寧神補(bǔ)心片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李世杰 付 紅 曲銀鋒

（河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000）

寧神補(bǔ)心片收載于部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二十冊(cè)[1]，原標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了丹參的薄層色譜鑒別項(xiàng)，無含量測(cè)定項(xiàng)目，無法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。本文增加了五味子的薄層色譜鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對(duì)制劑中的丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定，為該制劑的生產(chǎn)提供質(zhì)量控制依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

AE240型雙量程分析天平；三用紫外分析儀；安捷倫1100高效液相色譜儀。

五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)：110764-200408）、丹酚酸B對(duì)照品（批號(hào)：111562-200605）均由中國生物制品檢定所提供；寧神補(bǔ)心片樣品及陰性對(duì)照樣品由河南某中藥有限公司提供。

1.2 五味子的薄層鑒別[2]

取本品10片，除去包衣，研細(xì)，加三氯甲烷30mL，加熱回流1.5h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使溶解，作為供試品溶液。取缺五味子的陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液制備方法，同法制得缺五味子陰性對(duì)照溶液。另取五味子甲素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照樣品無干擾。結(jié)果見圖1。

圖1 五味子薄層色譜鑒別

1.3 含量測(cè)定

1.3.1 色譜條件 安捷倫TC-C18（2）色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），流速1.0mL/min，檢測(cè)波長286nm。分離度大于1.5，理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.3.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對(duì)照品7mg，置50mL棕色量瓶中，加75%甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹酚酸B 0.14mg）。供試品溶液的制備：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。缺丹參的陰性對(duì)照溶液的制備：取缺丹參的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

1.3.3 干擾性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液缺丹參陰性對(duì)照溶液各10μL進(jìn)樣，結(jié)果表明：陰性樣品溶液HPLC圖譜中在與對(duì)照品HPLC圖譜中相同保留時(shí)間處無吸收峰，陰性無干擾。

1.3.4 線性關(guān)系的考察 精密取丹酚酸B對(duì)照品溶液，分別制成濃度為0.0359mg/mL、0.0718mg/mL、0.1436mg/mL、0.2154mg/mL、0.2872mg/mL的溶液進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，丹酚酸B的進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程：Y=7033.71324X+1.03310，r=1.0000，結(jié)果表明，丹酚酸 B在0.359～2.872μg之間呈良好的線性關(guān)系。

1.3.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.1436mg/mL的丹酚酸B對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定丹酚酸B的峰面積，結(jié)果平均值為1010.5435，RSD為0.32%，表明該方法精密度良好。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h測(cè)定丹酚酸B峰面積，結(jié)果平均值為986.0676，RSD為0.44%，表明該供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)樣品0.5g，6份，照供試品溶液制備方法制備溶液，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果其含量的平均值為3.6303mg/片，RSD為0.48%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

1.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)已知含量（丹酚酸B含量3.6303mg/片）樣品0.25g，6份，分別加入丹酚酸B對(duì)照品2.81mg、3.51mg、4.21mg，兩份為1組，每組按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液。分別測(cè)定丹酚酸B的含量。結(jié)果低、中、高3種加入量的回收率依次為99.72%、99.25%；99.32%、99.81%；99.60%、99.41%。平均加樣回收率為99.5%，RSD為0.23%，表明該方法的加樣回收率符合要求。

1.3.9 樣品含量測(cè)定 按照供試品溶液制備方法對(duì)10批產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定，丹酚酸B的含量分別為：3.624、3.546、3.608、3.387、3.634、3.540、3.602、3.631、3.636、3.620（mg/片）。

3 討論

筆者通過試驗(yàn)，增加了寧神補(bǔ)心片中五味子的薄層色譜鑒別方法，陰性對(duì)照試驗(yàn)表明其他成分對(duì)本法無干擾，說明該方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

丹酚酸B的含量測(cè)定中供試品溶液制備方法參考2010年中國藥典（一部）丹參、丹參片及復(fù)方丹參片項(xiàng)下丹酚酸B的測(cè)定，對(duì)樣品中丹酚酸B采用了加水超聲處理20min、30min和75%甲醇加熱回流1h三種處理方法，結(jié)果顯示，75%甲醇加熱回流1h的方法提取效率高，故而采用。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部國家藥典委員會(huì).部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥成方制劑（第20冊(cè)）[S].1998：70.

[2]國家委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：750.