中藥菟絲子鹽制工藝研究*

郜新蓮，劉艷芳，張振凌

菟絲子為旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子，味甘、溫，歸肝、腎、脾經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉的作用。菟絲子既是一種惡性寄生植物，又是一種名貴的藥用植物，臨床用于陽痿遺精、尿有余瀝、遺尿尿頻、腰膝酸軟、目暈耳鳴、腎虛胎漏、胎動(dòng)不安、脾腎虛瀉及外治白癜風(fēng)。由于菟絲子質(zhì)地堅(jiān)硬，又較細(xì)小，煎出效果差，且不易粉碎，故無論臨床配方入煎劑還是成藥制劑生產(chǎn)，多以鹽制和酒制炮制后較為常見［1］。目前對(duì)菟絲子的研究多集中于菟絲子藥材的化學(xué)成分和藥理研究方面［2］，而對(duì)炮制工藝的研究和炮制機(jī)理的探討及系統(tǒng)研究則相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)室以不同炮制因素對(duì)菟絲子化學(xué)成分進(jìn)行比較研究說明，鹽制炮制能提高菟絲子槲皮素含量，但不同炮制因素對(duì)其含量也有一定程度的影響，故有必要進(jìn)行工藝條件的研究。本文采用正交試驗(yàn)，以槲皮素含量為指標(biāo)，考察烘制溫度、烘制時(shí)間、悶潤時(shí)間不同水平，優(yōu)選菟絲子鹽制炮制工藝。

1 儀器與材料

1.1 儀器

燒杯、量筒(100mL)、托盤、RAYST30XXAP激光測(cè)溫儀(北京雷泰光電技術(shù)有限公司)，GHG-9076A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，F(xiàn)R-高精度電子廚房秤(佛山市順德區(qū)拓普域電子有限公司)，SHIMADZU LC-2010T高效液相色譜儀，Mettler AE240型十萬分之一電子天平(瑞士)，TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)，HH-S型恒溫水浴鍋(北京中興有限公司)，Sartorius BS210S型萬分之一電子天平(北京 SARTORIUS 有限公司，max210g，d 0.1mg)，蒸發(fā)皿、索氏回流提取器、移液管、冷凝管等(天津玻璃儀器廠)。

1.2 材料

1.2.1 藥材 菟絲子藥材采購于河南藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為旋花科植物菟絲子 Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子。

1.2.2 食用鹽 河南省鹽業(yè)總公司(批號(hào)20090124)，5倍量水溶解、備用。

1.3 試劑

槲皮素對(duì)照品，中國藥品生物制品檢定所(批號(hào)100081-200406);色譜純甲醇，天津市四友精密化學(xué)品有限公司(批號(hào)090210)，甲醇，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心(批號(hào)20080115，分析純)。雙蒸水、磷酸，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠(批號(hào)050304)。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 表1顯示，由于菟絲子質(zhì)地堅(jiān)硬，食鹽用量不宜太多，故不再考慮。僅以烘制溫度、烘制時(shí)間、悶潤時(shí)間為因素，每個(gè)因素各取3個(gè)水平，選用L9(34)正交試驗(yàn)表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

表1 菟絲子鹽制工藝因素水平表

2.1.2 正交試驗(yàn)樣品的炮制 稱取菟絲子飲片各50g，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的鹽水，拌勻、悶潤，將悶潤好的飲片均勻平鋪至瓷盤內(nèi)，放入烘箱以不同的烘制溫度，烘制不同時(shí)間，取出放涼、粉碎、過40目篩，即得。

2.2 槲皮素含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Synergi 4u Hydro-Rp 80A(4.6×250mm)，流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)，流速:1mL/min，柱溫:35℃，檢測(cè)波長:360nm。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取藥材粉末0.5g，精密稱定置100ml具塞錐形瓶中，加入80%甲醇50ml稱定重量，超聲提取20min取出靜置，補(bǔ)足重量、過濾，用移液管精密移取10ml續(xù)濾液，放至蒸發(fā)皿中揮盡溶劑，加80%甲醇定容至2ml容量瓶中，搖勻即得。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對(duì)照品 2.33mg，加 80%甲醇溶液溶解，定容于100ml容量瓶中搖勻，配成濃度為0.0233mg/ml的槲皮素對(duì)照品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 表2圖1顯示，取槲皮素對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取1、5、10、15、20、25、35μL 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以槲皮素含量x(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算回歸方程為 y=3958949x－51803，r=0.9999。結(jié)果表明，槲皮素在0.0233～0.8152μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2 槲皮素線性范圍試驗(yàn)

圖1 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2.5 精密度試驗(yàn) 表3顯示，精密吸取同一供試品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣 6次，依法操作測(cè)定 6次，RSD=0.75%。結(jié)果表明，精密度良好。

表3 精密度試驗(yàn)

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 表4顯示，精密吸取同一供試品溶液 10μl，每隔 2h測(cè)定其峰面積，RSD為1.32%。結(jié)果表明，樣品溶液在0～24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 表5顯示，取同一批樣品，按供試品溶液的制備方法平行制備6份，精密吸取上述供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，RSD為1.36%。結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

表5 重復(fù)性試驗(yàn)

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 表6顯示，取同一供試品粉末(過40目篩)約0.25g共6份，精密稱定，分別置于錐形瓶中，加入0.1310mg/ml槲皮素對(duì)照品溶液1ml，其余按照供試品溶液制備項(xiàng)下同法操作，得各供試品溶液。分別精密吸取各加樣回收供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測(cè)定含量，得平均回收率為98.96%，RSD=1.05%。

表6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 菟絲子鹽制工藝正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表7、8顯示，因素 A、B、C即烘制溫度，烘制時(shí)間和悶潤時(shí)間均無顯著影響。結(jié)合直觀分析表，確定菟絲子鹽制的炮制工藝是A2B3C1，即悶潤1h后在160℃烘箱中烘制60min。

表7 菟絲子鹽制工藝正交設(shè)計(jì)與結(jié)果表

表8 方差分析結(jié)果

2.4 菟絲子鹽制優(yōu)選炮制工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

表9顯示，取菟絲子約50g，按優(yōu)選出的炮制工藝炮制。取鹽制品粉末1.5g分3份，平行操作，制備樣品溶液進(jìn)行高效液相檢測(cè)。結(jié)果表明，菟絲子鹽制優(yōu)選炮制工藝具有可行性與準(zhǔn)確性。

表9 優(yōu)選鹽制炮制工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討論

3.1 菟絲子在臨床上用于陽痿遺精、尿有余瀝、遺尿尿頻、腰膝酸軟、目暈耳鳴、腎虛胎漏、胎動(dòng)不安、脾腎虛瀉等，因而菟絲子鹽制是引藥入腎。菟絲子生品中槲皮素含量較低，炮制后含量升高，并具有保肝、保腎，對(duì)心血管系統(tǒng)具有增加冠脈流量、擴(kuò)冠、降壓及強(qiáng)心、壯陽、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗衰老，提高人體免疫力、抗氧化和抗突變等作用，是菟絲子中有效成分之一［3］，因此以槲皮素含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)的方法，優(yōu)選并確定菟絲子鹽制的工藝條件，有一定的依據(jù)。本研究所選因素水平是在大量預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，證明炮制已達(dá)到最大限度保留有效成分的作用，且驗(yàn)證試驗(yàn)也進(jìn)一步證明了這一點(diǎn)，說明該炮制工藝是合理的。

3.2 菟絲子為寄生植物，文獻(xiàn)報(bào)道其活性成分不僅與品種有關(guān)，還與寄主的品種有關(guān)，進(jìn)一步研究和明確菟絲子中有效成分的含量和種類，對(duì)于菟絲子炮制規(guī)范化研究具有重要的意義。

［1］ 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.(下卷)，上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986:2007.

［2］ 葉 敏，閻玉凝，喬 梁，等.中藥菟絲子的化學(xué)成分研究［J］.中國中藥雜志，2002，7(2):115-116.

［3］ 郭 澄，王雅君，張劍萍.菟絲子的化學(xué)成分和藥理活性研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005，16(10):1035.