白銀宮血靈膠囊止血、抗炎作用研究

邱宏聰，李 茂，王 麗

廣西中醫藥研究院，廣西南寧 530022

白銀宮血靈膠囊是由白花銀背藤單味藥材組成，具有益氣化瘀、收斂止血之功效，臨床擬用于治療功能性子宮出血。現有試驗表明白花銀背藤具有一定的止血[1]、抗炎作用[2]。本實驗通過對白花銀背藤制劑的止血、抗炎作用進行研究，為其臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

白銀宮血靈膠囊（批號：070901，廣西中醫藥研究院自制）；雌二醇（E2酶聯免疫檢測試劑盒，ADL公司）；己烯雌酚注射液（批號：061102，上海第九制藥廠）；縮宮素注射液（批號：060915，浙江仙居制藥有限公司）；阿司匹林腸溶片（批號：071209，武漢遠大制藥集團股份有限公司）。

1.2 動物

昆明種小鼠，Wistar大鼠，購自廣西醫科大學實驗動物中心，許可證號：SCXK桂2003-0003。

1.3 儀器

SM-3自動化酶免分析儀（北京天石醫療用品制作所）；ZH-Z離體器官測量系統（淮北正華生物儀器設備有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 對正常小鼠血清雌二醇水平的影響[3]選取雌性小鼠50只，隨機分為空白對照組（等體積蒸餾水），烏雞白鳳丸組（3.0 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（19.0、13.6、8.2g/kg），每組10只。連續灌胃給藥14 d，每天1次。末次給藥后24 h，將動物稱重，摘眼球取血，應用酶聯免疫法測定血清雌二醇水平。

1.4.2 對大鼠離體子宮收縮的影響[3]選取成年未孕雌性大鼠10只，于實驗前72 h皮下注射己烯雌酚0.5 mg/kg，造成人工動情期以提高子宮對藥物的敏感性。猛擊大鼠頭部致昏，取卵巢與子宮分叉處間的中段子宮，剪除周圍組織，沿系膜縱軸剖開子宮角，在克氏液中漂洗干凈。將其平鋪固定在盛有石蠟的培養皿中，將培養皿中充滿克氏液，并持續供給95%O2和5%CO2標準氣體。在石蠟盤中，用固定的兩片平行刀片沿平滑肌纖維的方向取寬2 mm的縱行肌條，用大頭針將肌條的兩端固定，以肌條平展為宜，內膜面朝上，用眼科彎剪刀剪除內膜層，用手術縫線將肌條扎緊打結，另一端打結后再結一個直徑約0.5 cm的環。將肌條分別安置在恒溫平滑肌肌槽中，每個肌槽中分別盛有20 ml 37℃克氏液。肌條在1 g的前負荷下溫育，每20分鐘更換一次新鮮的克氏液，待肌條的自發活動平穩后依次加入生理鹽水、縮宮素、白銀宮血靈膠囊（50、100、150、200 μg/ml），每次更換藥液前要用克氏液反復沖洗，待子宮收縮基本恢復到未加藥前水平再加入下一種藥液。白銀宮血靈膠囊給藥采用累計加量法，由低濃度加到高濃度，藥物終濃度是溶于平滑肌槽20 ml的藥物濃度。計算給藥前后5 min子宮平滑肌條收縮波的平均振幅和平均持續時間以及5 min內收縮波頻率。

1.4.3 對小鼠耳廓腫脹的影響[4]選取小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即空白對照組（等體積蒸餾水），阿司匹林組（0.2 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（同1.4.1）。每日灌胃給藥，連續給藥7d，每天1次。于末次給藥1 h后，用微量注射器取0.05 ml 2%巴豆油涂于小鼠右耳，致炎后處死。立即用口徑為6 mm的打孔器，沿小鼠左右耳廓相同部位打孔取材，然后分別稱重，以兩耳片重量的差值作為腫脹程度指標，并計算抑制率。

1.4.4 大鼠棉球肉芽腫試驗[4]選取小鼠50只，雌雄各半，用乙醚淺麻醉后在腹部剪毛，消毒，切開1 cm長的口子，游離皮膚至左右腋下，并分別植入一個無菌棉球（20 mg），隨即縫合皮膚。術后隨機分為5組，每組10只，即空白對照組（等體積蒸餾水），阿司匹林組（0.2 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（同1.4.1）。于手術開始當日開始灌胃給藥，連續給藥7 d，每天1次。于末次給藥1 h后，將大鼠處死，剝離并取出棉球肉芽組織，在60℃烘箱內干燥4 h稱重，計算棉球肉芽組織質量。

1.5 統計學處理

所有實驗數據均采用SPSS 11.5版軟件進行處理分析，計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 對正常小鼠血清雌二醇水平的影響

結果表明本品的高劑量組能顯著增加正常小鼠血清雌二醇水平，中、低劑量組作用不明顯，見表1。

表1 對正常小鼠血清雌二醇水平的影響（x±s，n=10）

2.2 對大鼠離體子宮收縮的影響

結果表明本品終濃度為100、150、200 μg/ml時可使收縮波的頻率加快，振幅增大，對持續時間影響不明顯，見表2。

2.3 對小鼠耳廓腫脹的影響

結果表明本品能顯著抑制小鼠耳廓腫脹，見表3。

2.4 大鼠棉球肉芽腫試驗

結果表明本品高劑量組能較明顯地抑制大鼠棉球肉芽組織增生，中、低劑量組作用不明顯，見表4。

3 討論

功能性子宮出血屬中醫崩漏范疇，為婦科急癥之一。現代醫學認為功血發病機制與下丘腦-垂體-卵巢軸調節機制失調、子宮內膜凝血和纖溶系統異常以及血栓素和前列環素分泌失調等有關[5-7]，其出血的機制為“雌激素撤退性出血”或“雌激素突破性出血”[8]，目前臨床廣泛使用性激素止血，通過性激素作用，使內膜生長修復或使其全部脫落后修復而止血。

表2 對大鼠離體子宮收縮的影響實驗結果（x±s，n=10）

表3 對小鼠耳廓腫脹的影響（n=10）

表4 對大鼠棉球肉芽腫的影響(x±s，n=10)

本實驗研究表明：本品19.0 g/kg濃度時，能顯著提高血清雌二醇水平，提示本品可能起到調節體內雌激素分泌水平，產生止血作用；100、150、200 μg/ml濃度時可以明顯增強大鼠離體子宮平滑肌的收縮，提示本品能夠通過增強子宮收縮作用達到止血的目的；各劑量均能抑制小鼠耳廓腫脹，高劑量組還可抑制大鼠棉球肉芽腫，提示本品對炎癥有很好的抑制作用。

綜上所述，白銀宮血靈膠囊具有一定的止血、抗炎作用，可為臨床治療伴有炎癥的功能性子宮出血提供參考依據。其主要活性成分和作用機制，還有待于進一步研究。

[1]陳海豐,陳樹翰,吳壽海,等.白花銀背藤止血藥理實驗研究[J].中華實用中西醫雜志,2008,21(4):334.

[2]邱宏聰,李茂,李燕婧.白花銀背藤抗炎作用研究[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(9):142-143.

[3]金聲,周浣芳,常文保,等.酶聯免疫吸附法直接測定血清雌二醇[J].分析化學,1994,22(2):l15-120.

[4]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].2版上海:上海科技出版社,2005:767,769,797.

[5]Chen BH,Giudice LC.Dysfunctional uterine bleeding [J].West J Med.1998,169(5):280-284.

[6]Edmonds DK.Dysfunctional uterine bleeding in adolescence[J].Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,1999,13(2):239-249.

[7]Slap GB.Menstrual disorders in adolescenee [J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2003,17(1):75-92.

[8]張以文.正常子宮出血及功能失調性子宮出血的出血機制[J].實用婦產科雜志,1998,14(2):62-63.