抑癌基因RUNX3在胃癌中的表達及臨床意義

程智勇，韓 猛，門曉彥，易喜賢

（1.河北省秦皇島市第一醫院普外一科，河北秦皇島 066000；2.河北省秦皇島市海港醫院內分泌科，河北秦皇島 066000）

抑癌基因RUNX3在胃癌中的表達及臨床意義

程智勇1，韓 猛1，門曉彥2，易喜賢1

（1.河北省秦皇島市第一醫院普外一科，河北秦皇島 066000；2.河北省秦皇島市海港醫院內分泌科，河北秦皇島 066000）

目的探討胃癌組織中RUNX3基因表達與胃癌臨床病理的關系及其對預后的判斷價值。方法應用免疫組織化學SP技術和圖像分析技術，研究RUNX3在胃癌和正常胃黏膜組織中的表達情況及陽性表達面積、強陽性表達面積，分析與病理參數的關系，并采用Kap1an-Meier生存曲線分析不同表達水平對術后生存率的影響。結果發現胃癌組織RUNX3表達陽性率、陽性面積、強陽性面積均明顯低于正常胃黏膜組織（P＜0.01）。胃癌組織RUNX3表達與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴轉移、腫瘤分期明顯正相關（r=0.86，P＜0.05），術后3、5年生存率低表達者明顯低于高表達者（P均＜0.05）。結論RUNX3基因表達低下或丟失與胃癌發生、浸潤、轉移有關，可作為預測胃癌患者術后生存率的指標。

胃腫瘤；基因表達；免疫組織化學

胃癌的發生是一個多因素、多步驟的復雜過程，遺傳因素也在其中扮演著重要角色。新近研究發現［1］，人類runt相關轉錄因子基因3（runtre1ated transcription factor gene 3，RUNX3）可能也是一種抑癌基因，且在人類正常組織器官的形成以及在某些組織的癌變過程中可能起著重要作用。2010年5月—2011年1月，我們采用免疫組織化學技術結合圖像定量分析RUNX3在胃癌不同臨床病理參數下的表達差異及對預后判斷的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：胃癌組82例，為本院外科手術后隨訪生存超過5年的胃癌患者手術切除標本，病理檢查診斷明確。腫瘤大小、部位、大體類型及漿膜受侵狀態、摘除之淋巴結分組均根據手術記錄。胃癌組患者中，男性60例，女性22例，年齡30～78歲，中位年齡56歲。依據國際抗癌聯盟分級標準，Ⅰ、Ⅱ期胃癌59例，Ⅲ、Ⅳ期23例。對照組30例，同期經胃鏡及病理診斷的正常胃黏膜組織。男性18例，女性12例，年齡32～74歲，平均52歲。

1.2 主要試劑與儀器：鼠抗人RUNX3單克隆抗體（Anti-dobi Diagnisica，Inc，USA，購自美國Santq Gruz公司），SP免疫組織化學試劑盒購自邁新公司。Axiop1an 2 imaging顯微圖像分析系統（ZEISS，Germany）。

1.3 免疫組織化學染色：標本甲醛固定，石蠟包埋，4μm連續切片，采用免疫組織化學SP技術檢測標本中RUNX3表達，高溫、高壓修復抗原。每批實驗均設有陰性、陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，已知陰性切片做陽性對照。RUNX3表達以胃腺上皮細胞或癌細胞胞漿中出現明顯的黃色、棕黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞。

1.4 圖像分析：所有切片圖像經Axiop1an 2多功能全自動熒光顯微鏡和AxioCan數碼相機真彩輸入，畫面130萬像素。圖像經增強、分割和二值化處理，通過KS400圖像分析系統（Ver，3.0）對圖像識別及圖像分析處理以選取測量參數自動測量和分析，數據轉換到Exce1進一步分析處理。經上述處理后，得到陽性表達面積和強陽性表達面積。

1.5 統計學方法：應用SPSS 12.0軟件進行分析，計量數據以±s表示，組間比較采用t檢驗和χ2檢驗，術后生存率采用Kap1an-Meier生存曲線分析，同時采用Log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 RUNX3表達陽性率：胃癌組RUNX3表達陽性率為41.5%（34/82），顯著低于對照組的100.0%（30/30）（P＜0.01）。胃癌中RUNX3表達的陽性面積、強陽性面積分別為（5 028.41±150.22）μm2、（1 724.85±50.22）μm2，對照組分別為（13 824.08 ±352.61）μm2、（6 868.72±201.84）μm2，胃癌組均明顯低于對照組（P＜0.01）。

2.2 胃癌組織RUNX3表達與臨床病理參數關系：腫瘤分化程度、浸潤深度以及漿肌層淋巴結轉移等，差異均有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1 胃癌組織RUNX3表達與臨床病理參數關系Table 1 Correlation between the expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and related clinicopathological parameters（±s，A/μm2）

表1 胃癌組織RUNX3表達與臨床病理參數關系Table 1 Correlation between the expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and related clinicopathological parameters（±s，A/μm2）

*P＜0.01 vs same itemsby t test

C1inicopatho1ogica1 parameters n Positive expression area Strong positive expression area Gender Ma1e 60 6 724.44±232.31 2 243.16±157.42 Fema1e 22 6 083.57±203.26 2 017.55±100.11 Age≤50 years o1d 23 6 843.65±223.64 2 354.42±108.18＞50 years o1d 59 5 987.80±211.85 1 743.80±98.22 Tumor diameter≤3.0cm 45 5 984.21±241.24 3 043.24±150.22＞3.0cm 37 5 812.79±151.15 2 998.48±100.12 Differentiation 1eve1*High and moderate 35 7 550.28±283.45 3 001.51±150.11 Low 47 3 164.84±162.84 9 23.84±105.26 Infi1trating depth*Mucosa/submucosa 21 8 424.64±185.69 4 228.62±174.65 Muscu1ar 1ayer/serosa 61 3 226.23±166.15 945.81±100.12 Lymph nodemetastasis*No 55 9 984.04±392.44 3 024.14±118.11 Yes 27 3 122.12±116.14 926.43±99.45 Tumor stage*Ⅰ/Ⅱ59 9 642.84±211.15 3 083.16±150.21Ⅲ/Ⅳ23 1 521.54±135.45 948.88±25.66

2.3 RUNX3表達與預后的關系：若以胃癌組織RUNX3表達陽性面積＞7 000μm2或強陽性面積＞3 000μm2為高表達，陽性面積＜4 000μm2或強陽性面積＜1 000μm2為低表達，Kap1an-Meier生存曲線分析顯示，RUNX3高表達者術后累計生存率顯著高于低表達者（P＜0.05）。高表達者術后3、5年生存率分別為80.6%（29/36）與58.3%（21/36），顯著高于低表達者56.5%（26/46）與34.7%（16/ 46）（P＜0.05）。

3 討 論

胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，占男性第2位，女性第3位，其病死率為惡性腫瘤之首［2-3］。胃癌的患病率存在著明顯的地區差異，在全球范圍內，以亞洲的日本、韓國和中國為最高［4］。盡管近年來世界胃癌的患病率和病死率有下降的趨勢，但每年的新發病例約有35%發生在中國［5］；目前仍是我國患病率和病死率最高的惡性腫瘤之一［6-7］。人類RUNX3基因位于染色體1p36.1，全長約67 kb；RUNX3蛋白是由α亞單位和β亞單位構成的含415個氨基酸殘基的異二聚體。有研究顯示［1］，RUNX3可能與胃黏膜上皮腫瘤的形成具相關性。也有研究認為［8］，RUNX3在胃癌中表達的下調或缺失可能與其啟動子的高度甲基化有關；敲除小鼠的RUNX3基因后，其胃黏膜上皮細胞可出現增生肥大。本研究發現，胃癌組織中無論從RUNX3的陽性表達面積或強陽性表達面積，均與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及腫瘤分期顯著相關，但與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯相關。本研究胃癌組織中RUNX3陽性表達率顯著低于正常胃組織，說明RUNX3調控能力下降，從而導致胃癌的發生、發展。

研究還發現，胃癌組織中RUNX3表達程度顯著影響患者術后生存期，Kap1an-Meier生存曲線分析顯示，胃癌組織中RUNX3高表達者術后累計生存率顯著高于低表達者，RUNX3高表達者術后3、5年生存率均顯著高于低表達者?？梢姡瑱z測胃癌組織中RUNX3表達水平，有利于預測患者預后。以往胃癌基因表達均采用免疫組織化學染色后計算表達陽性百分率，數據只能進行半定量分析，其本質是定性研究。本研究試圖采用圖像定量分析法［6］，將所有切片均經Axiop1an 2多功能全自動熒光顯微鏡，通過KS400圖像分析系統得到陽性表達面積和強陽性表達面積，然后進行定量統計分析，數據不但能反映是否有陽性表達，而且可通過陽性面積和強陽性面積反映RUNX3表達的強弱。綜上所述，RUNX3基因可能在胃癌的發生、發展及轉移中起重要作用，今后通過進一步研究導致其表達下調的具體機制，可能有助于揭示胃癌發生、發展本質。

［1］ITO K，LIU Q，SALTO-TELLEZM，et a1.RUNX3，a nove1 tumor suppressor，is frequent1y inactivated in gastric cancer by protein mis1oca1ization［J］.Cancer Res，2005，65（17）：7743-7750.

［2］CREW KD，NEUGUT AI.Epidemio1ogy of gastric cancer［J］. Wor1d JGastroentero1，2006，12（3）：354-362.

［3］ALBERTS SR，CERVANTES A，VAN DE VELDE CJ.Gastric cancer：epidemio1ogy，patho1ogy and treatment［J］.Ann Onco1，2003，14（Supp12）：31-36.

［4］ELLEY JR，DUGGAN JM.Gastric cancer epidemio1ogy and risk factors［J］.JC1in Epidemio1，2003，56（1）：1-9.

［5］SETIAWAN VW，ZHANG ZF，YU GP，et a1.GSTT1 and GSTM1 nu11genotypes and the risk of gastric cancer：A case-contro1 study in a Chinese popu1ation［J］.Cancer Epidemio1 Biomarkers Prev，2000，9（1）：73-80.

［6］NUIWX，QIN XY，LIU H，et a1.C1inicopatho1ogica1 ana1ysis of patients with gastric cancer in 1200 cases［J］.Wor1d J Gastroentero1，2001，7（2）：281-284.

［7］YIN T，JIXL，SHENMS.Re1ationship between 1ymph node sinuses with b1ood and 1ymphatic metastasis of gastric cancer［J］.Wor1d J Gastroentero1，2003，9（2）：207-216.

［8］OTTO F，LUBBERTM，STOCK M.Upstream and downstream targets of RUNX proteins［J］.JCe11Biochem，2003，89（1）：9-18.

（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF ANTI-ONCOGENE RUNX3 IN GASTRIC CARCINOMA

CHENG Zhiyong1，HAN Meng1，MEN Xiaoyan2，YIXixian1
（1.The Frist Departmentof Greneral Surgery，the First Hospital of Qinhuangdao City，Hebei Province，Qinhuangdao 066000，China；2.Departmentof Endocrinology，the Haigang Hospital of Qinhuangdao City，Hebei Province，Qinhuangdao 066000，China）

ObjectiveTo study the expression of anti-oncogene runt-re1ated transcription factor gene 3（RUNX3）and its c1inica1 significance in gastric carcinoma patho1ogy and prognosis.MethodsSP immunohistochemistry and image ana1ysis were used for studying the gene expression，positive expression area and strong positive expression area of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and norma1gastric mucosa tissue.The inf1uence of different expression 1eve1s on postoperative surviva1 rates was ana1yzed with Kap1an-Meier surviva1curves.ResultsPositive percentage，positive expression area and strong positive expression area of RUNX3 expression in gastric carcinoma tissue were much higher than those in norma1gastric mucosa tissue（P＜0.01）.Expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue was re1ated to differentiation degree，infi1tration depth，1ymphatic metastasis and tumor stage in gastric carcinoma tissue obvious1y.As for postoperative surviva1 rates for 3 and 5 years，itwas obvious1y that the hypo-expresserswere 1ower than hyper-expressers.ConclusionDecreased or 1ost expression of antioncogene RUNX3 corre1ateswith occurrence，infi1tration and metastasis of gastric carcinoma，and it can be used as a prognosis indication for postoperative surviva1 rates.

stomach neop1asms；gene expression；immunohistochemistry

R735.2

A

1007-3205（2011）10-1135-03

2011-07-04；

2011-08-25

程智勇（1977-），男，河北秦皇島人，河北省秦皇島市第一醫院主治醫師，醫學碩士，從事普外科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.007