動態濁度法測定注射用高純度尿促性素中細菌內毒素的含量*

劉 肅 周永標 肖 瑛 潘衛松

（1.廣州市藥品檢驗所，廣東廣州510610；2.暨南大學藥學院，廣東廣州510632；3.暨南大學中藥藥效物質基礎及創新藥物研究所廣東省高校重點實驗室，廣東廣州510632）

注射用高純度尿促性素（highly purified menotrophin for injection）是從天然提取的促性腺激素制劑，其中含有卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）和黃體生成激素（luteinizing hormone，LH），可獨立地作為促排卵治療的用藥，也應用于低促性腺激素性性腺功能不全的男性和女性，還廣泛應用于行體外受精的控制性促排卵的婦女中[1]。筆者依照2005年版《中國藥典》收載的細菌內毒素檢查法，對其細菌內毒素的定量和定性檢查進行了研究，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器

細菌內毒素測定儀（天津大學無線電廠，BET-32B）；SUB14恒溫水浴（英國GRANT公司）；MSI旋渦混合器（廣州IKA公司）。

1.2 試驗藥品

細菌內毒素工作標準品（規格：120EU/支，批號：150601-200966）購自中國藥品生物制品檢定所；內毒素檢查用水（規格：50mL/支，批號：1002050）及鱟試劑（TAL）均購于湛江安度斯生物有限公司（動態濁度法鱟試劑，規格：1.25mL/支，批號：0802020，靈敏度：10～0.1EU/mL；凝膠法鱟試劑，規格：0.1mL/支，批號：0903311，靈敏度：0.125EU/mL）；注射用高純度尿促性素由輝凌（德國）制藥有限公司提供（批號：CE0078A）。

2 方法與結果

2.1 細菌內毒素限值的確定[2-4]

根據公式：細菌內毒素限值（L）=K/M。式中，M為人用每公斤體重每小時最大劑量。依據藥品使用說明書，初始劑量為每日1～2支，之后可以逐漸增加劑量，故成人每日最大給藥量以10支計算，中國人均體重按60kg計，則M=10支/（kg·h），K為人用每公斤體重每小時最大可接受的內毒素劑量。K值取5EU/（kg·h），則L=5EU/（kg·h）×60kg/10支·h-1=30EU/支。

2.2 標準曲線的可靠性試驗

用細菌內毒素檢查用水對細菌內毒素國家標準品進行稀釋，使其細菌內毒素最終濃度分別為10.0，1.0，0.1，0.01EU/mL。各取0.1mL分別加到預先加有0.1mL鱟試劑反應管內，在旋渦混合器上輕輕混合均勻，插入BET-32B細菌內度素檢測儀內進行檢測，其中每一個濃度做2支平行管，并同時做陰性對照2管（NC），陽性對照2管（PPC）。實驗數據按最小二乘法進行統計分析，其標準曲線為：lgT=2.79178+（-0.24828lgC），r=-0.9932，反應時間在371～2093s。陰性對照管反應時間＞3600s。結果可見，陰性對照管反應時間大于標準曲線最低濃度的反應時間，|r|＞0.980，故標準曲線的可靠性成立。

表1 注射用高純度尿促性素干擾試驗

2.3 干擾試驗

將注射用高純度尿促性素以細菌內毒素檢查用水稀釋成10倍、20倍、40倍、80倍4個濃度系列。每個濃度分別取0.1mL加入0.1mL鱟試劑溶液作為供試品檢查管。同時，取這4個稀釋濃度的樣品溶液0.5mL，加入0.5mL細菌內毒素國家標準品溶液（1.0EU·mL-1），混勻，作為供試品干擾試驗中供試品陽性對照溶液。每個濃度溶液分別取0.1mL，加到預先加有0.1mL鱟試劑反應管內，混勻，作為供試品陽性對照管。立即插入BET-32B型細菌內毒素測定儀進行檢測，其中每一濃度重復2管，計算平均回收率，回收率（%）=（Cs-Ct）/λm×100%（見表1）。由表可見回收率均在50%～200%，可知，注射用高純度尿促性素在此稀釋倍數下，對細菌內毒素檢測無干擾作用。

2.4 細菌內毒素的檢測

根據《中國藥典》2005年版附錄細菌內毒素定量測定法進行定量測定，同時按照《中國藥典》2005年版附錄凝膠法進行定性檢查，動態濁度法實測內毒素13.824EU/支，回收率112%；凝膠法陰性。

3 討論

細菌內毒素檢測的凝膠法與動態濁度法都是藥典所規定的方法，凝膠法不需要專門的儀器，且定性檢查進行限度控制成本低廉，操作更加簡便易行，動態濁度法進行定量檢查，需要專門設備，試劑成本相對昂貴，但是靈敏度高[5-9]。本品注射用高純度尿促性素使用動態濁度法與凝膠法檢測結果一致，提示用兩種方法進行本品的細菌內毒素檢查都是可行的。

[1]陳新娜，喬杰，何方方，等.高純度尿促性素和普通尿促性素促排卵效果[J].中國生育健康雜志，2005，16（4）：205-208.

[2]關倩明，歐潔赟.頭孢尼西鈉細菌內毒素檢查方法的研究[J].中國藥品標準，2006，7（4）：26-27.

[3]巴力吉尼瑪，韓斯琴.三磷酸腺苷二鈉注射液中細菌內毒素的定量檢查[J].中國醫院藥學雜志，2008，28（16）：1420-1421.

[4]潘衛松，肖瑛，潘建明.熒光素鈉注射液細菌內毒素檢查法的研究[J].中國藥房，2009，20（13）：1010-1012.

[5]潘衛松，肖瑛.透明質酸鈉注射液細菌內毒素檢查法的研究[J].中國醫藥導報，2009，20（6）：45-47.

[6]周永標，潘衛松.從葛根素的異常毒性實驗看藥用輔料的重要性[J].中國醫藥導報，2010，7（13）：47-48.

[7]楊晨曦.細菌內毒素試驗凝膠定性法與動態濁度定量法的比較[J].臨床血液學雜志，2010，23（6）：366-382.

[8]潘衛松，肖瑛，李薇.皮膚組織中SOD活性測定的樣品制備方法[J].中國醫藥導報，2010，7（32）：27-28.

[9]潘衛松，劉美鳳，石鉞，等.血清藥理學、血清化學和中藥藥代動力學[J].世界科學技術-中藥現代化，2002，4（3）：53-56.