關節炎丸對佐劑型關節炎大鼠關節的病理研究

鄭 烈 葉丙霖

(甘肅省中醫院，甘肅省蘭州市七里河區安西路 518號，730050)

1 材料和方法

1.1 實驗動物、分組與模型的制備 SPF級 Wistar大鼠 50只，雌雄各半，體重 200±20g。購于甘肅中醫學院動物實驗中心(實驗動物質量合格證編號:SCXK(H)2004-0006-0000005)，動物飼料由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供。參照文獻[1]，實驗動物隨機分為 5組，每組 10只，雌雄各半，分為空白組、模型組、關節炎丸大劑量組、關節炎丸小劑量組、雷公藤陽性對照組。模型的制備用 75%乙醇對大鼠右足跖進行消毒，將弗氏完全佐劑 0.1mL/只，注射于大鼠足跖皮下。空白組大鼠注射生理鹽水 0.lmL/只。

1.2 實驗藥品與試劑 關節炎丸由制附片、制川烏、細辛、白芍、桂枝、黃芪、甘草等藥物組成，具有補益氣血、溫腎養肝、健脾除濕的功效。為棕褐色顆粒，由甘肅中醫學院附屬醫院制劑室提供。雷公藤多甙片(湖南協力藥業有限公司，生產批號:Z43020138)，弗氏完全佐劑由美國 Sigma公司生產。

1.3 給藥方法 參照文獻[2]，根據人和動物間體表面積的換算關系，取關節炎丸濃煎液，按生藥量計算為7.2g/mL，每天關節炎丸大劑量組給予 3mL/只、關節炎丸小劑量組給予 1.5mL/只、空白組和模型組均給予生理鹽水 1mL/只，雷公藤多甙片組給予雷公藤多甙片6.3mg/kg每天。給藥至實驗結束。

1.4 測定方法 關節腫脹度采用玻璃容器排水法測量:首先在每只大鼠的踝關節下做一標記。其次向內徑 2cm的 20mL量筒內注入純凈水，液面與量筒最高刻度平齊。用最小刻度為 0.1mL的 5mL注射用針管吸取量筒內純凈水約 3mL。再把大鼠足跖緩緩伸入量筒內，使標記與量筒最高刻度平齊。再用已吸入 3mL水的針管向量筒內慢慢注入水液，使液面再次與最高刻度及標記平齊。從注射器上的刻度處讀出其內部剩余液體體積，即為大鼠的足趾體積。重復 2次取均值。實驗開始后每日用上述方法對各組大鼠足跖體積測量一次，并做記錄。關節病理檢查采用常規石蠟包埋、切片、HE染色后光學顯微鏡觀察。

1.5 統計學方法 實驗數據以 ˉx±s表示，采用SPSS13.0統計程序進行單因素方差分析，組間比較選用 LSD及 SNK分析。

表1 各組大鼠右后足跖腫脹度的比較(ˉx±s)

表 2(續表 1) 各組大鼠右后足跖腫脹度的比較(ˉx±s)

表 3(續表 1) 各組大鼠右后足跖腫脹度的比較(ˉx±s)

圖1 各組實驗大鼠右足跖體積變化曲線

2 結果

2.1 各組大鼠關節腫脹度的比較 結果見表 1、表 2、表 3及圖 1。

2.2 關節病理 取右后足跖關節經 EDTA脫鈣后，選取相同部位的關節組織，用 10%甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，在光學顯微鏡下觀察，病理結果與大多文獻報道相符合[3]。空白組:軟骨表面光滑，基質呈均質狀，軟骨細胞排列層次清楚。模型組:可見大量炎性細胞浸潤，軟骨有不同程度缺損，部分深達軟骨下骨，缺損區內有肉芽組織，滑膜血管增多，軟骨細胞排列不規則，基質分布不均。大劑量組:可見滑膜血管顯著減少，軟骨表面基本光滑，基質較為均勻，軟骨細胞排列層次清楚，未見明顯的軟骨及軟骨下骨質破壞。小劑量組:可見滑膜細胞有不同程度的增生，軟骨表面不光滑，基質分布基本均勻，軟骨細胞排列層次較清楚。雷公藤組:可見軟骨表面不光滑，基質分布基本均勻，部分軟骨細胞出現堆積、壞死，滑膜內炎性細胞浸潤及血管炎表現均顯著減輕。

3 討論

本實驗借助佐劑型關節炎大鼠模型來探討關節炎丸對關節腫脹度和病理改變的影響。由表 1及圖 1可以看出:造模后第 1日，造模各組大鼠右足跖開始出現腫脹，其體積與空白組對照有極顯著性差異(P＜0.01)。模型組大鼠在造模后右足跖體積迅速腫脹，隨后又逐漸減輕，6d后再度腫脹，此則為繼發性炎癥反應，20d左右達到高峰。此時其他癥狀則表現為對側和前足腫脹，且進行性加重，行動不便，耳和尾部出現關節炎小結，體重較空白組增長明顯緩慢，這些表現接近人 RA。給藥各組在給藥一周后足跖體積開始逐漸、持續下降，其足跖體積在第 23d時與模型組比較已有明顯差異(P＜0.05)，說明各組治療藥物均有效。而且關節炎丸大劑量組治療效果比小劑量組和雷公藤組明顯;在 25d后其體積與空白組比較已無顯著差異(P＞0.05)，說明其炎癥已基本接近正常;在第 29d時與其他 2個治療組比較已有明顯差異(P＜0.05)，說明關節炎丸大劑量組治療效果明顯優于小劑量組與雷公藤組，表明關節炎丸能顯著抑制大鼠的足跖腫脹度。俞小芬等[4]研究表明，關節炎丸可通過抑制細胞因子TNF-a、IL-1的增加，從而改善關節炎癥的紅腫疼痛。病理形態學也顯示關節炎丸較雷公藤對照組能明顯抑制佐劑型關節炎大鼠關節滑膜的炎癥，抑制滑膜破壞及血管翳生成，防止骨關節畸形發生。這些實驗結果進一步佐證了關節炎丸對類風濕關節炎的治療作用，為進行臨床試驗研究提供了實驗依據。今后應當從關節的微觀入手，深入探討關節炎丸治療類風濕性關節炎的內在機制。

[1]徐淑云.藥理實驗方法學[M].第二版.北京:人民衛生出版社，1991:723-724.

[2]章元沛.藥理學實驗[M].第二版.北京:人民衛生出版社，1982:238.

[3]章敏，趙映前.熱痹顆粒劑治療類風濕關節炎的作用機理研究.中成藥，2006，28(12):1787.

[4]俞小芬，薛盟舉，鄭烈.關節炎丸對大鼠佐劑性關節炎治療作用的實驗研究.世界中醫藥，2008，3(2):113.