HPLC法測定伸筋片中士的寧與馬錢子堿的含量

2011-05-01 13:22:50于建方劉瑞清

藥學研究 2011年7期

關鍵詞：實驗

于建方，劉瑞清

(威海人生藥業集團股份有限公司，山東威海 264205)

原標準采用薄層掃描法，測定士的寧的含量。本文參照《中國藥典》2010年版(一部)伸筋丹膠囊含量的測定方法［1］，用HPLC法測定伸筋片中士的寧的含量并增加了制劑中馬錢子堿的含量測定，對線性關系、精密度、穩定性、重現性及加樣回收率等實驗進行了研究，分別測定了3批樣品，證明該方法準確、簡便，重現性好。

1 儀器與試藥

日本島津SPD—10Avp型高效液相色譜儀;馬錢子堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，編號為110706－200505);士的寧對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，編號為110705－200306);三氯甲烷、甲醇等為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為Kromasil C18(4.6mm ×250mm，5μm)，流動相為乙腈－0.01 mol·L－1庚烷磺酸鈉與0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調節pH值2.8)(21∶79)，檢測波長為260 nm。理論板數按士的寧峰計算應不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備取馬錢子堿對照品約10mg、士的寧對照品約12mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含馬錢子堿 20 μg、士的寧 24 μg)。

2.3 供試品溶液的制備取本品(除去糖衣)約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液6mL，混勻，使濕潤，放置30min，精密加三氯甲烷50mL，密塞，稱定重量，置水浴(水溫61～62℃)中回流提取2 h，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量無水硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系的考察精密稱取馬錢子堿對照品 14.00mg、士的寧對照品 16.00mg，置50mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。以馬錢子堿對照品的進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=633125X+10562，R2=0.9946;以士的寧對照品的進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程 Y=1E+06X+6594.7，R2=0.9977，見表 1、表 2。

表1 馬錢子堿峰面積積分值

表2 士的寧峰面積積分值

結果表明馬錢子堿進樣量在0.056～0.280 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關系;士的寧進樣量在0.064～0.320 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.5 儀器精密度實驗精密吸取2.2項下對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，共進樣6次，測定馬錢子堿和士的寧峰面積積分值，結果馬錢子堿峰面積RSD為0.58%，士的定峰面積RSD為0.38%，表明儀器精密度良好。

2.6 樣品穩定性實驗取批號為090102的樣品，按2.3所述方法和條件制備供試品溶液，取供試品溶液，每隔60min進樣一次，共進樣6次，測定馬錢子堿和士的寧峰面積積分值，RSD分別為0.65%、0.12%。表明樣品在5 h內具有良好的穩定性。

2.7 重現性考察取本品(批號為090102)，除去糖衣，取約2.5 g，精密稱定，共取6份，按2.3所述方法和條件提取測定，結果見表3、表4。

表3 馬錢子堿重現性實驗結果

表4 士的寧重現性實驗結果

結果表明此方法的重現性良好。

2.8 加樣回收率實驗取本品(批號090102，含馬錢子堿0.27mg/片，士的寧 0.39mg/片)除去糖衣，取約 1.5 g，精密稱定，共取6份，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入一定量的馬錢子堿對照品和士的寧對照品，加氫氧化鈉試液6mL，混勻，依2.3項所述方法和條件提取，測定，計算.結果見表5、表6。