GC法同時測定鮮魚腥草中4種成分

2011-05-26 07:18:12蔣玲燕陳曉輝戴榮華畢開順

中成藥 2011年6期

蔣玲燕，李清，陳曉輝，戴榮華，畢開順

(沈陽藥科大學藥學院，遼寧沈陽 110016)

魚腥草為三白草科植物蕺菜Houttuyniae cordataThunb的新鮮全草，又名側耳根、紫蕺、豬鼻孔、九節蓮等［1］，廣泛分布于我國西北、華北、華中和長江以南各地，多生于溝邊、溪邊或林下濕地。其新鮮植株破碎后有刺鼻的腥臭味，故稱魚腥草［2-3］。該藥性味辛，微寒，歸肺經，具清熱解毒，抗菌，抗炎，抗病毒，增強機體免疫力以及利尿等藥理作用［4-6］。目前臨床中魚腥草及其制劑主要用于治療上呼吸道感染，肺膿瘍，尿路炎癥及其它部位化膿性炎癥［5］。魚腥草除具有較高的藥用價值，還具有極高的食療價值，在許多地方將其作為野生蔬菜食用，它也可以作為輔料做成各種菜肴［7］，國家衛生部確定其為藥食兩用的品種之一。

《中國藥典》2010年版一部魚腥草項下對魚腥草只有鑒別項，無定量測定項［8］。阮桂平等［9-14］均是通過測定單一成分甲基正壬酮的量控制魚腥草藥材質量。中藥成分復雜，單一成分定量測定不能全面反應中藥的質量控制，建立多指標成分測定對中藥質量控制具有重要意義，因此本實驗采用氣相色譜法同時測定魚腥草藥材中的4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮。所建立的方法簡便，準確，可以作為魚腥草藥材質量控制的依據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀(Agilent公司);電子調溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);電子天平(天津市天馬儀器廠);AGBP210S電子天平(德國Satorius公司);揮發油提取器。

1.2 試劑甲基正壬酮對照品(批號:118034-200502)和乙酸龍腦酯對照品(批號:110759-200303)購自中國藥品生物制品檢定所。4-萜烯醇對照品和α-松油醇對照品由湖南正清制藥集團提供，純度均大于 97%。十一碳烯(純度大于99.5%)購自Fluka公司。正己烷(色譜純)，購自山東禹王實業有限公司化工分公司，無水硫酸鈉(分析純)購自天津大茂化學試劑廠。鮮魚腥草藥材由湖南正清制藥集團提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱:DB-1毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);程序升溫:70 ℃保持 5 min，以5℃/min上升至140℃，保持5 min，再以20℃/min上升至250℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度280℃(FID);分流比 10 ∶1;進樣量 1 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液配制分別取4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮適量，精密稱定，加正己烷配成 0.990、0.516、8.16、10.40 mg/mL 的貯備液，分別精密量取上述對照品貯備液2、1、1、4 mL置10 mL量瓶中，正己烷定容至刻度，作為混合對照品貯備液，4℃冰箱中保存。

2.2.2 內標溶液配制取十一碳烯適量，精密稱定，加正己烷配成1.988 mg/mL的貯備液，4℃冰箱中保存。

2.2.3 供試品溶液配制稱取本品50 g，洗凈，剪碎，置圓底燒瓶中，加150 mL水，連接揮發油測定器。自測定器上端加水充滿刻度部分，加正己烷1 mL，加熱至沸，保持微沸4 h，停止加熱，冷卻至室溫，分取正己烷層，加無水 Na2SO4約0.4 g，除去水分，取上層溶液至10 mL量瓶，精密加入1 mL內標溶液，正己烷定容，作為供試品溶液。

2.3 方法學驗證

2.3.1 專屬性考察取空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結果顯示在對照品和內標保留時間處無雜質峰干擾，供試品溶液中其他成分對測量無干擾，表明方法專屬性良好。見圖1。

圖1 空白溶劑(A)，對照溶液(B)和供試品溶液(C)GC色譜圖譜Fig.1 GC chromatograms of blank solution(A)，reference solution(B)，sample solution(C)

2.3.2 標準曲線與線性范圍分別精密量取混合對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、1、1.5 mL 置2 mL 量瓶中，精密加入 0.2 mL內標溶液，正己烷定容，即得系列混合對照品溶液，在上述色譜條件下測定。以對照品與內標峰面積比(Y)為縱坐標，以各對照品濃度(X∶mg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程見表1。結果表明4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮分別在 9.90 ～148.5 μg/mL，2.580 ～38.70 μg/mL，40.80 ～612.0 μg/mL，208.0～3 120 μg/mL范圍內線性關系良好。

表1 鮮魚腥草藥材中4種成分的回歸方程Tab.1 Regression equation of four components in Houttuynia cordata

2.3.3 精密度試驗精密吸取混合對照品溶液，在上述色譜條件下連續進樣5次，測得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮的峰面積與內標峰面積比值的 RSD 分別為 0.8%，1.7%，0.8%，1.1%，結果表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗分別精密稱取6份同一批號樣品，每份50 g，照2.2.3項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，測得4-萜烯醇，α-松油醇，乙酸龍腦酯，甲基正壬酮的RSD分別為2.4%，1.5%，1.9%，2.3%，結果表明方法重復性好。

2.3.5 穩定性試驗取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于 0、2、4、8、12、24 h 在上述色譜條件下測定，測得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮與內標峰面積比的RSD分別為2.6%、1.7%、1.2%、1.4%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.6 回收率試驗稱取已知量的同一批號魚腥草藥材25 g，共6份，分別加入各對照品貯備液適量，照2.2.3項下方法制備溶液，在上述色譜條件下測定，4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮的平均回收率分別為 96.1%、95.5%、97.4%、96.7%，RSD 分別為 1.2%、2.4%、2.4%、2.7%。

2.4 樣品測定取10批魚腥草藥材，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，計算鮮魚腥草藥材中4種成分質量分數，結果見表2。