高效液相色譜法測定成都市售蔬菜黃酮含量

李長洲，賴升鳳，向涵，許寧，王文楠，彭曉莉，余小平

（成都醫學院公共衛生系，四川 成都 610083）

黃酮具有去除自由基、抗氧化、抗突變、抗腫瘤和防治心血管疾病等生物學效應［1］。已有研究報道蔬菜中黃酮含量豐富［2－5］，但蔬菜生長的土壤和氣候條件可影響蔬菜中的黃酮含量［6］。本研究在建立高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定黃酮含量的基礎上，檢測了成都市售8種蔬菜中黃酮含量。

1 材料與方法

1.1 材料

8種蔬菜（茄子、苦瓜、洋蔥、芹菜葉、芹菜莖、韭菜、胡蘿卜、玉米）來自成都地區市售。蘆丁標準品購自成都瑞芬思生物科技有限公司；石油醚（沸程30～60℃，分析純）購自成都市科龍化工試劑廠。甲醇、乙腈（色譜純）分別購自美國Sigma公司和TEDIA公司。

高效液相色譜儀由天美科技有限公司提供；檢測器 UV Detector L－2400、泵 L－2130、電子天平由北京賽多利斯系統有限公司提供；DZKE－4型電子恒溫水浴鍋由黃驊市渤海電器廠提供；DHG－9053A型鼓風干燥箱由上海一恒科技有限公司提供；FY－135型號粉碎機由天津泰斯特儀器有限公司提供；60目標準篩由浙江省上于篩具總廠提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 蔬菜處理 將8種蔬菜去枯葉洗凈，鼓風干燥箱40℃將其烘干，粉碎后過60目標準篩，粉末置入30℃石油醚中脫脂8h，室溫干燥后備用。

1.2.2 黃酮提取液制備和黃酮的測定 準確稱取蔬菜粉末樣品0.5g，加入10ml甲醇溶液，放入超聲儀，重復2次，然后將濾液混合，即為黃酮提取液。HPCL測定后參照文獻［7］的方法計算黃酮含量：黃酮含量（mg／100g）＝（V·C·n／W）×100。其中，V為試樣定容量（ml），C為查得標準曲線樣品液的黃酮含量（mg／ml），n為稀釋倍數，W 為試樣重（g）。

1.2.3 標準品溶液制備 精確稱取蘆丁標準品0.5mg，置于10ml量瓶中，加甲醇定容到5ml，搖勻即得1mg／ml質量濃度的溶液，分別取0.10，0.25，0.50，1.00，2.00ml置于10ml量瓶中加甲醇定容到10ml可得含量為0.010、0.025、0.050、0.100、0.200mg／ml的標準品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Allsphere ODS－2Su C18（4.6mm×150mm，5μm）柱，流動相 A（乙腈）：流動相B（水）＝60∶40（體積比），流速1ml／min，進樣量10μl；檢測波長320nm［8］，柱溫為25℃。色譜圖見圖1，2。圖1為蘆丁標準品色譜峰圖，保留時間為2.153 min；圖2為芹菜葉色譜峰圖，測定結果表明芹菜中所測得的為黃酮類物質。

圖1 蘆丁標準品HPLC色譜峰圖Fig.1 The chromatographic of rutin

2 結果與分析

2.1 標準曲線與線性范圍

將不同濃度的標準品溶液依次進樣，進樣量10μl，分別重復3次，以標準品溶液濃度的自然對數為橫坐標（X），峰面積的自然對數為縱坐標（Y）繪制標準曲線，計算回歸方程。蘆丁標準品回歸方程為Y＝7617X＋3785.5，r2＝0.999，黃酮含量在0.02～0.2mg／ml之間的線性關系良好。

2.2 精密度試驗

以0.025mg／ml蘆丁標準溶液進行精密度試驗，進樣量10μl，重復5次，測得峰面積分別為3975.4、3991.2、3957.5、3962.0、3987.9，RSD＝0.90%。峰面積相對標準偏差為0.90%.結果顯示0.025mg／ml蘆丁的精密度良好。

2.3 重復性試驗

準確稱取粉末樣品5份，按照1.2.2的方法制備黃酮提取液，在前述色譜條件下分別測得茄子、苦瓜、洋蔥、芹菜葉、芹菜莖、韭菜、胡蘿卜、玉米中黃酮的RSD 分別為 1.64%、1.25%、0.98%、0.57%、0.61%、0.74%、1.13%、0.80%（n＝5），顯示 HPLC測定黃酮的重復性良好。

2.4 回收率試驗

選擇芹菜葉作為回收率試驗的樣品。取已查標準曲線芹菜葉黃酮含量的提取液3份，各加入同體積0.025mg／ml蘆丁標準液，與未添加蘆丁標準液的同一芹菜葉樣品進行比較，其回收率分別為98.2%、101.1%、98.7%，平均回收率99.3%，RSD為1.22%。結果表明HPLC法測定黃酮的回收率良好。

2.5 常見新鮮蔬菜的黃酮含量

準確稱取各待測蔬菜5份，按照1.2.2的方法制備黃酮提取液，利用建立的HPLC法分別測得茄子、苦瓜、洋蔥、芹菜葉、芹菜莖、韭菜、胡蘿卜、玉米中黃酮含量，計算得各蔬菜黃酮含量，結果見表2。由表2可見，芹菜和韭菜中黃酮含量較高，芹菜葉黃酮含量高于芹菜莖。

3 討論

本實驗采用色譜柱為Allsphere ODS－2Su C18柱，流動相為乙腈和水（60：40），流速1ml／min，柱溫為25℃，進樣量10μl，檢測波長320nm。0.02～0.2mg／ml范圍內呈良好的線性關系（r2＝0.999），平均回收率99.3%（RSD＝1.22%）。黃酮液相檢測條件下，物質分離效果較好，在蘆丁保留時間前后無其他峰顯現，芹菜的物質成分達到很好的分離，表明在此液相色譜條件下，能完成對蔬菜中黃酮含量的準確有效的檢測。本實驗待測8種蔬菜均含有黃酮類物質，不同品種的蔬菜黃酮相差較大。芹菜和韭菜中黃酮含量較高，芹菜葉黃酮含量高于芹菜莖。

表1 常見新鮮蔬菜蔬菜黃酮含量Tab.1 The contents of flavonoids in common fresh vegetables

黃酮類化合物廣泛分布在蔬菜中，不同季節或地區產的同種蔬菜中黃酮含量不同［6］，食物的品種、生長環境等多種因素對蔬菜中類黃酮的分布和含量影響很大。陸廣念等［7］對揚州市售16種蔬菜抗氧化活性與黃酮含量進行測定，16種蔬菜均測出黃酮成分，不同品種黃酮含量差異也較大，含量在101.953～5.162mg／100g之間，黃酮含量與抗氧化能力存在一定的相關性。

另有文獻報道了蔬菜中黃酮物質的具體成分。徐靜等［8］測定天津市售常見30種蔬菜中槲皮素、楊梅黃酮、坎二菲醇和芹菜配基的含量，30種蔬菜中29種檢測出了槲皮素，含量在7.55～0.60mg／100 g鮮重范圍，5種檢測出芹菜配基，7種檢測出玉米黃酮，8種檢測出楊梅黃酮，坎二菲醇在30種蔬菜中均未檢出；藕、洋蔥、豆角、西紅柿、芹菜等蔬菜中類黃酮含量較高。曹杰等［3］測定哈爾濱市售蔬菜水果中芹菜素、山奈酚、槲皮素、異鼠李黃素和毛地黃黃酮5種黃酮物質，芹菜葉中芹菜素含量較高，為84.18mg／100g；洋蔥槲皮素1.72mg／100g，山奈酚1.34mg／100g；西紅柿槲皮素為1.56mg／100 g，其他黃酮物質未檢測出。本實驗中測得芹菜葉黃酮含量為121.23mg／100g，與其結果相近，芹菜葉中芹菜素是主要的黃酮類物質。

芹菜葉的黃酮含量較高，在烹調中棄之可惜。在日常生活可充分利用，將芹菜葉加工成可口的菜肴，如芹菜葉肉餡餃子、芹菜葉煎雞蛋、芹菜葉拌香干、芹菜葉蛋湯等都是既營養又可口的吃法。

［1］白鳳梅，蔡同一.類黃酮生物活性及其機理的研究進展［J］.食品科學，1999，（8）：11－13.

［2］Block G，Patterson B，Subar A.Fruit，vegetable，and cancer prevention：a review of epidemiological evidence［J］.Nutr Cancer，1992，18（1）：1－29.

［3］曹杰，趙秀娟，吳坤，等.高效液相色譜法同時測定蔬菜水果中5種黃酮類化合物［J］.預防醫學情報雜志，2008，24（7）：525－527.

［4］李榮華，夏薇，吳坤.蔬菜中芹菜素高效液相色譜測定［J］.中國公共衛生，2007，23（7）：894－895.

［5］祁英，丁江濤，蘇景秀，等.洋蔥中黃酮類化合物的分布及其抗氧化活性的研究［J］.中國食物與營養，2010，5：67－71.

［6］Quan HJ，Koyanagi J，Ohmori K，et al.Preparati ons of heterosp irostanols and their pharmaeological activities［J］.Eur J Med Chem，2002，37（8）：659－669.

［7］陸廣念，宋曉敏，譚甜甜.揚州市售蔬菜抗氧化活性與黃酮含量分析［J］.揚州大學烹飪學報，2010，127（1）：46－54.

［8］徐靜，郭長江，韋京豫，等.蔬菜中類黃酮物質的高效液相色譜測定法［J］.營養學報，2005，27（4）：276－279.