維吾爾藥芝麻菜子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙翡翠， 王國(guó)棟， 姜 林

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆烏魯木齊 830000)

維吾爾藥芝麻菜子來(lái)源于十字花科植物芝麻菜Eruca sativaMill.的干燥成熟種子，維吾爾語(yǔ)稱(chēng)“扎渾歐日格”。本品在新疆地區(qū)資源較豐富，維吾爾民間應(yīng)用廣泛。據(jù)《中華本草·維吾爾藥卷》［1］記載，芝麻菜子性二級(jí)干熱，味辛。功能生干生熱，祛寒壯陽(yáng)，通尿通經(jīng)，燥濕開(kāi)胃，散氣除脹，熱膚除斑。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如寒性陽(yáng)痿，小便不利，經(jīng)水不下，濕性納差，氣結(jié)腹脹，雀斑，白癜風(fēng)等。本品雖已收載于《中華本草·維吾爾藥卷》、《中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)·維吾爾醫(yī)學(xué)》［2］等書(shū)籍，但目前尚無(wú)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，很難保證其在臨床使用中的安全性和有效性。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)維吾爾藥芝麻菜子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。

1 儀器與試藥

Waters2695高效液相色譜儀(美國(guó) Waters公司);AG-135電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);SK3300LH超聲清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);Direct-QTM5超純水儀(Millipore公司);YOKO-ZS紫外線(xiàn)分析攝影儀(武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司);YOKO-DF薄層電動(dòng)涂敷器(武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司);ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。芥子堿硫氰酸鹽(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111702-200501)

芝麻菜子樣品于2009年—2010年分別采自新疆庫(kù)爾勒、伊寧、鄯善、和田、吐魯番、哈密、烏魯木齊、庫(kù)車(chē)、阿克蘇、阿圖什等不同產(chǎn)地，共10批，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院中藥鑒定室李永和主任藥師鑒定均為十字花科植物芝麻菜Eruca sativaMill.的干燥成熟種子。

2 方法與結(jié)果

2.1 形態(tài)特征 一年生草本，高20～90 cm。莖直立，通常上部分枝，疏生白色粗毛。基生葉與莖下部葉大頭羽狀分裂、羽狀全裂或不裂，長(zhǎng)5～10 cm，寬2～6 cm，裂片頂端圓，具鈍齒或全緣，側(cè)裂片向葉基部漸小，條狀或披針形。葉表面光滑無(wú)毛，僅背面脈上疏生柔毛;葉柄長(zhǎng)2～4 cm，上部葉無(wú)柄，葉漸小，近長(zhǎng)橢圓形?？偁罨ㄐ蛏?，花瓣4，黃色，有暗色脈紋，直徑1～1.5 cm，雄蕊6，雌蕊1，子房細(xì)柱形，花柱不顯，柱頭頭狀。長(zhǎng)角果圓柱形，長(zhǎng)約2～3 cm，角果頂端具扁平劍形的喙，果梗短而粗，緊貼果軸生。種子每室2行，橢圓形，稍扁，灰黑色或棕黃色，長(zhǎng)2～3 mm，寬1.5～2 mm?；ㄆ?～6月，果期7 ～8 月［3-5］。

2.2 性狀 根據(jù)藥材實(shí)際性狀及參考文獻(xiàn)［3-5］修訂描述。本品呈橢圓形，稍扁，長(zhǎng)2～3 mm，寬1.5～2 mm，表面灰黑色或棕黃色，有黑色小斑點(diǎn)，具細(xì)密的紋理和2條縱列的淺槽，有明顯突起的種臍，突起部位附近有晶狀附著物。種皮薄，破開(kāi)后有綠白色的子葉，具油性。氣微，味辛、苦。

2.3 鑒別

2.3.1 顯微鑒別 分別采用不同的透化方法(水合氯醛、甘油醋酸)進(jìn)行觀察，經(jīng)驗(yàn)證，以水合氯醛透化后的顯微片效果較好，故根據(jù)藥材實(shí)際顯微粉末描述。本品粉末黃綠色。油滴和糊粉粒多見(jiàn)，種皮柵狀細(xì)胞，淡黃色，類(lèi)橢圓形。種皮表皮細(xì)胞，棕黃色，表面觀呈多角形，外壁波狀增厚。內(nèi)胚乳細(xì)胞，壁厚，內(nèi)含糊化淀粉粒;子葉細(xì)胞含脂肪油滴。

2.3.2 薄層鑒別

供試品溶液的制備 取本品粉末1 g，加甲醇50 mL，超聲處理1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備另取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

吸附劑 硅膠G薄層板。

展開(kāi)劑 乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)的上層溶液，展開(kāi)，取出，晾干。

檢視方式 (1)置紫外光燈(365 nm)下檢視;(2)稀碘化鉍鉀顯色。

用上述薄層色譜條件，檢測(cè)不同產(chǎn)地的10批芝麻菜藥材，薄層色譜圖均一致，重現(xiàn)性好，見(jiàn)圖1。

2.4 檢查 雜質(zhì)測(cè)定法、水分測(cè)定法、總灰分測(cè)定法、酸不溶性灰分、過(guò)氧化值測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2010 年版(一部)附錄ⅨA、H、K、P［6］。

2.4.1 雜質(zhì) 測(cè)定不同產(chǎn)地10批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為1.23%，最低為0.88%，平均值為0.97%，并考慮到本次采集樣品生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收加工的差異性，取本試驗(yàn)的最高值增加10%左右，將本品雜質(zhì)限度定為不得過(guò)1.40%，納入標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.2 水分 測(cè)定不同產(chǎn)地10批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為4.71%，最低為4.50%，平均值為4.60%，考慮到本次采集樣品均為2009年以前的樣品，新疆地區(qū)氣候干燥，樣品水分普遍偏低，綜合評(píng)估，將本品水分限度定為不得過(guò)8.0%，納入標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 芝麻菜子的薄層色譜圖A.置紫外光燈(365 nm)下 B.稀碘化鉍鉀顯色1.芥子堿硫氫酸鹽對(duì)照品 2～11.10批芝麻菜子樣品Fig.1 TLC of Eruca sativa seedA.UV lamp(365 nm) B.Dilute iodinated bismuth potassium show color 1.Sinapine cyanide sulfonafe 2 ～11.samples of 10 batches of Eruca sativa seed

2.4.3 總灰分 測(cè)定10批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為7.11%，最低為5.08%，平均值為6.21%，考慮到植物生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收時(shí)間的差異性，取本試驗(yàn)的最高值增加10%左右，將本品總灰分限度定為不得過(guò)8.0%，納入標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.4 酸不溶性灰分 測(cè)定10批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為2.37%，最低為0.37%，平均值為1.30%，考慮到植物生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收時(shí)間的差異性，取本試驗(yàn)的最高值增加10.0%左右，將本品酸不溶性灰分限度定為不得過(guò)2.6%，納入標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.5 過(guò)氧化值 測(cè)定10批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為0.11，最低為0.06，平均值為0.08，考慮到植物生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收時(shí)間的差異性，取本試驗(yàn)的最高值增加10%左右，將本品過(guò)氧化值限度定為不得過(guò)0.12，納入標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 浸出物 參照《中國(guó)藥典》2010年版(一部)附錄Ⅹ A，分別采用50%、70%、90%醇溶性浸出物冷浸、熱浸法測(cè)定，結(jié)果以50%醇溶性浸出物熱浸法結(jié)果較好，故采用此法進(jìn)行浸出物測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，10批樣品數(shù)值最高為19.43%，最低為15.39%，平均值為17.74%，考慮到植物生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收時(shí)間的差異性，取本試驗(yàn)的最低值下浮10%左右，暫定本品浸出物不得少于14.00%。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 脂肪油 測(cè)定10批樣品，取本品每批粗粉1 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取(8 h)至脂肪油提盡，收集提取液，置已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，在水浴上低溫蒸干，在100℃干燥1 h，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱(chēng)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，本品10個(gè)數(shù)值最高為28.93%，最低為18.55%，平均值為22.70%，取最低值減少10%左右，將本品脂肪油質(zhì)量分?jǐn)?shù)定為不得少于17.00%(mL/g)，納入標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.7 芥子堿硫氫酸鹽

2.7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-3%冰醋酸溶液(12∶88)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為326 nm。理論板數(shù)按芥子堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.7.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.7.3 供溶液品溶液制備 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得。

2.7.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.7.5 線(xiàn)性關(guān)系 精密吸取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液(120 μg/mL)2、4、6、8、10、12 mL，分別置于25 mL量瓶中，用甲醇溶液稀釋到刻度，搖勻，精密吸取各10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。得到回歸方程為Y=31 097X+53 340，r=0.999 0。結(jié)果表明，芥子堿硫氰酸鹽在9.60～57.60 μg/mL與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.7.6 精密度試驗(yàn) 精密稱(chēng)取本品(編號(hào)1)0.5 g按以上方法制成供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果芥子堿硫氰酸鹽峰面積的RSD為2.71%。

表1 雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、過(guò)氧化值、浸出物、脂肪油的測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination of impurities，moisture，ash，peroxide value，extract and fatty oil

2.7.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取當(dāng)日配制的供試品溶液(編號(hào) 1)于 0、2、4、8、12、24 h 依法測(cè)定，結(jié)果芥子堿硫氰酸鹽峰面積的RSD為0.30%。

2.7.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取本品6份(編號(hào)1)，進(jìn)行測(cè)定，RSD為0.86%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.7.9 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，稱(chēng)取已知量樣品(編號(hào)1)，分別定量加入芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品0.29 mg，精密加入70%甲醇50 mL，照供試品溶液制備方法處理后，色譜條件下進(jìn)樣，依法測(cè)定，計(jì)算加樣平均回收率為100.18%，RSD為0.84%，表明本方法回收率較好，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination of recovery

2.7.10 定量測(cè)定結(jié)果 分別取不同時(shí)間、不同產(chǎn)地的樣品制備供試品溶液，依法測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中芥子堿硫氰酸鹽的量，定量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，HPLC色譜圖見(jiàn)圖2。

根據(jù)10批樣品的測(cè)定結(jié)果，10批樣品最低為0.19%，最高為 0.25%，平均值為 0.22%，考慮到植物生長(zhǎng)在不同地區(qū)，環(huán)境和采收時(shí)間的差異性，取本試驗(yàn)的最低值下浮10%左右，暫定本品按干燥品計(jì)算，含芥子堿以芥子堿硫氰酸鹽(C16H24NO5·SCN)計(jì)，不得少于0.17%。

圖2 芝麻菜子的HPLC圖Fig.2 HPLC of Eruca sativa seed

表3 芥子堿硫氰酸鹽測(cè)定結(jié)果(n=2)Tab.3 Determination of sinapine cyanide sulfonafe(n=2)

3 討論

3.1 由于芝麻菜與十字花科植物芥子、萊菔子植物有相近的成分［7-8］，所以在芝麻菜子薄層鑒別試驗(yàn)中參考了《中國(guó)藥典》2010年版一部芥子、萊菔子鑒別項(xiàng)下的方法和展開(kāi)條件［6］。并分別以(1)取本品粉末1 g，加甲醇50 mL，超聲處理1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解;(2)取本品粉末1 g，加乙醚30 mL，加熱回流1 h，棄去乙醚液，藥渣揮干，加甲醇20 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解;兩種方法制備供試品溶液。經(jīng)試驗(yàn)，用(1)法制備的供試品溶液進(jìn)行薄層色譜鑒別試驗(yàn)效果較好。又分別以(1)乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 ∶5 ∶1 ∶0.5);(2)乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)的上層溶液為展開(kāi)劑，結(jié)果以(2)為展開(kāi)劑時(shí)，薄層色譜斑點(diǎn)分離清晰。檢視方式分別為(1)置紫外光燈(365 nm)下檢視;(2)稀碘化鉍鉀顯色，結(jié)果2種方法均較好。

3.2 目前關(guān)于芝麻菜子的化學(xué)研究報(bào)道很少，僅有少數(shù)文獻(xiàn)表明本品含脂肪油達(dá)30%左右［1］，同時(shí)經(jīng)預(yù)試本品脂肪油質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，故本藥材研究以脂肪油為測(cè)定指標(biāo)。

3.3 芝麻菜子為十字花科植物，芥子堿為十字花科植物的專(zhuān)屬性成分，且經(jīng)薄層試驗(yàn)鑒別出含有芥子堿硫氫酸鹽的成分，故本文參照《中國(guó)藥典》2010年版一部中萊菔子、芥子，以及相關(guān)文獻(xiàn)中芥子堿的測(cè)定方法［9-10］，采用HPLC法對(duì)芝麻菜子中芥子堿硫氫酸鹽的成分進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明該法可行。

本實(shí)驗(yàn)研究暫定了芝麻菜子藥材質(zhì)量控制指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)值，制訂了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于評(píng)價(jià)維吾爾藥芝麻菜子的質(zhì)量，為保證芝麻菜子藥材臨床安全、可控應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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