Livin蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

吳國武 曾娟紫

Livin蛋白是2000年由Lin等[1～3]在人基因庫中探索細(xì)胞凋亡蛋白抑制因子家族的同源序列時(shí)，篩選并克隆出的新型、有較強(qiáng)抗凋亡功能的IAPs家族成員。Livin蛋白最早發(fā)現(xiàn)與惡性黑色素瘤[2]，后又發(fā)現(xiàn)Livin蛋白在正常組織中呈低表達(dá)，而在肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、白血病以及淋巴瘤等惡性腫瘤組織中有表達(dá)。本文研究Livin蛋白表達(dá)與乳腺癌的臨床病理因素的相關(guān)性及其對乳腺癌預(yù)后的影響。

1 材料與方法

1.1 資料

收集2005年1月～2007年1月本院手術(shù)切除的、70例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本蠟塊。所有病例均為初治病例，臨床病理資料完整，通過電話或門診復(fù)查進(jìn)行隨訪。組織學(xué)分級采用Bloom法。患者年齡29～67歲，中位年齡46歲。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例，無轉(zhuǎn)移25例。受體表達(dá)：ER陽性49例、陰性21例；PR陽性42例、陰性28例。組織學(xué)分級：Ⅰ級18例，Ⅱ級27例，Ⅲ級25例。腫瘤大小：<2 cm 12例，2～5 cm 28例，>5 cm 30例。月經(jīng)狀況：絕經(jīng)前27例，絕經(jīng)后43例。

1.2 計(jì)劑與方法

采用免疫組化SP 法染色。Livin蛋白單克隆抗體及超敏型免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。DAB顯色劑購于DAKO公司。采用檸檬酸緩沖液高溫修復(fù)抗原，Livin 抗體工作液4 ℃過夜，其余均參照說明書進(jìn)行，用試劑公司提供的陽性切片作陽性對照，用PBS 緩沖液代替一抗作為空白對照。Livin蛋白免疫組織化學(xué)SP 法染色為棕黃色顆粒，陽性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)果判斷：隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，記數(shù)500個(gè)以上細(xì)胞。以胞核著色判斷為陽性，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析[2]：陽性細(xì)胞數(shù)0～30%為1分，31%～70%為2分，71%～100%為3分；再根據(jù)著色強(qiáng)度依次計(jì)1、2、3分，每張切片進(jìn)行兩項(xiàng)計(jì)分累計(jì)，1～2分為+，3～4分為++，5～6分為+++，其中++～+++視為Livin蛋白呈過表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，以P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Livin蛋白表達(dá)及其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

70例中有48例Livin蛋白呈過表達(dá)，陽性率為68.6%(48/70)，另22例livin蛋白呈陰性或可疑陽性，占31.4% 。Livin蛋白表達(dá)與乳腺癌ER、PR受體表達(dá)情況，腫瘤大小，淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移以及患者是否絕經(jīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(P>0.05)。Livin蛋白表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級相關(guān)，隨著腫瘤組織學(xué)分級提高，Livin蛋白表達(dá)呈增強(qiáng)趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 隨訪及預(yù)后

所有病例均隨訪至2011年1月，其中失訪9例，存活49例，死亡12例，生存分析顯示，Livin蛋白過表達(dá)患者生存時(shí)間短于陰性表達(dá)者，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

Livin蛋白是種新型細(xì)胞凋亡抑制蛋白(IAPs)，有著較強(qiáng)的抗凋亡功能；研究顯示，在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中，livin蛋白均扮演著重要角色[4～6]。Kasof等[7]研究發(fā)現(xiàn)：livin蛋白可與介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的下游效應(yīng)Caspases, 即激活形式的Caspase23 和Caspase27 結(jié)合, 并抑制其活性，進(jìn)而抑制凋亡的執(zhí)行過程。此外[8]，livin 能活化MAP激酶JNK1及JNK2, 其活化JNK1的能力強(qiáng)于JNK2。通過活化JNK1 可以抑制TNF及ICE誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞增殖與凋亡密切相關(guān)，正常乳腺細(xì)胞的凋亡調(diào)控機(jī)制失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致乳腺細(xì)胞的無限制性增殖是乳腺癌發(fā)生的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。IAPs是導(dǎo)致乳腺細(xì)胞凋亡受抑制的重要分子基礎(chǔ)。本研究顯示，livin蛋白在68.6%(48/70)的乳腺癌組織中存在過表達(dá)，說明在乳腺癌的分子機(jī)制中，livin蛋白起著重要作用。隨著乳腺癌組織學(xué)級別的提高，livin蛋白的表達(dá)也隨著加強(qiáng)，顯示出Livin蛋白與乳腺癌惡性程度相關(guān)，Livin蛋白的過表達(dá)，其抑制乳腺癌細(xì)胞凋亡的功能也隨之增強(qiáng)，表現(xiàn)在臨床上，就是乳腺癌的組織學(xué)級別進(jìn)一步升高。本研究的臨床隨訪資料顯示：Livin蛋白過表達(dá)者生存時(shí)間較livin蛋白低表達(dá)的患者短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明livin蛋白表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后相關(guān)。

綜上，livin蛋白的過表達(dá)與乳腺癌的惡性程度及患者的生存時(shí)間相關(guān)，可望成為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)。

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