慢性乙肝不同基因型與拉米夫定耐藥關(guān)系的探討

李紅生

乙肝病毒(HBV)基因型是長(zhǎng)期點(diǎn)突變累積形成的,由于HBV在逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄和缺乏校對(duì)酶的作用,HBV突變率較高,基因型反映了HBV自然感染時(shí)發(fā)生變異的特點(diǎn),是病毒變異進(jìn)化的結(jié)果。根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性≥8%的界線,可將其分為不同的基因型。目前,已鑒定的HBV基因型有A～H八種。近年的研究表明,HBV基因型與疾病的臨床表現(xiàn)、治療效果及預(yù)后有密切的聯(lián)系。本研究采用PCR結(jié)合微流芯片對(duì)本地區(qū)63例慢性活動(dòng)性乙型肝炎（CAH）患者血清中HBV進(jìn)行了分型測(cè)定，并對(duì)所有患者進(jìn)行拉米夫定抗病毒治療48周后檢測(cè)YMDD。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 2003年7月～2005年7月，63例CAH患者血清采自本院門(mén)診和住院病人，排除了其他病毒性肝炎以及酒精性肝炎、既往未曾抗病毒治療，其中男40例，女23例，平均年齡（35.2±10.1）歲，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000年第十次全國(guó)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)會(huì)和肝病學(xué)會(huì)修訂的病毒性肝炎防治方案。留取血清標(biāo)本作基因分型、HBV-DNA定量檢測(cè)、YMDD檢測(cè)。

1.2 HBV-DNA水平的檢測(cè)采用熒光定量PCR技術(shù)。Taq酶、dUTP和UNG酶購(gòu)自上海華美生物工程公司。標(biāo)準(zhǔn)品,陰、陽(yáng)性對(duì)照物，PCR緩沖液等購(gòu)自上海復(fù)星實(shí)業(yè)公司。引物序列由上海申友公司合成。熒光定量基因擴(kuò)增儀為瑞士LightCycler公司生產(chǎn)，配備Version5132分析軟件,自行處理相關(guān)數(shù)據(jù)。按照HBV-DNA＞103作為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn),兩次均為陽(yáng)性者作為研究對(duì)象。

1.3 HBV-DNA基因分型微流芯片檢測(cè)

1.4 YMDD檢測(cè)

1.5 給藥方案 所有患者給予口服100mg/d常規(guī)劑量的拉米夫定，療程48周，治療后檢查HBV-DNA及YMDD。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SAS 8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩個(gè)樣本均數(shù)用t檢驗(yàn)，兩樣本率用x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 乙肝病毒基因分型的分布 對(duì)63例CAH 患者血清中HBV進(jìn)行了基因分型，結(jié)果為：B型12例（19.05%），C型45例（71.43%），B+C混合型4例（6.35%），未分型2例（3.17%）。

2.2 治療前乙肝病毒基因分型與其DNA水平及ALT水平見(jiàn)表1。

表1 CAH患者ALT及HBV-DNA的檢查結(jié)果

2.3 治療后乙肝病毒基因分型與其DNA水平及ALT水平見(jiàn)表2。

表2 治療后CAH患者ALT及HBV-DNA的檢查結(jié)果

2.4 治療后基因型與YMDD結(jié)果 見(jiàn)表3。

3 討論

本研究結(jié)果顯示：我市CAH患者HBV基因型主要是B和C型，其中C基因型占71.43%，B基因型占19.05%，以C型為主，以往資料顯示HBV基因型的分布存在著較為明顯的地區(qū)差異，由南向北分布呈現(xiàn)B型為主C型次之到C型為主B型次之的趨勢(shì)，新疆維族以D型為主。

拉米夫定是抗乙肝病毒的主要藥物之一,因其抗病毒作用確切而被廣泛用于治療慢性乙型肝炎。隨著拉米夫定的廣泛應(yīng)用,由拉米夫定導(dǎo)致的耐藥問(wèn)題逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，誘發(fā)乙肝病毒YMDD變異是引起拉米夫定耐藥的主要機(jī)制，當(dāng)YMDD變異病毒株成為優(yōu)勢(shì)株時(shí)就會(huì)影響拉米夫定的抗病毒療效，出現(xiàn)耐藥,導(dǎo)致病毒重新活躍，甚至病情的加重或死亡。目前研究認(rèn)為影響拉米夫定相關(guān)YMDD變異的因素有：(1)拉米夫定用藥時(shí)間。用藥時(shí)間越長(zhǎng),發(fā)生YMDD變異的幾率越大；(2)用藥前病毒荷量、ALT水平及HBeAg狀態(tài)。基線HBV DNA滴度高、ALT水平低或HBeAg陽(yáng)性者較易發(fā)生YMDD變異；(3)前C區(qū)變異；(4)乙肝病毒基因型；(5)聯(lián)合用藥。本研究證實(shí)乙肝病毒基因型和拉米夫定YMDD有關(guān)，C型易產(chǎn)生YMDD變異。