三種栽培紅豆杉的生藥學研究

符德歡，李學芳，趙彩肖，張曉南，趙庭周，蔣博謀

(1．云南省藥物研究所，云南 昆明 650111;2．桂林醫學院，廣西 桂林 5410003．云南白藥武定基地，云南 武定 651600;4．貴陽醫學院，貴州 貴陽 550000)

云南紅豆杉為紅豆杉科紅豆杉屬植物云南紅豆杉Taxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu的干燥枝葉。別名土榧子，其枝、葉清熱解毒，涼血，驅蛔蟲，消食[1，2]。含多種紫杉烷型二萜化合物及其生物堿，其藥用有效成分紫杉醇對人體癌Hela細胞有顯著抑制作用[3]。其枝葉含巴馬亭Ⅲ、三尖杉寧堿、云南紅豆杉酯甲、乙等[4]。南方紅豆杉為紅豆杉科紅豆杉屬植物南方紅豆杉Taxus chinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(Lemée et lévl.)Cheng et L.K.Fu的干燥枝葉。別名美麗紅豆杉，其葉用于咽喉痛[1，2]。其含紅豆杉總多糖[5]。曼地亞紅豆杉為紅豆杉科紅豆杉屬植物曼地亞紅豆杉Taxus media Rehd.cv.Hicksii的干燥枝葉。又名雜種紅豆杉，為天然雜交種，母本為Taxus cuspidata，父本為Taxus baccata。其4～5年生植物的葉和樹枝中紫杉醇含量與70～80年天然短葉紅豆杉樹皮含量相當[2]。其含3種雙黃酮、葉的乙醇提取物中分離純化得到二萜類化合物、黃酮類化合物[6，7]。人工栽培紅豆杉一方面可解決紫杉醇來源的短缺問題，另一方面又是紅豆杉物種保護的良好措施，使紅豆杉的種質資源得到較好的延續。為此，本文對以上3種人工栽培紅豆杉進行了原植物檢索，藥材性狀檢索，顯微鑒定，及薄層色譜[8]等方面的生藥學研究，為其藥材 (枝葉)的鑒別及其進一步深入研究提供參考依據。

1 實驗材料及儀器

1.1 材料

實驗材料均采自云南武定，經中國科學院昆明植物研究所分類室陶德定副研究員鑒定為紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬植物云南紅豆杉Taxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu，南方紅豆杉 Taxus chinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(Lemée et lévl.)Cheng et L.K.Fu，曼地亞紅豆杉 Taxus media Rehd.cv.Hicksii。

1.2 試劑

乙醇 (化學純)，冰醋酸，甘油，甲醇，TO型生物透明劑，0.1%固綠，0.5%番紅，石蠟，FAA固定液，氨試液，三氯甲烷，丁醇，冰醋酸，中性樹膠，濃硫酸，氯仿。

1.3 儀器

FA2004N電子分析天平，BM－Ⅵ生物組織冷凍包埋機，CS－Ⅳ型攤片烤片機，QP－Ⅲ生物組織切片機，TS－12H+生物組織自動脫水機，MicrE400 Nikon顯微鏡，數碼顯微照相機，SMZ1000體視鏡，GZX－9030 MBE數顯鼓風干燥箱，101A－2E電熱鼓風干燥箱，生物組織攤片烤片機 (CS－IV型)，生物組織刀刃磨機 (MD－II型)，超聲波清洗器 (SK3200LHC)、ZF－Ⅱ型3用紫外分析儀，TDA溫度控制儀等。

2 實驗方法

2.1 原植物及藥材性狀檢索

2.2 顯微鑒定

制作莖、葉橫切面片，粉末片等進行觀察比較、分析描述。

3 實驗結果

3.1 原植物檢索

植物檢索表[9，10]

1.葉較疏，排成羽狀2列，平展。

2.葉質地較薄，邊緣向下反曲或微反曲，葉上部漸窄，基部偏斜成彎鐮狀，披針狀條形至條狀披針形，干后通常色澤變深 …………………1.云南紅豆杉T.yunnanensis

2.葉質地較厚，邊緣不反曲或微反曲，葉較寬長，常呈彎鐮狀，長2～3.5cm，寬3～4.5mm，上部漸窄或微漸窄，先端通常漸尖，中脈帶色澤與氣孔帶不同，上無角質乳頭狀突起，或與氣孔帶相鄰的中脈帶兩邊有一至數條或成片狀分布的角質乳頭狀突起點;種子多呈倒卵圓形………………………………2.南方紅豆杉T.chinensis

1.葉較密，螺旋狀著生，基部扭轉排成二列，斜展。

3.葉質地厚，邊緣微反卷，條形，微彎;長1.2～3cm，寬2～4mm，先端漸尖或微急尖，下面沿中脈的兩側有兩條寬灰綠色或黃綠色氣孔帶，中脈帶上有密生的均勻微小乳頭點;種子扁卵圓形 ……3.曼地亞紅豆杉T.media

3.2 藥材性狀檢索

性狀檢索表

1.枝外皮粗糙，灰褐色或紫褐色，斷面黃白色。氣微，味苦。

2.質脆，易折斷。葉披針狀條形至條狀披針形，邊緣微反曲，有刺狀小尖頭;中脈及兩側氣孔帶均密生角質化乳頭狀突起…………………………………1.云南紅豆杉

2.質硬，不易折斷。葉較寬長，邊緣不反曲，先端漸尖，下面中脈帶上無角質乳頭狀突起………2.南方紅豆杉

1.枝外皮粗糙，灰褐色，斷面白色。氣特異，味苦。

3.質硬，不易折斷。葉條形，先端漸尖，有小尖頭，邊緣微反卷;中脈兩面均凸起，下面葉脈有小乳頭狀突起…………………………………………3.曼地亞紅豆杉

3.3 顯微鑒別

3.3.1 枝橫切面特征

云南紅豆杉:整個橫切呈類圓形，表皮細胞1列，細胞類圓形，微波狀排列，外被角質層。皮層薄壁細胞3～5列，排列疏松。韌皮部細胞扁平，排列疏松，有少數石細胞散在;木質部較寬，約占整個橫切面的3/4，導管放射狀排列，木射線細胞多為1列，有的細胞中含紅棕色物。髓部薄壁細胞大，易碎 (見圖1)。

南方紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:表皮細胞排列較整齊。韌皮部較云南紅豆杉稍寬。石細胞稍多，散在或成群。木射線細胞中無紅棕色物(見圖2)。

曼地亞紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:表皮細胞排列整齊;韌皮部中石細胞偶見 (見圖3)。

圖1 云南紅豆杉枝橫切面圖

3.3.2 葉橫切面特征

云南紅豆杉:上、下表皮細胞各1列，卵圓形或不規則圓形，排列較整齊;外被較厚角質層。柵欄組織細胞1～2列，過中脈。海綿組織細胞排列疏松。中脈較平直，維管束外韌型，木質部管胞散列。維管束周圍的薄壁細胞中含紅棕色物。薄壁細胞中含較多草酸鈣砂晶及色素物 (見圖4)。

圖4 云南紅豆杉葉橫切面圖

南方紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:上、下表皮細胞大小相近，微波狀排列;中脈向上突出，維管束周圍的薄壁細胞中無紅棕色物 (見圖5)。

圖5 南方紅豆杉葉橫切面圖

曼地亞紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:上、下表皮細胞類方形;中脈微向下突出，維管束類圓形。薄壁細胞中紅棕色物及草酸鈣砂晶稀少 (見圖6)。

圖6 曼地亞紅豆杉葉橫切面圖

3.3.3 粉末特征

云南紅豆杉粉末:①葉下表皮細胞表面觀類多角形，壁略厚，氣孔較多，凹陷，保衛細胞較大，呈啞鈴型。②草酸鈣砂晶存在薄壁細胞中或鑲嵌于纖維上，顆粒狀。③上表皮細胞表面觀類多角形，垂周壁平直，無氣孔。④ 石細胞少見，類三角形，壁較厚，胞腔小。⑤ 樹脂道較多，紅棕色，形狀大小不一。⑥管胞螺紋狀，直徑12～18μm。⑦纖維成束或單個散在，長梭形，壁厚，具斜點狀紋孔 (圖7)。

圖7 云南紅豆杉葉橫切面圖

南方紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:石細胞較多，散在或成群，壁稍厚，胞腔稍大。樹脂道及草酸鈣砂晶較云南紅豆杉少 (圖8)。

曼地亞紅豆杉與云南紅豆杉的主要區別:石細胞偶見，較小，類長方形或類圓形，壁稍厚，胞腔小。草酸鈣砂晶及樹脂道均較少 (圖9)。

3.4 薄層色譜

3.4.1 供試品液的制備

取云南紅豆杉、南方紅豆杉、曼地亞紅豆杉3種藥材粗粉各4.0g左右，分別加入95%的乙醇50mL回流2h，過濾，取濾液放入蒸發皿置水浴上(溫度62℃)濃縮成膏狀，然后分別加入10mL蒸餾水溶解，移入分液漏斗中，分別加入10mL氯仿萃取2次，取下層液濃縮至5mL作為供試品。對照品為紫杉醇批號100382－200301(中國藥品生物制品檢定所)。

3.4.2 展開條件

按照薄層色譜法試驗用毛細管吸取供試品各10ul分別點于同一硅膠G層析板上，以甲醇∶三氯甲烷4.5∶95為開劑，展開約10cm，取出涼干，噴以5%的硫酸乙醇。105℃加熱至斑點清晰，3種藥材供試品與對照品在同一硅膠G板相應位置上顯相同顏色的斑點。見圖 (10)。

圖10 薄層色譜圖

4 小結與討論

在原植物形態鑒別中參考有關資料列出三者的原植物檢索表。藥材 (枝葉)性狀上云南紅豆杉質脆，易折斷。斷面黃白色。氣微，味苦。中脈及兩側氣孔帶均密生角質化乳頭狀突起。而南方紅豆杉質硬，不易折斷。下面中脈帶上無角質乳頭狀突起。曼地亞紅豆杉質硬，不易折斷，斷面白色。氣特異，味苦。中脈兩面均凸起，下面葉脈有小乳頭狀突起。

枝橫切面特征:云南紅豆杉韌皮部細胞扁平，排列疏松，有少數石細胞散在。南方紅豆杉韌皮部細胞較小，排列緊密，石細胞稍多。曼地亞紅豆杉韌皮部排列較緊密，石細胞偶見。

葉橫切面特征:云南紅豆杉中脈較平直，薄壁細胞中含較多草酸鈣砂晶及色素物。南方紅豆杉中脈向上突出，薄壁細胞中含草酸鈣砂晶及紅棕色物。曼地亞紅豆杉中脈微向下突出，薄壁細胞中紅棕色物及草酸鈣砂晶稀少。

粉末特征:云南紅豆杉粉末石細胞少見，胞腔小，樹脂道較多。南方紅豆杉石細胞多，壁厚，胞腔稍大，樹脂道多。曼地亞紅豆杉石細胞較少且細小，胞腔明顯，樹脂道較稀少。

薄層色譜圖中，3種藥材與對照品在同一硅膠G板相應位置上顯示了顏色較弱的斑點，可能與其藥材提取量、提取方法及紫杉醇含量等有關，還有待進一步深入研究。

通過對3種栽培紅豆杉系統的生藥學研究，在原植物形態、藥材 (枝葉)性狀及顯微特征中均有一定的差異，將為這3種紅豆杉藥材 (枝葉)的鑒別及進一步研究提供資料。

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