鼻咽癌中IGF-1R、p-ERK、c-fos和Ki-67蛋白的表達及意義

景志亮 羅愛華 姜漢國 李飛虹 趙穎海

胰島素樣生長因子1受體(insulin-like growth factor 1 receptor，IGF-1R)屬酪氨酸蛋白激酶類受體家族，參與調節細胞生長、增殖、分化、凋亡等多種信號轉導途徑，在多種腫瘤的發生發展中起重要作用［1～4］。本研究應用免疫組織化學方法檢測IGF-1R、p-ERK、cfos和Ki-67在鼻咽癌及鼻咽黏膜上皮組織中的表達，探討IGF-1R參與調控鼻咽癌細胞增殖的可能機制，為鼻咽癌復發、轉移的分子機制研究提供依據。

1 材料與方法

1.1 病例和標本

30例鼻咽癌和25例鼻咽黏膜慢性炎癥標本均取自高州市人民醫院病理科2007年1月1日～2007年12月31日存檔蠟塊。鼻咽癌患者，男性22例，女性8例，年齡28～70歲，中位年齡49歲。所有病理診斷均為非角化性癌(WHOⅡ～Ⅲ級)，臨床分期均屬T1N0M0期，就診前未接受放療或化療。人低分化鼻咽癌CNE-2Z細胞系為廣東醫學院病理學教研室保存。

1.2 試劑

兔抗人IGF-1R多克隆抗體為武漢博士德生物工程有限公司產品。小鼠抗人p-ERK單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產品。兔抗人Ki-67單克隆抗體及SP法免疫組織化學試劑盒均為北京中杉金橋生物技術有限公司產品。兔抗人c-fos多克隆抗體為福州邁新生物技術有限公司產品。

1.3 免疫組織化學檢測

設立對照組和實驗組，陽性對照用已知陽性組織切片，陰性對照用PBS代替一抗，按SP法試劑盒操作說明檢測 IGF-1R、p-ERK、Ki-67 和 c-fos。

對實驗結果進行雙盲法評估，綜合染色強度和陽性細胞數量積分，按半定量方法判斷。按顯色深淺評分:0分，不顯色;1分，淺黃色;2分，棕黃色;3分，棕褐色。按顯色比例評分:顯色細胞數≤5%為0分;顯色細胞數6% ～25%為1分;顯色細胞數26% ～50%為2分;顯色細胞數51% ～75%為3分;顯色細胞數 ＞75%為4分。以上述兩項乘積得分值作為判斷標準:0分為(-)，1～2分為(+)，3～4分為(++)，5分以上為(+++)。IGF-1R陽性表達定位于胞質和胞膜，p-ERK陽性表達大部分定位于胞核、少部分定位于胞質，c-fos和Ki-67陽性表達定位于胞核。

1.4 統計學方法

采用統計軟件 SPSS 13.0做四格表 χ2檢驗及Spearman等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義，P＜0.01為差異有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 鼻咽組織 IGF-1R、p-ERK、c-fos和 Ki-67蛋白的表達

IGF-1R、p-ERK、c-fos和Ki-67蛋白在鼻咽癌細胞中的陽性表達率分別為 93.33%、93.33%、83.33%、86.67%，在對照組鼻咽黏膜上皮細胞中陽性表達率分別為 36.00%、28.00%、20.00%、4.00%，兩組間差異均有顯著統計學意義，P＜0.01，見表1。

2.2 鼻咽癌細胞 IGF-1R、p-ERK、c-fos和 Ki-67蛋白表達的相關分析

30例鼻咽癌組織中IGF-1R與p-ERK、c-fos和Ki-67蛋白表達呈正相關(表2);p-ERK與c-fos和Ki-67蛋白表達呈正相關(表3);c-fos和Ki-67蛋白表達呈正相關(γ =0.486，P=0.006)(表 4)。

表1 鼻咽癌和鼻咽黏膜上皮細胞中IGF-1R、p-ERK、c-fos和Ki-67蛋白的表達(例，%)

表2 30例鼻咽癌組織中IGF-1R與p-ERK、c-fos、Ki-67表達的相關分析(例)

表3 30例鼻咽癌組織中p-ERK與c-fos、Ki-67表達的相關分析(例)

表4 30例鼻咽癌組織中c-fos與Ki-67表達的相關分析(例)

3 討論

IGF-1R對于正常細胞生長并不是絕對需要的［5］，但在多數惡性腫瘤中則過表達。IGF-1R與其配體結合后，可以激活與細胞增殖密切相關的信號轉導通路Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK［1～3，6］。

細胞外調節蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)是 MAPK家族的重要成員，p-ERK是ERK的活化形式，轉錄因子AP-1、c-Jun和c-fos均可以被ERK磷酸化，進而參與調節細胞增殖、存活、分化等，是1種重要的細胞增殖信號分子［7］。

c-fos是真核細胞轉錄調控因子，可與同族基因產物c-Jun結合成異源二聚體核蛋白復合物，以高親和力結合在靶基因的DNA相關序列AP-1結合區，參與細胞增殖等多種生物學功能［7］，促使腫瘤的發生發展［8］。

Ki-67是細胞核內與細胞分裂增殖相關的蛋白，是檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標之一，Ki-67表達越多，增殖越活躍［9］。

本研究發現:正常鼻咽黏膜上皮細胞中IGF-1R蛋白不表達或低表達，而鼻咽癌細胞中IGF-1R蛋白過表達;鼻咽癌細胞中與增殖相關的信號分子p-ERK、cfos、Ki-67蛋白均呈異常激活或過表達;IGF-1R、p-ERK、c-fos、Ki-67蛋白間表達呈正相關。上述研究結果表明:鼻咽癌中IGF-1R蛋白過表達參與調控細胞增殖，促進鼻咽癌細胞增殖活性增高。調控的可能機制是:鼻咽癌細胞中IGF-1R蛋白過表達，激活信號轉導途徑Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK，活化的ERK(p-ERK)形成二聚體進入細胞核，磷酸化激活AP-1、c-fos等核轉錄因子，引起Ki-67高表達，進而促進鼻咽癌細胞增殖［4，10～13］。有研究發現，鼻咽癌細胞的高增殖活性可能與鼻咽癌的復發和預后有關［11］，IGF-1R蛋白過表達可能與鼻咽癌的復發和轉移有關［4，10］。本研究結果表明鼻咽癌中IGF-1R蛋白過表達促進細胞增殖，因此，結合其它研究結果有理由認為，IGF-1R極有可能成為鼻咽癌的治療靶點［2，4，10］，尤其是針對鼻咽癌復發和轉移的患者。

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