健兒消食口服液澄清工藝的實驗研究

李 靜， 王曉義， 蒲宇紅， 高曉黎

(1.石河子大學醫學院第一附屬醫院，新疆石河子 832008;2.新疆醫科大學藥學院藥劑教研室，新疆 烏魯木齊 830054)

目前中藥口服液的研究大多集中凈化措施對有效成分含量以及對口服液澄明度的影響［1］，中藥口服液放置后易產生沉淀，影響產品的質量。本課題參照《衛生部藥品標準中藥成方制劑》第五冊中健兒消食口服液處方，研制健兒消食口服液。本實驗分別考察了5種澄清工藝對健兒消食口服液中總多糖含量、黃芩苷含量、水浸出物量的影響，為確定健兒消食口服液的澄清工藝提供實驗依據。

1 試藥與儀器

1.1 儀器 SCL－10AVP型高效液相色譜儀(日本島津);UV－2401紫外可見分光光度計(日本島津);BP211D精密天平(德國 sartorius);XYJ80－離心機(金壇市恒豐儀器廠);SENCOW50－1恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司);TGL－16C高速離心機(上海弗魯克機電設備有限公司);ZF－I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。

1.2 試藥 黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110715－200514);葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批 號:0833－9501);蒽 酮 (中 國 聯 化 工 廠，批 號:20030316)。甲醇〔色譜純，fisher公司〕，其他試劑均為分析純。健兒消食口服液(新疆特豐藥業股份有限公司研制，批號:20060426)。

2 實驗與結果

2.1 考察指標及測定方法 從中藥化學成分角度分析，水煎液中既含有極性較大的皂苷類又含有水溶性的多糖類，在運用各種澄清技術時必須考慮這些成分的含量，同時也要考慮每種澄清方法的水浸出物量，達到精制的目的。因此指標擬采用總多糖含量、黃芩苷含量和水浸出物量為指標對澄清工藝進行綜合評價(權重系數為0.4、0.4、0.2)。

綜合評分=(總多糖含量/最大總多糖含量)×40+(黃芩苷含量/最大黃芩苷含量)×40+(最小水浸出物量/水浸出物量)×20

2.1.1 水浸出物量的測定 精密吸取藥液50 mL，置于干燥至恒重并稱重的蒸發皿中，水浴蒸干，105℃烘箱干燥3 h至恒重，取出，迅速置干燥器中冷卻，稱重，計算水浸出物量。水浸出物量(%)=(干浸膏重量/藥材重量)×100%

2.1.2 總多糖的測定(采用硫酸－蒽酮法［2］)

葡萄糖對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品15.21 mg，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含葡萄糖對照品0.304 mg)。

標準曲線的建立 精密吸取上述對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于 25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液2 mL于10 mL具塞刻度試管中，將試管置冰浴中，精密加入2‰硫酸蒽酮溶液(取蒽酮0.2 g，溶于水5 mL與硫酸95 mL的混合液中，振搖溶解，放冷，臨用新配)8 mL，搖勻，于90℃水浴中加熱10 min，取出，立即置于冰浴中，放置10 min，以第一份為空白對照液，在400～800 nm波長下進行掃描，得最大吸收波長為627 nm。照分光光度法(2005年版一部附錄V)，以第一份為空白對照液，在627 nm波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。經回歸得線性回歸方程為:A=0.046 3C －0.013 7，r=0.999 2，在2.4 ～14.6 μg/mL范圍內，線性關系良好。

樣品測定 精密吸取樣品液1.0 mL于1 000 mL瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。再精密吸取上述溶液2.0 mL于10 mL具塞試管中，照標準曲線項下自“精密加入2‰硫酸蒽酮溶液”起，隨行空白，依法在627 nm波長處測定吸光度，根據回歸方程計算總多糖含量。

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2.1.3 黃芩苷的含量測定 采用高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。

色譜條件 ODS色譜柱(Phenomenex 4.6 mm×150 mm，5 μm);甲醇－水－磷酸(47 ∶53 ∶0.2)為流動相;檢測波長為280 nm;流速為1 mL/min;柱溫為40℃。

對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品10.05 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得貯備液(0.201 mg/mL)。再精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含40 μg黃芩苷對照品溶液，作為對照品溶液。

標準曲線的建立 精密吸取上述對照品貯備液(0.201 mg/mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20.1、40.2、60.3、80.4、100.5、120.6 μg/mL的對照品系列溶液。從中分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣濃度(μg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行直線回歸，得線性回歸方程為:A=689 74C－110 328，r=0.999 9。以上結果表明，在20.1～120.6 μg/mL范圍內，黃芩苷峰面積與進樣濃度具有良好的線性關系。

供試品溶液的制備 精密吸取樣品1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲10 min，放冷，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻。取適量于具塞離心管中，離心10 min(3 000 r/min)，取上清液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液作為供試品溶液。

測定方法 分別精密吸取對照品溶液，供試品溶液各20 μL，按上述方法和色譜條件進行測定，用外標一點法計算黃芩苷含量。

2.2 水提取液制備 稱取處方量藥材，按照上述優化提取工藝所確定條件制得提取液并減壓濃縮為3 000 mL(1 mL藥液相當于0.3 g生藥)。

2.3 不同澄清工藝樣品的制備

2.3.1 自然沉降法 精密吸取水提液100 mL置燒杯中自然沉降，靜置24 h，濾過，定容，測定結果見表1。

2.3.2 高速離心法

2.3.2.1 離心轉速考察 精密吸取提取液100 mL 3份，分別按10 000 r/min、12 000 r/min、14 000 r/min轉速離心 15 min，取上清液，加水定容至500 mL，測定結果見表1。

2.3.2.2 離心時間考察 精密吸取提取液100 mL 3份，在14 000 r/min 下，分別離心15 min、30 min、45 min，取上清液，加水定容至500 mL，測定結果見表1。

2.3.3 乙醇沉淀法［2］精密吸取提取液100 mL 5份，加一定量乙醇使含醇量達到30%、40%、50%、60%、70%，靜置24 h，濾過，并用相應濃度的乙醇清洗容器壁上殘留藥液，濾液統一定容至500 mL，測定結果見表1。

2.3.4 ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法

2.3.4.1 澄清劑的配制

A組分溶液:稱取5.0 g A組分細粉，先用少量水攪拌成糊狀，再加水至500 mL，溶脹24 h，攪拌，雙層紗布濾過，即得1%粘膠液。

B組分溶液:稱取5.0 g B組分細粉，用少量1%乙酸溶液，攪拌成糊狀，再加1%乙酸至500 mL，溶脹24 h，攪拌，雙層紗布濾過，即得1%粘膠液。

2.3.4.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保溫20 min，緩慢細流加入B組分，邊加邊攪拌，再緩慢細流加入A組分，攪勻，置60～70℃水浴中保溫30 min，然后4℃靜置24 h，濾過，濾液定容至500 mL，測定結果見表1。

2.3.5 殼聚糖澄清劑法［4］

2.3.5.1 澄清劑的配制 稱取1.0 g殼聚糖細粉，用少量1%乙酸溶液攪拌成糊狀，再用1%乙酸溶液加至100 mL，溶脹24 h，攪拌，即得1%粘膠液。

2.3.5.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保溫10 min，緩慢細流加入1%殼聚糖澄清劑5、8、10 mL，邊加邊攪拌，攪勻后，靜置24 h，濾過，濾液定容至500 mL，測定結果見表1。

3 討論

健兒消食口服液由黃芩、黃芪、白術、陳皮、麥冬等七味藥材組成，是兒童天然胃動力藥，具有促進胃腸運動的功能。水煎液中既含有極性較大的皂苷類又含有水溶性的多糖類，其中多糖類成分則具有較強的免疫調節作用［5］，同時固體物析出越多澄明度越好，故實驗以總多糖含量、黃芩苷含量及總固體物含量作為評價指標，以此綜合考察不同澄清工藝對有效成分含量的影響。

從表1澄清方法綜合評分結果［6］得出:自然沉降＞高速離心法＞乙醇沉淀法＞ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法＞殼聚糖澄清劑法。實驗中筆者發現，高速離心法保留藥液的有效成分最多，但水浸出物量基本接近原液，在存放過程中大分子的雜質聚合產生沉淀;藥液中加入ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑后黃芩苷含量的損失較大，而浸出物量無明顯降低，同時ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法所得溶液經放置72 h有絮狀懸浮物;殼聚糖澄清劑也使黃芩苷含量明顯下降，對水浸出物量的影響不大，除雜后的溶液放置48 h后，其溶液出現絮狀沉淀;乙醇沉淀法與天然澄清劑法相比，隨著乙醇濃度的增加黃芩苷含量上升，總多糖含量下降，而澄明度升高，但放置后溶液穩定性良好。

表1澄清方法考察(n=3)

以上實驗表明，用乙醇沉淀法除雜，制得的成品澄清度、穩定性更好，對有效成分的保留高于其他澄清劑法，縮短生產周期，降低成本，可以使用乙醇法制備健兒消食口服液。

［1］邱 葵.改善中藥口服液澄明度的三點建議［J］.首都醫藥，2000，7(6):43.

［2］陳 偉，林新華.蒽酮－硫酸法測定庫拉索蘆薈多糖含量［J］.中國醫院藥學雜志，2004，24(8):460－462.

［3］李 希，謝守德，羅先本，等.芪菊防感顆粒水提液澄清工藝研究［J］. 中成藥，2005，27(7):825－827.

［4］周進東，吳 靜，劉 武，等.殼聚糖用于咳喘寧口服液澄清工藝的研究［J］. 中成藥，2002，24(5):337－339.

［5］陳永輝.中西醫結合治療小兒厭食癥［J］.實用兒科臨床雜志，2005，20(3):199－200.

［6］趙 軍，李東鋒，張 帆，等.芍丹乙肝顆粒澄清工藝的研究［J］.新疆醫科大學學報，2005，28(2):170－172.