂養1周后，按動物體質量、性別隨機分為5個組，10只/組。空白組：正常飼養，不給予任何處理。模型組：正常飼養14 d，末次喂飼后24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg造成急性心肌缺血模型[1]。藥物組：每天給予復方丹參滴丸270 mg/kg（相當于人用量的20倍）灌胃。共14 d，末次灌胃24h后皮下注射ISO2mg/kg。曲池組：用5號注射針頭垂直刺入一側曲池穴3～4 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天換另一側曲池穴位注射，1次/d，共14 d，末次注射24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg。內關組：用5號注射針頭垂直刺入一側內關穴1～2 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天換另一側內關穴，1次/d，共14 d，末次注射 24 h后皮下注射 ISO（2 mg/kg）。預處理及造模過程中有部分動物死亡，最后取得38份標本。

1.3 標本采集與檢測方法 注射ISO 24 h后，用10%水合氯醛（按400 mg/kg量腹腔注射）麻醉大鼠，取出心臟，置10%甲醛溶液中固定。免疫組化法檢測TNF-α及VEGF。SP染色，在顯微鏡200倍下用圖形分析系統定量觀察。測量單位視野染色區域的面積，積分吸光度。

1.4 統計學處理方法 采用SPSS 13.0統計軟件，實驗數據以均數±標準差（±s）表示，多組計量資料采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。

2 結果

結果見表1、表2。

表1 各組TNF-α比較(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

表1 各組TNF-α比較(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

注：與空白組比較，＃＃P<0.01，＃P<0.05；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05；與藥物對照組比較，△P<0.05；與曲池組比較，▲▲P<0.01，▲P<0.05。

組別空白組模型組藥物組曲池組內關組n 8 8 6 8 8面積（μm2）243 132.88±33 386.34 669 586.38±45 304.84＃＃562 090.33±53 431.40＃＃566 980.38±75 662.04＃＃370 270.25±21 241.43**△▲▲積分吸光度（PU）67 624.36±8 782.48 180 405.90±16 324.16＃＃130 445.00±27 955.23＃*156 330.50±20 338.44＃＃105 628.30±63 09.94**▲

表2 各組VEGF比較(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

表2 各組VEGF比較(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

注：與空白組比較，＃＃P<0.01，＃P<0.05；與模型組比較，**P<0.01；與藥物對照組比較，△△P<0.01；與曲池組比較，▲▲P<0.01。

組別空白組模型組藥物組曲池組內關組n 8 8 6 8 8面積（μm2）182 810.30+32 698.37 287 777.80±80 996.40 569 483.50±60 267.23＃＃**619 204.80±54 823.55＃＃**316 218.90±18 639.69△△▲▲積分吸光度（PU）50 356.94±8 367.86 89 092.16±19 172.22＃148 815.30±13 641.23＃＃**155 843.80±12 714.25＃＃**85 198.00± 4 938.60△△▲▲

3 討論

TNF-α可通過多種機制促進AS的發生與發展，誘導急性冠脈癥狀和炎癥反應的產生。實驗發現主動脈弓內膜增厚，動脈粥樣斑塊明顯的實驗組TNF-α較對照組明顯升高，說明TNF-α與AS的發生有密切關系。TNF-α在CHD、高血壓患者中升高，與血管疾病的發生密切相關。在穩定性心絞痛（SA）組明顯高于正常對照組；而急性心肌梗死（AMI）組和不穩定性心絞痛（UA）組又明顯高于正常對照組和SA組，說明血清TNF-α水平與心肌缺血的程度有關，一定意義上反映了冠脈病變的嚴重程度，是反映心肌缺血的良好指標。正常心肌細胞產生極微量的TNF-α，但在CHD狀態下，心肌細胞受多種因素的刺激而產生TNF-α，并可通過作用于自身TNF-α受體，大量誘導的NO（一氧化氮）作用于心肌細胞、EC（內皮細胞）的Fas/Fas配體(FasL)系統而使細胞發生凋亡。本研究發現，TNF-α在心肌缺血后表達明顯增高，內關組預處理后表達明顯降低。

VEGF在正常情況下人體中含量很低，心肌缺血缺氧時，VEGF及VEGF mRNA表達增加，提示缺血和缺氧是刺激VEGF表達增加的重要因素。在AMI患者中VEGF明顯增加，高于SA患者，且VEGF逐漸升高，在2周時達到最高峰，其峰值與梗死范圍相關，在1～2周內VEGF的高水平引起側支循環形成。隨著缺氧時間延長，心肌產生的VEGF增加，缺血時間與VEGF產生量呈正比。冠狀動脈狹窄程度越重，病變累及的血管越多，血清VEGF升高越顯著。一旦冠狀動脈狹窄解除，血清VEGF水平迅速下降至正常。本研究顯示，VEGF在心肌缺血后與空白組比較有增高趨勢，但無統計學意義，在藥物組、曲池組、內關組的表達較空白組明顯增高；藥物組、曲池組較內關組VEGF增高更為顯著。

內關是手厥陰心包經的絡穴，同時又是八脈交會穴之一，通于陰維脈，為歷代醫家治療心痛病癥之要穴。既往已有的臨床和實驗研究證實針刺內關對于減輕、緩解心絞痛有確切作用。本研究顯示內關組預處理對急性心肌缺血大鼠的心肌具有保護作用，可以降低心肌TNF-α含量，增高VEGF的表達，減輕心肌組織在急性心肌缺血中的損傷。

[1] 吳雪茹,吳啟端,匡忠生,等.瓜薤葛丹湯抗大鼠心肌缺血的作用研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(3):203-205.

The effects of pretreatment with acupoint injection of Xiangdan injection at Neiguan(PC6)on TNF-α,
VEGF in rats with acute myocardial ischemia

CHEN Qi1,LI Sheng-tao2,CHEN Zhi-wei3
（1.People's Hospital of Chongqing Changshou District,Chongqing 401200,China;2.Huangshi Hospital of TCM in Hubei,Huangshi435100,China;3.Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China）

[Objective]To explore the influence on myocardial ischemia by testing TNF-ɑ and VEGF in the rats pre-injected with Xiang-Dan injection into PC6.[Methods]SD rats were

XiangDan injection into PC6 for 14 days,followed by subcutaneous isoprenaline injection at abdomen to inducing myocardial ischemia.TNF-ɑ and VEGF expression were tested with immunohistochemical assay.[Result]The content of TNF-α was decreased in PC6 group,Drug group and LI11 group.The method of pre-injection of XiangDan injection into PC6 was more effective than Drug group and LI11 group in protecting the myocardium tissue from ischemia and anoxia.The content of VEGF in model group was higher than that of normal group.The content of VEGF was also increased significantly in drug group and LI11 group.Compared with PC6 group statistical significance was obvious.[Conclusions]The method of XiangDan pre-injection into PC6 acupoint can protect the myocardium from ischemia and anoxia.It can decrease the level of TNF-α and increase the contents of VEGF.

PC6；acupoint injection；preconditioning；myocardial ischemia；TNF-ɑ；VEGF.

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0067-03

陳 琪（1983－），女，碩士，醫師，研究方向為針藥結合防治老年性疾病的臨床及實驗研究。

李勝濤。

2010-06-30）