RP-H PLC法測(cè)定復(fù)方美登木片中重樓皂苷的含量

趙琪鐘 孔凡建 李曉梅

（普洱市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 普洱 665000）

RP-H PLC法測(cè)定復(fù)方美登木片中重樓皂苷的含量

趙琪鐘 孔凡建 李曉梅

（普洱市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 普洱 665000）

目的：建立測(cè)定復(fù)方美登木片中重樓皂苷含量的反相高效液相色譜法 （reverse phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC）方法。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫35℃。結(jié)果：結(jié)果表明重樓皂苷I在0.304 0～ 3.040 0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為103.21%（n=9），RSD=1.26%;重樓皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為97.98%（n=9），RSD=2.56%。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方美登木片的質(zhì)量控制。

反相高效液相色譜法；復(fù)方美登木片；重樓皂苷；含量測(cè)定

復(fù)方美登木片是普洱市民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所在挖掘、搶救民族民間中草藥過(guò)程中，研發(fā)、篩選出來(lái)的用于治療乳腺小葉增生的中藥復(fù)方制劑，為拉祜族驗(yàn)方，由美登木、重樓等六味傳統(tǒng)中藥組成。原醫(yī)院制劑對(duì)方中重樓采用薄層色譜法鑒別，為更好地控制該制劑質(zhì)量，本文采用RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方美登木片中主要有效成分重樓中皂苷I、皂苷II的含量，為更好地控制該產(chǎn)品質(zhì)量提供檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent-1200高效液相色譜儀，帶四元泵；DAD二級(jí)管陣列檢測(cè)器，塞多利斯電子天平BS210S（德國(guó)）。

乙腈（色譜純，F(xiàn)isher，USA），乙醇（分析純），水為超純水。重樓皂苷Ⅰ對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，含量測(cè)定用，批號(hào)：111590-200402）；重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)藥品生物制品檢定所提供，含量測(cè)定用，批號(hào)：111591-200402）；復(fù)方美登木片3批（普洱民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所提供，批號(hào)：090401，090402，090403）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）柱；流動(dòng)相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm[1]，柱溫 35℃；進(jìn)樣量：10 μL；理論板數(shù)按重樓皂苷Ⅰ峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000；陰性樣品無(wú)干擾（見圖1）。

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密稱取在40℃減壓干燥2 h的重樓皂苷Ⅰ對(duì)照品和重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌愤m量，用乙醇制成每1 mL含0.152 mg的溶液，即得。

圖1 對(duì)照品（A）、樣品（B）、陰性對(duì)照（C）的HPLC色譜

2.3 供試品溶液的制備

取復(fù)方美登木片20片（批號(hào)：090402），除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，混合均勻，取以上供試品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25 mL，稱定重量，振搖混勻，超聲處理（工作頻率233 KHz，250 W）30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后靜置。過(guò)濾，棄去初濾液，續(xù)濾液用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液

按樣品處方比例制備不含重樓的陰性樣品溶液，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

精密稱取重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌愤m量，置量瓶中，加甲醇制成每mL含重樓皂苷152.0 μg的溶液和含重樓皂苷Ⅱ154.0 μg的溶液，即得。分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL，以進(jìn)樣量（μg）橫坐標(biāo)，面積為縱坐標(biāo)，得重樓皂苷Ⅰ回歸方程Y=121.062 21 X-3.306 83（r=0.999 9）結(jié)果表明重樓皂苷Ⅰ在0.304 0～3.040 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；重樓皂苷Ⅱ回歸方程Y=92.379 56 X-1.841 303（r=0.999 9）結(jié)果表明重樓皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 空白試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)陰性樣品溶液，照含量測(cè)定方法制成供試液，進(jìn)樣20 μL測(cè)定，未檢出重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ。且在與重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌繁Ａ魰r(shí)間相對(duì)應(yīng)的位置上也未檢出樣品峰，結(jié)果表明該色譜條件下陰性無(wú)干擾。

2.7 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液照含量測(cè)定方法測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6針，進(jìn)樣10 μL，以峰面積計(jì)算，結(jié)果重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總量的RSD分別為0.723%、0.281%（n=6）。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取復(fù)方美登木片（批號(hào)：090402）20片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，混合均勻，精密稱取約2 g照含量測(cè)定方法制成供試液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣，進(jìn)樣10 μL，以重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總峰面積計(jì)算，結(jié)果RSD為0.505%，說(shuō)明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取復(fù)方美登木片（批號(hào)：090402）50片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，混合均勻，精密稱取6份各約2 g，照含量測(cè)定方法制成供試液，進(jìn)樣10 μL，以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總量的RSD為0.455%，（n=6）

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取復(fù)方美登木片（批號(hào)：090402）30片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，混合均勻，稱取9份，取樣量分別約為1.0 g，精密稱定，分置具塞錐形瓶中，分別加入重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ?qū)φ掌啡芤?.5、2.0、3.0 mL（每mL含重樓皂苷Ⅰ0.92 mg和重樓皂苷Ⅱ0.52 mg），放置揮干，精密加乙醇25 mL，稱定重量，振搖混勻，超聲（工作頻率233 KHz，250 W）提取30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后靜置。進(jìn)樣前過(guò)濾，棄去初濾液，續(xù)濾液用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。依法操作，進(jìn)樣10 μL，分別測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、2。

表1 重樓皂苷Ⅰ回收率測(cè)定結(jié)果

表2 重樓皂苷Ⅱ回收率測(cè)定結(jié)果

表3 復(fù)方美登木片3批樣品測(cè)定結(jié)果（n=2）

2.10 樣品測(cè)定

取不同批號(hào)（3批）樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備所需的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下，測(cè)定其峰面積（每批平行測(cè)定3份），并樣品中重樓皂苷的含量，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 重樓具有清熱解毒，消腫止痛的功效，《中國(guó)藥典》2010版記載有小毒，且其在治療乳腺小葉增生的復(fù)方美登木片中為主藥之一，為了臨床用藥安全，有必要采用更好的方法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控。

3.2 試驗(yàn)過(guò)程中曾考察過(guò)超聲處理時(shí)間分別為20、30、40 min，結(jié)果表明，樣品超聲30 min已經(jīng)提取完全，故含量測(cè)定方法超聲提取時(shí)間選擇為30 min。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：243.

Content Determination of Paridis Saponins in Compound Maytenus Tablets by RP-HPLC

Zhao Qizhong，Kong Fanjian，Li Xiaomei（The Institute for Food and Drug Control of Puer City，Yunnan Puer 665000，China）

Objective:To establish a method for the content determination of paridis saponins in compound maytenus tablets by RP-HPLC.Methods:HPLC was performed to determine the content of paridis saponins using Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-H2O（42∶58）.The flow rate was 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 203 nm.Results:The linearity of paridis saponins I was within the range of 0.304 0～3.040 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 103.21%（n=9，RSD=1.26%）.The linearity of paridis saponinsⅡwas within the range of 0.308 0～3.080 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 97.98% （n=9，RSD=2.56%）.Conclusion:This method is simple，sensitive and accurate，and can be used for the quality control of compound maytenus tablets.

RP-HPLC；Compound Maytenus Tablets；Paridis Saponins；Content Determination

2011-07-08）

趙琪鐘，男，主管中藥師，研究方向：中藥質(zhì)量控制。E-mail:ynsmzqz@126.com