保健食品中未知濫用藥物快速篩查與鑒定

譚和平 ， 鄒 燕 ， 譚福元 ， 王彧婕 ， 徐文平 ， 劉明東

（1.中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院，四川 成都 610021；2.國(guó)家防災(zāi)減災(zāi)分析測(cè)試中心（成都），四川 成都 610021）

0 引 言

近年來(lái)，隨著人民生活水平的不斷提高，我國(guó)保健食品市場(chǎng)獲得了空前的發(fā)展。但是也存在一些不法商家為了謀取暴利，在保健食品中肆意添加有治療作用的化學(xué)藥品來(lái)提高其“保健作用”，欺騙消費(fèi)者。如在壯陽(yáng)、補(bǔ)腎、抗疲勞類保健食品中添加西地那非、伐地那非、他達(dá)拉非等壯陽(yáng)藥，在降糖類保健食品中添加羅格列酮、苯乙雙胍、瑞格列奈等化學(xué)降糖藥，減肥類保健食品中添加芬氟拉明、利尿劑等藥品等[1-3]。長(zhǎng)期服用這類保健食品，不僅將對(duì)人體造成極大的危害，而且影響了我國(guó)保健食品的聲譽(yù)，也阻礙了其產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。

化學(xué)藥品種類繁多、數(shù)量巨大，而當(dāng)前我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法多為預(yù)設(shè)的“目標(biāo)分析”，這就意味著不法分子完全還可以尋找其他替代品以逃避法律的監(jiān)管，這也是當(dāng)前食品、藥品安全事故屢禁不止的關(guān)鍵原因之一。隨著現(xiàn)代分析儀器的發(fā)展，飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（TOF/MS）已有能力獲得小于1×10-6精確質(zhì)量的全掃描質(zhì)譜圖，且具有較高的選擇性和靈敏度，這使得分析工作者可以通過(guò)精確質(zhì)量數(shù)的檢索匹配，快速且方便地對(duì)未知化合物實(shí)現(xiàn)快速篩查與鑒定。

該文在自建藥物數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，采用LCDAD-TOF/MS對(duì)某品牌黑糯米壯陽(yáng)保健酒中的未知成分進(jìn)行了定性篩查，從中發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了伐地那非的大量存在。這為保健食品中非法添加化學(xué)藥品等未知有害物質(zhì)的篩查與鑒定提供了快速、可靠、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，為食品藥品安全監(jiān)管提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

1 試驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

1200 HPLC-6210 TOF/MS（美國(guó) Agilent）；超純水機(jī)（美國(guó) Millipore）；乙腈（色譜純，Sigma-Aldrich）；甲酸（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；樣品為某品牌的保健酒（客戶送檢樣品）。

1.2 試驗(yàn)條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB C18（2.1mm×50mm，1.8μm）；流動(dòng)相A為體積分?jǐn)?shù)0.1%的甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；梯度洗脫為0 min時(shí)5%的流動(dòng)相B，5 min時(shí)5%的流動(dòng)相B，20 min時(shí)99%的流動(dòng)相B，保持5 min；流速0.3 mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣體積10μL。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），正離子模式，離子源溫度350℃，干燥氣流速9L/min,霧化器壓力40psi,碎裂電壓分別為175V和400V，掃描方式為全掃描。

1.3 樣品的前處理

吸取適量樣品，經(jīng)0.2μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾后直接進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品檢測(cè)結(jié)果

圖1和圖2分別為樣品二極管陣列色譜圖（DAD）和總離子流質(zhì)譜圖（TIC）。從色譜圖上可以看出，在保留時(shí)間13.92 min時(shí)，出現(xiàn)了一個(gè)峰面積加合百分比大于80%的色譜峰，對(duì)應(yīng)的TIC保留時(shí)間為14.20min。結(jié)合DAD與TIC響應(yīng)值分析，初步可以認(rèn)定該色譜峰代表的化合物在樣品中有較高的含量，而其他組分在樣品中的含量較低。

2.2 未知化合物精確分子量分析

應(yīng)用MassHunter Qualitative Analysis軟件對(duì)質(zhì)譜圖進(jìn)行分子特征提取（MFE）分析，該色譜峰所代表的化合物的準(zhǔn)分子離子峰 [M+H]+精確分子量為489.22767，其質(zhì)譜圖如圖3所示。用分子式生成器（MFG）計(jì)算得對(duì)應(yīng)的分子式為C23H33N6O4S+，通過(guò)在自建的專業(yè)藥物數(shù)據(jù)庫(kù)（收集了目前文獻(xiàn)、臨床中使用的各種藥物信息）中進(jìn)行檢索，精確分子量誤差及同位素得分均表明該化合物可能為伐地那非（vardenafil）（表1）。此藥具有用量小、見(jiàn)效快等特點(diǎn)，據(jù)報(bào)道伐地那非經(jīng)常被非法添加到壯陽(yáng)補(bǔ)腎類保健品中，這也引起了分析人員的關(guān)注[4-6]。

2.3 未知化合物碎片與質(zhì)譜裂解方式分析

圖3為碎裂電壓為175 V時(shí)的化合物準(zhǔn)分子離子峰，為了得到更豐富的子離子碎片信息，將質(zhì)譜的碎裂電壓升高至400 V，得到含有準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+m/z 489.227 84及其特征子離子碎片m/z 312.15829，m/z 151.08607的質(zhì)譜圖（圖 4），經(jīng) MFG計(jì)算得碎片m/z 312.158 29和m/z 151.086 07可能的離子分子式分別為C17H20N4O2+和C8H11N2O+（表1）。

根據(jù)特征子離子碎片信息質(zhì)譜圖（圖4），推斷出了伐地那非的質(zhì)譜碎裂方式（+ESI）如圖5所示。由圖5可以看出，在該碎裂方式下得到了離子碎片分子式與表1中MFG計(jì)算所得離子分子式一致，因此進(jìn)一步確認(rèn)了該保健酒中添加有濃度較高的伐地那非。

表1 化合物檢索結(jié)果

3 結(jié)束語(yǔ)

該文采用LC-DAD-TOF/MS對(duì)某保健酒中的未知異常成分進(jìn)行了篩查與確認(rèn)，方法簡(jiǎn)單、快速，不需要標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌芳纯傻玫綔?zhǔn)確可靠的結(jié)論。該方法為“非目標(biāo)”檢測(cè)分析，篩查范圍廣，尤其適合于食品、藥品中未知有害有機(jī)物的快速篩查與確認(rèn)，是目前打擊保健食品中非法添加化學(xué)物質(zhì)的利器。若能得到廣泛應(yīng)用，必將對(duì)食品、藥品安全違法分子起到較大的震懾作用，對(duì)預(yù)防食品安全事件的發(fā)生起到重要作用。

圖5 伐地那非質(zhì)譜碎裂方式示意圖

[1]肖樹(shù)雄，李楊杰.由降糖中成藥和保健食品檢驗(yàn)情況探索非法添加化學(xué)成分的系統(tǒng)快篩思路[J].藥物分析雜志，2011（31）：418-422.

[2] 李銳.中成藥、保健食品中非法添加化學(xué)成分的檢測(cè)[J].食品藥品監(jiān)管，2007（16）：10-11.

[3] 劉福艷，李軍，謝元超，等.中成藥中非法添加化學(xué)藥品的現(xiàn)狀與分析檢測(cè)對(duì)策[J].中國(guó)藥師，2008（22）：1067-1071.

[4] 張建麗，王小兵.LC/MS和LC-MS/MS定性檢測(cè)保健品中非法添加的伐地那非[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2009（20）：219-222.

[5] 沈志武，唐宏兵，李群，等.高效液相色譜法測(cè)定保健食品中他達(dá)拉非、西地那非、伐地那非違禁藥物含量[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2008（44）：540-542.

[6] 劉暢，夏晶，胡青，等.LC/MS（n）法檢測(cè)補(bǔ)腎壯陽(yáng)類中成藥和保健食品中非法添加5種性功能類化學(xué)藥品[J].中成藥，2009（31）：1371-1374.