Chk1/2、Plk1及 PCN A在良性、交界性和惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及意義*

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科(西安 710004)

康安靜 苗 麗 靳耀峰 馬 莉 行 磊 蘇文秀 郭 睿

卵巢癌是嚴(yán)重威脅婦女健康和生命的疾病,其發(fā)病率僅次于宮頸癌,居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第 2位,且近年來有上升趨勢(shì),病死率則居首位。由于卵巢癌發(fā)病和病情進(jìn)展的隱匿性,確診時(shí) 70%的病人已經(jīng)屬于晚期。近年來,細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)(G1/S、S和 G2/M)激酶(Checkpoint kinase,Chk)1/2在腫瘤中的研究剛剛興起,但在卵巢腫瘤中的研究目前國內(nèi)尚未見到報(bào)道,有關(guān)保羅樣激酶 1(Polo-like kinase 1,Plk1)和增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在國內(nèi)外研究中已取得不少結(jié)論,但上述 4個(gè)指標(biāo)同時(shí)應(yīng)用在上皮性卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展方面的研究卻未見報(bào)道。本研究針對(duì) Chk1/2、Plk1及 PCNA在良性、交界性和惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),探討其在上皮性卵巢腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用、規(guī)律以及相關(guān)性,以期為卵巢腫瘤的預(yù)后尋找新的檢測(cè)指標(biāo)。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 選取西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科 2003～2009年確診的,臨床手術(shù)切除的上皮性卵巢腫瘤標(biāo)本 60例,其中:漿液性腫瘤 47例,粘液性腫瘤 12例,混合性 1例;良性 10例,交界性 10例,惡性 40例;惡性腫瘤中,按照分化程度分為:Ⅰ級(jí)10例,Ⅱ級(jí) 15例,Ⅲ 級(jí) 15例;無浸潤轉(zhuǎn)移的 23例,有浸潤轉(zhuǎn)移的 17例 (包括輸卵管、大網(wǎng)膜、子宮、腸管、腸系膜、對(duì)側(cè)卵巢及淋巴結(jié))。患者年齡 23～ 71歲,中位年齡 48歲。

2 方 法 標(biāo)本取材后均常規(guī) 10%福爾馬林及時(shí)固定、脫水、石蠟包埋。標(biāo)本每例切片 8張,切片厚5 μ m。一張進(jìn)行常規(guī) HE染色,其余用于免疫組化染色。免疫組化的載玻片經(jīng) APES防脫片處理,采用高壓抗原修復(fù)、S-P超敏三步法、DAB顯色、PBS代替一抗作陰性對(duì)照,已知陽性片作陽性對(duì)照。

3 免疫組化結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 Chk1、Chk2及 Plk1均主要表達(dá)于胞核,部分表達(dá)于胞質(zhì);PCNA均表達(dá)于胞核。胞核陽性為棕黃色,胞質(zhì)陽性為均勻一致的棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)取 10個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù),得到的值為陽性細(xì)胞指數(shù),取平均值,后求出每個(gè)組的平均值,用 x-±s表示。采用 t檢驗(yàn),SPSS13.0軟件處理,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4個(gè)指標(biāo)表達(dá)的相關(guān)性采用 Pearson積差相關(guān)分析,P＜0.05表示具有相關(guān)性,其中 1≥r＞ 0表示正相關(guān),-1≤r＜0表示負(fù)相關(guān),r=0表示零相關(guān)。

結(jié) 果

1 Chk1、Chk2、Plk1及 PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及組間比較 見表 1,表 2。各指標(biāo)在良性組與交界性組、良性組與惡性組以及交界性組與惡性組之間的比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Chk1陽性表達(dá)在Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)間,Chk2在Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)間存在顯著性差異。

表1 Chk1、Chk2、Plk1及 PCNA分別在卵巢良性、交界性及惡性上皮性腫瘤中的陽性細(xì)胞指數(shù)及其組間比較[指標(biāo)(例數(shù))]

表2 Chk1、Chk2、Plk1及 PCNA分別在卵巢惡性不同上皮性腫瘤分級(jí)中的陽性細(xì)胞指數(shù)及其組間比較[指標(biāo)(例數(shù))]

2 Chk1、Chk2、Plk1及 PCNA表達(dá)與卵巢惡性腫瘤患者年齡、組織病理類型及轉(zhuǎn)移的關(guān)系 見表 3。Chk1、Chk2、Plk1的陽性表達(dá)均與病理類型有關(guān),與年齡及轉(zhuǎn)移情況無關(guān),而 PCNA的陽性表達(dá)與以上 3個(gè)指標(biāo)均無關(guān)。

表3 Chk1、Chk2、Plk1及 PCNA在卵巢惡性腫瘤患者臨床特征中的陽性細(xì)胞指數(shù)及關(guān)系

3 Chk1、Chk2、 Plk1及 PCNA在卵巢惡性上皮性腫瘤中表達(dá)的相關(guān)性分析 見表 4。在卵巢惡性上皮性腫瘤中,Chk1和 Chk2陽性表達(dá)呈正相關(guān),Chk2與 Plk1陽性表達(dá)呈正相關(guān),其余組別陽性表達(dá)均無相關(guān)性。 (r為 Pearson相關(guān)系數(shù) )。

表4 各指標(biāo)間陽性表達(dá)相關(guān)性分析

討 論

腫瘤的形成是在各種致瘤因素的作用下細(xì)胞生長調(diào)控發(fā)生嚴(yán)重紊亂的結(jié)果。細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶在細(xì)胞周期調(diào)控方面發(fā)揮了重要的作用,他們影響了細(xì)胞正常與異常情況下的分裂、增殖,與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Chk1/2屬于絲 /蘇氨酸激酶,是細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)中的重要激酶。國外的研究提示 Chk1和 Chk2在 S期和 G2期檢測(cè)點(diǎn)調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要的作用[1]。Plk1是一類廣泛存在于真核細(xì)胞中的絲 /蘇氨酸激酶,存在于真核生物中的 polo家族成員均不同程度地與細(xì)胞有絲分裂相關(guān),顯示出以結(jié)構(gòu)保守為基礎(chǔ)的功能保守[2]。 PCNA是一種僅在增殖細(xì)胞中合成和表達(dá)的 36kD多肽,它與細(xì)胞 DNA合成關(guān)系密切,在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用,此外,PCNA還參與了許多細(xì)胞重要事件,如細(xì)胞 DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)控、染色體重組、DNA甲基化及細(xì)胞凋亡等。以往國內(nèi)外的研究報(bào)道在 Chk1和 Chk2與腫瘤的發(fā)生發(fā)展是否有關(guān)系方面存在爭議[3～6]。本研究顯示 Chk1在卵巢良性、交界性及惡性上皮性腫瘤中的表達(dá)差異有顯著性,提示 Chk1在腫瘤組織中高表達(dá)可能與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),Chk1陽性表達(dá)率在惡性組最高,交界性組次之,良性組最低,其在交界性組與惡性組維持在較高水平,且 Chk1陽性表達(dá)在惡性組中隨著病理分級(jí)的增加而增高,惡性Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)間、Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能由于樣本量較少或 Chk1在惡性上皮性卵巢癌的演進(jìn)過程中作用較小有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)有關(guān) Chk2的研究結(jié)果表明其在上皮性卵巢腫瘤中具有相對(duì)意義上的腫瘤選擇性表達(dá),Chk2在病理Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)的病例中表達(dá)差異無顯著性則可能與Chk2在惡性細(xì)胞進(jìn)展時(shí)期在整個(gè)細(xì)胞周期中普遍表達(dá)有關(guān)。Plk1可以與多種腫瘤抑制蛋白相互作用。一方面它可以磷酸化 P53、Chk2和 BRCA2,抑制它們的活性來促進(jìn)有絲分裂過程;另一方面,Plk1可在多條檢驗(yàn)點(diǎn)通路中被抑制,腫瘤抑制蛋白 ATM、AT R、Chk1和 BRCA1等參與了這一抑制作用。Plk1與腫瘤抑制蛋白之間存在的相互對(duì)抗關(guān)系的失衡可能導(dǎo)致腫瘤的形成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 Plk1表達(dá)在良性上皮性卵巢腫瘤中最低,在惡性組中最高,且呈均勻遞增趨勢(shì),三組間 Plk1的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這與國內(nèi)外有關(guān) Plk1在腫瘤組織中表達(dá)情況的報(bào)道一致[7～9]。Plk1在惡性組中的陽性表達(dá)逐漸增加且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可考慮作為卵巢癌預(yù)后的候選指標(biāo)進(jìn)行研究。上述 3個(gè)指標(biāo),Chk1、Chk2及 Plk1表達(dá)與病理類型有關(guān)的結(jié)論與國內(nèi)外其他研究報(bào)告[3,6,8～10]不一致的原因可能與樣本病理類型不平衡及樣本量不足等有關(guān)。

腫瘤細(xì)胞區(qū)別于正常細(xì)胞的特點(diǎn)是具有旺盛的增殖活性。PCNA可以作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的指標(biāo),反映腫瘤細(xì)胞的代謝和 DNA、RNA的合成狀態(tài),其增殖活性與腫瘤的分化、浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后有關(guān)。本研究顯示,PCNA在良性、交界性、惡性卵巢腫瘤中的表達(dá)具有顯著性差異且在卵巢癌不同病理分級(jí)中的差異無顯著性差異,符合文獻(xiàn)報(bào)道[11,12]。但有研究發(fā)現(xiàn),PCNA在決定卵巢癌的增生反應(yīng)中更有意義,與腫瘤分級(jí)顯著相關(guān)。如國內(nèi)有關(guān)報(bào)道指出 PCNA表達(dá)輕度與 SCHO病理分級(jí)關(guān)系密切,Ⅲ級(jí)＞Ⅱ級(jí),Ⅱ級(jí)＞Ⅰ級(jí)[13]。故 PCNA與組織病理學(xué)分級(jí)的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

另外,惡性上皮性卵巢腫瘤中,Chk1與 Chk2陽性表達(dá)呈正相關(guān)的原因可能是兩者均為 ATM/ATR的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,兩者在發(fā)揮作用時(shí)有部分功能的重疊。Chk2與 Plk1陽性表達(dá)也呈正相關(guān)。Chk2在G1/S、S、G2/M期發(fā)揮作用,Plk1主要在 G2/M期發(fā)揮作用,表明兩者在功能上存在促進(jìn)與互補(bǔ)的可能。

[1] Rouse J,Jackson SP.Interfaces between the detection,signaling,and repair of DN A damage[J].Science,2002,297(5581):547-551.

[2] 蘭 斌,劉炳亞,朱正綱.Plk1在細(xì)胞周期生物學(xué)的研究進(jìn)展 [J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志,2005,2(1):65-67.

[3] 馬全富,黃曉園,高慶蕾,等.Chk1/2和 Plk1蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) [J].腫瘤防治研究,2008,35(6):424-426.

[4] Tort F,Hernandez S,Bea S,et al.CHK2-decreased protein expression and infrequent genetic alterations mainly occurin aggressive types ofnon-Hodgkin lymphomas[J].Blood,2002,100(13):4602-4608.

[5] 王玉祥,祝淑釵,王 鑫,等.CHK1和 CHK2在食管癌組織中的表達(dá) [J].腫瘤防治研究,2006,33(3):171-174.

[6] 黃曉園 ,高慶蕾,莊 亮,等.Chk1/2和 Plk1蛋白在宮頸癌良惡性病變組織中的表達(dá)及其意義 [J].中國癌癥雜志,2007,17(6):429-432.

[7] 朱 毅,趙聞?dòng)?高文濤,等.Plk1與 MUC4在胰腺癌中的表達(dá)與臨床意義 [J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,25(11):766-774.

[8] 楊衛(wèi)華,張松柏,王春友,等.胰腺癌中 Plk1的表達(dá)及其臨床意義 [J].中國普通外科雜志,2007,16(10):1010-1012.

[9] Takahashi T,Sano B,Nagata T,et al.Polo-like kinase1(PLK1)is overexpressed in primary colorectal cancers[J].Cancer Sci,2003,94(2):148-152.

[10] 韓淑梅 ,馬廷行 ,唐曉勇.PLK1和 PCN A在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].山東醫(yī)藥,2007,47(8):18-20.

[11] 鄔東平,吳緒峰,李家福.增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)與卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤防治研究,2003,30(5):373-375.

[12] 吳文清,張新清,白利平,等.卵巢上皮癌 nm23基因表達(dá)和 PCN A表達(dá)的研究 [J].婦女保健 ,2004,19(8):23-25.

[13] 李曉菊,晏培松.卵巢漿液性癌 HSP70及 PCNA的表達(dá)及其意義 [J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,24(16):1504-1506.