大戟狼毒提取物對朱砂葉螨生物活性的研究

顧雅靜 ，高寶巖 ，周廣錄 ，許厚博 ，云澤順

（1.寶坻區(qū)王卜莊鎮(zhèn)政府，天津 寶坻 301805；2.天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，天津 300192；3.寶坻區(qū)農(nóng)業(yè)局，天津 寶坻301800）

近30年來,由于大量重復使用非專一性化學殺螨劑，加之螨類世代周期短，年發(fā)生代數(shù)多，許多螨類已迅速產(chǎn)生抗藥性，對作物造成的損失有增無減。因此，使用選擇性新型殺螨劑成為防治植食性螨類的主要措施。而植物源殺蟲劑具有對害蟲作用譜廣，對天敵干擾少，無明顯脊椎動物毒性和環(huán)境中降解迅速、資源豐富、可再生等優(yōu)點。在對川楝素等多種植物源殺蟲物質(zhì)的研究中發(fā)現(xiàn)，它們對害蟲的作用不同于常規(guī)化學農(nóng)藥，其作用靶標和作用機理較為特殊，全方位進行作用，既抑制神經(jīng)電位的正常傳達，又干擾體內(nèi)激素平衡，抑制解毒酶系，特別是對消化系統(tǒng)作用明顯，對肌肉系統(tǒng)也有毒害作用。植物源殺蟲劑以其獨特的作用方式使害蟲不易產(chǎn)生抗藥性。并且殺螨活性物質(zhì)廣泛存在于自然界的多種植物中，完全可以利用植物次生物質(zhì)所表現(xiàn)出來的綜合優(yōu)勢，來彌補目前現(xiàn)有殺螨劑存在的眾多缺陷。因此，從植物源天然產(chǎn)物出發(fā)來尋找結構物質(zhì)，成為新型殺螨劑研發(fā)的熱點之一。使用植物提取物的粗制品直接防治螨類，或者明確其活性物質(zhì)結構，化學模擬合成，對于殺螨劑的研究開發(fā)和植物的綜合利用具有重要的意義。

大戟狼毒Euphorbia fisherianasteud var.komarovina(prokh)Chu 是大戟科（Ruphorbiaceae）大戟屬的一種有毒植物。其殺蟲活性成分對植物害蟲有拒食、抑制作用,制成的殺蟲劑對人毒性低,易于自然分解，施用后無殘留,是一種理想的植物殺蟲劑，此種資源豐富且采集時不會破壞環(huán)境。為此，用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物對朱砂葉螨卵和成螨的生物活性進行了測定。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試植物大戟狼毒，將其洗凈后在室內(nèi)陰干（約 25℃），放入恒溫箱內(nèi)（40～45℃）鼓風機吹干至材料發(fā)脆。然后磨碎過60目篩，以供備用。

供 試 朱 砂 葉 螨 （Tetranychus cinnabarinusBoisduval）為室內(nèi)飼養(yǎng)的敏感品系：養(yǎng)蟲室的溫度（25±1）℃，相對濕度（50±10）%，光照（L∶D 為18∶6 h）。

化學藥品：吐溫80（聚山梨酯），廣東汕頭市西隴工廠生產(chǎn)；石油醚、三氯甲烷和甲醇等均為分析純，北京北化精細化學品有限公司生產(chǎn)。

試驗儀器：微型植物試樣粉碎機，黃驊市中興儀器有限公司制造；RE52－98旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠制造；SHB-ⅢA循環(huán)式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；OLYMPUS S251雙目立體顯微鏡。

1.2 試驗方法

1.2.1 冷浸提取法

準確稱取3份植物干粉，每份50 g，分別裝入500 ml三角瓶內(nèi)，加入干粉5倍量的有機溶劑石油醚，室溫下(30±2)℃分別浸提3次，每次3～5 d，過濾，合并3次的提取物，稱重。

1.2.2 萃取分離

稱取大戟狼毒石油醚提取物5 g，用10倍量的石油醚溶解，裝入分液漏斗中，采用液—液分配法萃取。依次用氯仿、甲醇兩種溶劑以1∶1為配比各萃取3次，分別合并萃取液，將這些萃取液減壓濃縮至稠膏狀，稱重。

1.2.3 成螨觸殺測定

玻片浸漬法：用雙面膠帶將健康活潑、大小一致的雌成螨背部向下粘于載玻片的一端，在溫度為 (25±1)℃，RH85%左右的生化培養(yǎng)箱中放置4 h后，鏡檢剔除死亡或受傷個體，保證每玻片葉螨數(shù)為30頭，在藥液中浸5 s取出，用吸水紙吸掉多余的藥液，處理后置于生化培養(yǎng)箱中，于24 h后觀察其死亡情況，接觸動者為活，不動者為死，按abbott公式計算校正死亡率。

1.2.4 卵毒力測定

參考FAO推薦的葉片殘毒法 （Leaf-residue method）并加以改進，采集新鮮的蘋果葉片，葉柄截去0.5 cm，并在葉柄上包上濕棉球，放在水培養(yǎng)臺上，每片葉片接雌成螨20頭，置于(25±1)℃下任其產(chǎn)卵24 h，去除雌成螨，檢查記錄卵粒數(shù)后，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中，當卵齡達到36～48 h進行測定，將帶卵的葉片浸入各處理藥液5 s，然后放在吸水紙上陰干，放回水培養(yǎng)臺上，待對照組卵孵化并發(fā)育至若螨階段，檢查統(tǒng)計各處理死亡率。

1.3 統(tǒng)計分析方法

將所得數(shù)據(jù)用Finney機率分析法求出毒力回歸式，并對該方程式進行卡方適合性檢驗。當回歸式符合實際情況后，求出LC50，以及LC50的95%置信限。

2 結果與分析

2.1 最佳提取物的確定

由表1結果顯示，大戟狼毒石油醚提取物對朱砂葉螨成螨的活性最高，24 h后死亡率和校正死亡率分別為56.78%和53.73%。氯仿和甲醇提取物對朱砂葉螨成螨的生物活性相對較低，死亡率僅達到15.61%和14.64%。

2.2 最佳萃取物的確定

將大戟狼毒石油醚提取物和萃取物分別稀釋成5個不同的濃度 （1,0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ml）,對朱砂葉螨進行生測，分別求出毒力回歸方程及致死中量（LC50）。從表2結果我們可以看出，大戟狼毒石油醚提取物對卵的生物活性較好，LC50達到0.170 9 mg/ml，而成螨對大戟狼毒石油醚萃取物較敏感，LC50為0.673 6 mg/ml。

3 討論

表1 大戟狼毒提取物對朱砂葉螨成螨的生物活性

表2 大戟狼毒石油醚提取物對朱砂葉螨的生物活性

目前，大戟狼毒在醫(yī)藥方面研究比較多。狼毒大戟為大戟科狼毒大戟的干燥根,為中藥狼毒的來源之一,臨床用于治療腫瘤、結核病和皮膚病等。并且大戟狼毒在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載有殺蟲功能。因此，本文對它的殺螨活性進行了研究。結果發(fā)現(xiàn)，用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物對成螨處理后，整個身體腫脹，體表光滑；卵殼被破壞，呈膠狀。而且不同蟲態(tài)對藥劑的敏感程度不同，這可能與螨不同蟲態(tài)身體內(nèi)分泌或誘導不同的物質(zhì)有關，需進一步研究螨不同蟲態(tài)的生物學特性以及藥劑對它的作用方式和生化機理。

狼毒大戟內(nèi)含乙酰基苯丙氨醇、皂甙、強心甙等生物堿、酚類、甾醇、樹脂硬性橡膠等物質(zhì)，具有很強的殺蟲滅鼠功效。其中狼毒大戟內(nèi)的狼毒素、狼毒堿等具有殺蟲活性。徐德昌等人用大戟狼毒根乙醇提取物,制成0.3%大戟狼毒水劑。用0.3%大戟狼毒水劑原液和100倍液對甘藍夜盜(BarathrabrassicaeL.)進行室內(nèi)殺蟲試驗,殺蟲率分別為100%、80%。用0.3%大戟狼毒水劑500～650倍液防治蔬菜桃蚜 (MyruspersicaeS.),效果為90%～97%。利用大戟狼毒浸提殘渣對蠐螬[東北大黑鰓金龜幼蟲(HolotrichiadiomphaliaBates)]進行室內(nèi)喂養(yǎng)殺蟲試驗,殺蟲率為100%。到目前為止，大戟狼毒的化學成分分離還處于研究階段，藥劑對朱砂葉螨活性物質(zhì)是否與以上昆蟲的相同，還需進一步的分離純化和結構鑒定。

大戟狼毒是多年生草本植物，生長在向陽山坡，主產(chǎn)地為東北、華北。此植物有廣大的生長面積，資源充足，而且開發(fā)不會破壞環(huán)境。因此，在植物性殺螨劑的研究開發(fā)方面有巨大的潛力。

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