正交設計法對仙靈骨葆顆粒水提取工藝的研究

王君

（哈藥集團中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150078）

仙靈骨葆顆粒是由淫羊藿、丹參、續斷、補骨脂、地黃、知母等中藥制成的復方制劑，具有溫腎壯陽、接骨續筋、強身健骨之功能。主要用于用于骨質疏松和骨質疏松癥，骨折，骨關節炎，骨無菌性壞死等疾病的治療[1～2]。本文采用L9（34）正交試驗設計，以綜合指標為評價指標，考察水加入量（A）、提取時間、提取次數三個因素對綜合指標的影響，確定仙靈骨葆顆粒合理可行的水提取制備工藝條件。

1 儀器與試藥

Waters515泵；Waters 486檢測器；N2000色譜工作站。

淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；處方中所用藥材均符合中國藥典2005年版一部標準；甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 實驗設計

本文主要研究仙靈骨葆顆粒水提取工藝研究部分，以淫羊藿苷和干膏收率相結合的綜合指標作為評價指標，通過對水加入量（A）、提取時間（B）、提取次數（C）三個考察對象的研究，進行正交試驗優化，篩選出最佳水提取工藝。

3 提取工藝的研究

3.1 提取方法

取淫羊藿、續斷、知母、補骨脂、地黃等五味藥材，按正交設計表的提取方法進行試驗，合并提取液，濃縮轉移至250ml量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得。

3.2 正交試驗設計

采用L9（34）正交試驗設計進行試驗，選擇A、B、C三個因素作為考察因素，以淫羊藿苷和干膏收率相結合的綜合指標為考察指標，因素水平安排見表1。

3.2.1 干膏收率考察

精密量取上述9種溶液各10ml，分別置于已稱重的蒸發皿中，置于水浴鍋上蒸去大部分水分后，放入烘箱內105℃干燥5小時，取出，放冷，迅速稱重并計算。

干膏收率（%）＝〔（W′×V）/（V′×W）〕×100%

上述式中：W′-干膏重

V′-量取藥液體積

V-定容體積

W-藥材重

表1 因素水平表

3.2.2 淫羊藿苷的含量測定[3]

（1）色譜條件與系統適用性試驗。色譜柱：Thermo C18（4.6mm×250nm,5um）；流動相：甲醇-2.2%醋酸水溶液（57：43）為流動相；檢測波長為270nm，流速1.0ml/min。柱溫：常溫。理論板數按淫羊萑苷峰計算應不低于1500。

（2）對照品溶液的制備。精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥24小時的淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液。

（3）供試品溶液的制備。精密量取上述溶液5ml，轉移至25ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度，密塞，稱定重量，超聲處理1小時，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，即得供試品溶液。

（4）測定法。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。

（5）線性相關性試驗。配制淫羊藿苷對照品溶液，濃度分別為0.0520mg/ml，0.104mg/ml，0.156mg/ml，0.312mg/ml，0.624mg/ml，分別精密吸取10ul進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，以峰面積為縱坐標（Y），淫羊藿苷濃度為橫坐標（X），繪制標準曲線，并計算回歸方程為：Y=22513863.2X+285107.6(Y，峰面積，X，濃度)，（r=0.9999）。

結果表明，在0.052mg/ml-0.624mg/ml濃度范圍內，淫羊藿苷濃度與峰面積有良好的線性關系。

3.3 試驗結果

正交試驗結果見表3、方差分析表見表4。

綜合指標＝干膏重/最大干膏重×40+淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量×60

結果表明：按綜合指標考慮，對仙靈骨葆顆粒水提取工藝的影響程度為A＞B＞C，即加入水量＞煎煮時間＞煎煮次數。最佳水平為A3B3C3即處方藥材加14倍量水，提取3小時，提取3次。

3 討論

仙靈骨葆顆粒在仙靈骨葆片劑的基礎上改劑型而成，故在制備工藝研究中保持原有制法，即淫羊藿、續斷、補骨脂、地黃、知母等五味中藥材用水提取、濃縮成稠膏，丹參分成細粉混入稠膏內制成軟材，再制粒、干燥整粒，即得。本試驗研究通過對加入水量、煎煮時間、煎煮次數的系統考察，細化了工藝參數，能夠更好的指導生產。同時，綜合指標的引入，對于評價工藝的優劣和質量指標的建立有重要的指導意義。

表2 淫羊藿苷濃度與峰面積的關系

表3 正交試驗結果

表4 方差分析表

[1]石玉印.仙靈骨葆膠囊臨床驗證總結.世界中醫骨傷科雜志 2000；2（2）：18-21.

[2]周紅英，黃炳輝，等.133例骨質疏松癥患者的治療方法研究.中國臨床醫藥研究雜志.2003；110：21-22.

[3]馬新飛，殷放宙，李林，等.HPLC測定仙靈骨葆片中淫羊藿苷的含量.中華中醫藥學刊，2007，25（10）：2194-2195.