HPLC法測定麥冬中沿階草酮甲的含量

侯浣波 周慧 余萍 曾品濤 鄭一敏

（1四川省第五人民醫(yī)院，四川 成都 610031；2重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶400050；3重慶市現(xiàn)代中藥制藥工程技術(shù)研究中心，400054；4重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗中心，401121）

麥冬（Ophiopogonis Radix）為百合科沿階草屬植物麥冬的塊根，廣泛使用的常用中藥，具有養(yǎng)陰、清心的功效，是一味滋清兼?zhèn)涞难a益良藥[1]。麥冬的化學(xué)成分有甾體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸、揮發(fā)油等[2]。民間諸多抗癌復(fù)方中都含有麥冬，臨床上麥冬復(fù)方也被廣泛用于治療肺癌以及輔助放化療，并取得很好的療效[3-4]。為有效控制其質(zhì)量，作者采用高效液相色譜法測定其中沿階草酮甲的含量，現(xiàn)報道如下：

1 藥品與儀器

Waters高效液相色譜儀（Waters 1525二元泵，Waters 2487紫外檢測器）；Breeze液相色譜工作站（Waters公司）；KQ-50型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器廠）；供試藥材購于重慶市桐君閣中藥材市場，由重慶理工大學(xué)傅善權(quán)副主任技師鑒定為百合科沿階草屬植物麥冬（Ophiopogon aponicus(L.f)KerGawl）的塊根；沿階草酮甲對照品（實驗室自制，批號101008，純度為99.5%）；試劑甲醇為色譜純，水為三蒸水過濾，其他試劑均為AR。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

[5-7]選定色譜條件：Hypersil Cl8柱(150 mm×4.6 mm × 5 μm)；流動相：甲醇-水（75∶25）；檢測波長：298 nm；柱溫：室溫。在此條件下沿階草酮甲的理論塔板數(shù)不低于3 000。

2.2 對照品及供試品溶液的制備

精密稱取沿階草酮甲對照品適量，用甲醇，制成0.306mg/mL的溶液，濾過，即得對照品溶液。取麥冬粉末（40目）5 g，精密稱定置100 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇40 mL，超聲提取30 min，過濾；濾渣再加20 mL甲醇，超聲提取10 min，過濾；濾渣再加20 mL甲醇，超聲提取30 min，過濾，合并三次濾液；濾液減壓濃縮至干，殘渣加甲醇適量溶解，超聲，轉(zhuǎn)移至2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察在上述色譜條件下，分別精密吸取“2.2”項對照品溶液 3，6，9，12，15，18 μL 進樣，以峰面積對質(zhì)量進行回歸，沿階草酮甲的回歸方程為Y=3 645 282 X－420 010（ r=0.999 76），線性范圍為 0.918 ～ 5.508μg。

2.3.2 精密度試驗 取“2.2”項下對照品溶液，進樣10 μL，連續(xù)進樣6次，測得沿階草酮甲峰面積的RSD為0.43%，表明儀器進樣精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗取“2.2”項下制備供試品溶液，分別制備后在 0，2，8，12，24 h 進樣 10 μL，測定沿階草酮甲峰面積的RSD為0.75%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性試驗取同一批麥冬樣品，按“2.2”項下的操作平行制備6份供試品溶液，分別進樣10 μL，就算沿階草酮甲含量，其RSD為1.30%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.5加樣回收試驗精密稱取5份已知含量的同一批麥冬藥材粉末，加入適量沿階草酮甲對照品溶液，按“2.2”項下供試液的制備方法進行制備，將供試液定容至5 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，進樣10 μL,按上述色譜條件測定，計算平均回收率為99.80%，RSD為1.74%。

2.3.6樣品的含量測定取樣品按“2.2”項下方法制備的供試品溶液，進樣10 μL（3次平行），測定峰面積，由外標(biāo)兩點法計算得沿階草酮甲的含量分別為0.09275‰，0.08728‰和0.093 86‰(表1)，對照品及供試品色譜圖見圖1。

表1 麥冬中沿階草酮甲的含量測定結(jié)果

圖1 沿階草酮甲對照品(A)與樣品圖譜（B）

3 討論

供試品溶液的制備，比較了加熱回流提取與超聲提取，其測定結(jié)果無明顯差異，但加熱回流提取的雜質(zhì)比超聲提取多，且超聲提取較簡便，故選擇超聲提取。還比較了超聲提取時間（30，45，60 min），測定結(jié)果分別 0.090 30‰，0.090 69‰和0.091 03‰，差異不明顯，故選擇30 min。文中所建的高效液相色譜法重復(fù)性良好，回收率高，且方法簡便，快速，易于操作，可作為麥冬中沿階草酮甲的含量測定方法。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：106-107.

[2]王慶慧，李先，王金輝.麥冬化學(xué)成分研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2009，11（11）：21-22.

[3]汪波，丁德秭.四君子湯合沙參麥冬湯加減配合化療治療中晚期非小細胞肺癌臨床觀察[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，4（8）：564-568.

[4]孫怡.中醫(yī)治療肺癌中麥冬的應(yīng)用[J].中國保健，2008，16（29）：1437-1438.

[5]何利萍，沈鈞，郝俊，等.HPLC法測定豆制品中游離異黃酮的含量[J].理化檢驗：化學(xué)分冊，2006，42（4）：255-266.

[6]陳乃光，金霞，陳金鳳等.HPLC法測定不同產(chǎn)地葛根中四種異黃酮含量[J].中國醫(yī)師雜志，2005，7（2）：270-271.

[7]夏愛軍，黃河舟，高崗等.HPLC法同時測定淫羊藿藥材中的5個黃酮類成分[J].藥學(xué)實踐雜志，2009，27（4）：284-285，288.