毛細管柱頂空氣相色譜法測定培美曲賽二鈉中有機溶劑殘留量

劉津愛，朱 梅

(中國醫藥研究開發中心有限公司，北京 102206)

培美曲賽二鈉商品名力比泰(Alimta)，是禮來公司開發的一種抗葉酸代謝的抗腫瘤藥物，通過干擾細胞復制過程中葉酸依賴性代謝過程而發揮抗腫瘤作用，在臨床上聯合順鉑用于不可切除的惡性胸膜間皮瘤的一線治療，單藥用于非小細胞肺癌二線治療[1]，臨床效果確切，備受國內外關注。因其生產工藝要用到多種溶劑(正己烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺)，為有效控制所用的溶劑殘留量以及適應生產快速檢測的要求，筆者建立了測定上述殘留溶劑的毛細管柱頂空氣相色譜法，現報道如下。

1 儀器與試藥

ShimadzugC－14A氣相色譜儀(日本島津公司)；DANI HSS86.5頂空進樣器(意大利DANI公司)；氫火焰檢測器；載氣為高純氮氣；TL 9 900色譜工作站；培美曲賽二鈉樣品(批號為20040809，20040810，20040811，由內蒙古科諾醫藥開發有限公司提供；正己烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇均為分析純(北京化工廠)，乙腈(Feisher)、N，N－二甲基甲酰胺(Dima Technology Inc.)、二甲基亞砜(天津市津科精細化工研究所)均為色譜純，水為美國Mili－Q系統純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為交聯聚乙二醇ECTM－Wax毛細管色譜柱(30 m× 0.53mm×1.20μm，Alltech Econo－CapTM)；采取程序升溫方式，起始柱溫為40℃保持10min，然后以每分鐘10℃的速率升至120℃，保持2min；瓶溫85℃，加熱時間為40 min，進樣口溫度180℃，FID檢測器溫度為180℃；分流比2∶1；柱流量為1.0mL/min；載氣為高純氮氣。各溶劑的色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 系統適用性試驗

在上述氣相色譜條件下，正己烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的保留時間分別為1.467，2.883，3.350，4.000，4.267，4.883，5.283，8.367，16.317 min；空白溶劑水不出峰，空白溶劑二甲基亞砜的保留時間為18.103 min，對正己烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的含量測定沒有影響；分離度及拖尾因子符合中國藥典的要求，其中各相鄰溶劑峰的分離度符合要求。結果見表1。理論板數均大于5 000。

2.3 溶液制備

精密稱取正己烷29mg、丙酮500mg、四氫呋喃500mg、乙酸乙酯500mg，甲醇300mg、二氯甲烷60mg、乙醇500mg、乙腈41mg、N，N－二甲基甲酰胺88mg，置同一100mL容量瓶中，加10%二甲基亞砜(DMSO)溶液稀釋至刻度，搖勻，制成對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1 mL，置10 mL容量瓶中，加10%二甲基亞砜(DMSO)至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密稱取培美曲賽二鈉0.2g，置頂空瓶中，精密加10%二甲基亞砜(DMSO)溶液2 mL使完全溶解，即得供試品溶液，加蓋，軋封。

2.4 方法學考察

線性關系考察：精密量取對照貯備液 0.5，1.5，2.5，5.0，10.0 mL，分別置50mL容量瓶中，加10%二甲基亞砜溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2mL，置頂空瓶中，加蓋，軋封，啟動進樣程序進樣，取每個濃度的3次平均峰面積(Y)對質量濃度(X，μg/mL)進行線性回歸，結果見表1。

表1 方法學考察結果

精密度試驗：精密量取線性關系考察項下2.5mL組溶液2mL 5份，分別置頂空瓶中，軋蓋，進行測定。結果見表1，表明方法精密度良好。

加樣回收試驗：精密稱取已知各有機溶劑殘留量的培美曲塞二鈉樣品9份(各約0.2g)，分別置頂空瓶中，各精密加入3個不同濃度的對照品溶液2mL，各待測溶劑的質量濃度分別為對照品溶液各溶劑質量濃度的80%，100%，120%后軋蓋。在上述色譜條件下測定，測得各溶劑的回收率結果見表1。

最低檢出濃度確定：取對照液逐步稀釋，按 S/N(信噪比)約為3時，9種溶劑的最低檢出濃度見表1。

2.5 定量下限的精密度和加樣回收試驗

以信噪比為10∶1時相應的質量濃度確定定量限，各溶劑的定量下限見表2。

表2 定量下限的精密度考察和加樣加收試驗結果(n=9)

精密稱取各溶劑適量，使溶液中正己烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺的質量濃度分別為其定量下限。精密量取2 mL分別置頂空瓶中，軋蓋，進行測定。結果精密度的 RSD見表2。

表3 樣品中殘留溶劑的測定結果(%，n=3)

精密稱取已知各有機溶劑殘留量的樣品9份(各約0.2g)，分別置頂空瓶中，各精密加入定量下限精密度考察用溶液2mL，軋蓋。在該色譜條件下測定，測得各溶劑的回收率結果見表2。

2.6 樣品含量測定

在該色譜條件下，用外標法對3個批號的培美曲塞二鈉樣品進行有機殘留量的測定。結果見表3。

3 討論

根據本品的溶解性質，分別選擇了二甲基亞砜、N，N－二甲基甲酰胺、水作為溶劑溶解樣品，經試驗證明，本品在二甲基亞砜、N，N－二甲基甲酰胺中的溶解性不好，在水中的溶解度很好，但待測溶劑正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯在水中的溶解比較差，故選擇水－二甲基亞砜混合溶液9∶1作為稀釋對照品溶液及供試品溶液的溶劑。試驗證明，本品在該溶劑中的溶解度能達到100g/L，且各待測溶劑也溶解良好，二甲基亞砜對各溶劑的測定也無干擾。

參照2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP殘留溶劑測定法[2]以及人用藥品注冊技術要求國際協調會(ICH)的對各溶劑的不同限度要求，選擇不同的質量濃度范圍對線性關系進行考察，結果各溶劑質量濃度與峰面積的呈現良好的線性關系。

曾選擇不同極性的毛細柱，如ECTM－Wax，DM－624，DB－5等不同極性的色譜柱，經試驗證明，ECTM－Wax柱能使上述各溶劑達到基線分離，故最終選擇ECTM－Wax柱。

經試驗證明，本品待測的9種有機溶劑除N，N－二甲基甲酰胺以外均能在柱溫為40℃時出峰，出峰時間在10min以內，并能達到基線分離，但N，N－二甲基甲酰胺需要較高的柱溫，故選擇梯度升溫，在溫度40℃保留10min后，以10℃/min的速度升至120℃。

對屬于鹵素的溶劑，一般采用電子捕獲檢測器(ECD)檢測，以便獲得更高的相應值。由于二氯甲烷的限度為600×10－6，FID的靈敏度也可以滿足測定要求。另外從生產控制上來說，同時測定待檢溶劑，方法簡便、省時。因此，在選擇在一個條件下完成了上述測定。

根據2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP殘留溶劑測定法以及ICH的規定，本品中的待測溶劑丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇均為3類溶劑，正己烷、甲醇、二氯甲烷、乙腈、N，N－二甲基甲酰胺為二類溶劑，分別對3批樣品進行了測定。結果在3批樣品中僅檢出微量的丙酮和乙醇，其他溶劑均未檢出，說明本品的合成工藝良好地革除了上述的有害溶劑，合成工藝較合理。

[1]Wang L，Yao YB，Wang Z.Pemetrexed disodium：a multiple receptor folic acid inhibitor[J].World clinical drugs，2007，28(5)：293－298.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：化學工業出版社，2005：附錄54－57.