蛇床子配方顆粒質量標準研究

陳培勝 廖彩震 張文惠 朱月信

蛇床子為傘形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果實，具有燥濕祛風，殺蟲止癢，溫腎壯陽的功能，用于陰癢帶下，濕疹瘙癢，濕痹腰痛、腎虛陽痿，宮冷不孕。蛇床子配方顆粒由蛇床子提取、濃縮、干燥、制粒而成，為有效地控制蛇床子配方顆粒的質量，安徽省中藥配方顆粒工程技術研究中心按照國家食品藥品監督管理局頒發的《中藥配方顆粒管理暫行規定》通知要求[1]，借鑒中國藥典[2]蛇床子項下的鑒別和含量測定方法及配方顆粒薄層色譜鑒別方法研究[3]，采用薄層色譜法對蛇床子配方顆粒進行定性鑒別，采用高效液相色譜法對蛇床子配方顆粒的主要活性成分蛇床子素進行定量分析。結果表明，該方法簡便可行，靈敏度高、重復性好，能有效地控制蛇床子配方顆粒的質量，保證配方顆粒在不具備中藥飲片外形后臨床用藥的安全有效。

1 儀器、試劑與樣品

Agilent1200色譜系統(G1611A型四元泵，G1329A型自動進樣器，G1314B型VWD檢測器，Agilent化學工作站)；BT25S型電子分析天平(德國賽特利斯)；FA2104SN型電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司)；UV-8三用紫外儀(無錫科達儀器廠)；Hu-10260B型超聲清洗器(天津恒奧科技發展有限公司)；硅膠GF254薄層板(青島海洋化工廠)。

乙腈(色譜純，天津市四友精細化學品有限公司)；乙醇(分析純，鄭州派尼試劑廠)；純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)；其余試劑均為分析純。

蛇床子素對照品(供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110822-200305)；蛇床子對照藥材，購自安徽亳州中藥材市場，經鑒定為傘形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果實(由安徽中醫學院生藥教研室俞年軍教授鑒定)；蛇床子配方顆粒(安徽濟人藥業有限公司、安徽中藥配方顆粒工程技術研究中心提供)。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

取蛇床子配方顆粒粉末0.3 g，加乙醇5 ml，超聲處理5分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。另取蛇床子對照藥材4 g，加水100 ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5 ml，同法制成對照藥材溶液。再取蛇床子素對照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各6 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以甲苯—乙酸乙酯—正己烷(3∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖1。

圖1 蛇床子配方顆粒薄層色譜圖(365 nm)

2.2 蛇床子素含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent HC-C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈—水(65：35)；檢測波長：322 nm；柱溫：35℃；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；理論板數按蛇床子素峰計算應不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取恒重的蛇床子素對照品適量，加乙醇制成每l ml中含20 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取蛇床子配方顆粒約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，放置2小時，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30分鐘，自然冷卻，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量。精密量取上清液5 ml，置10 ml的量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取蛇床子素對照品溶液、供試品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見圖2。

(a)蛇床子素對照品

(b)蛇床子配方顆粒供試品

2.2.5 線性關系與范圍的考察 精密吸取蛇床子素對照品溶液0.5、1、2、3、5 μl進行色譜測定，按上述2.2.1色譜條件測定峰面積，以蛇床子素含量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程為Y=29.632X+0.295,相關系數r=0.99999，結果表明在2.0～20.0 μg/ml范圍內蛇床子素濃度與峰面積積分值有良好的線性關系。

2.2.6 穩定性試驗 取同一蛇床子素對照品溶液與蛇床子配方顆粒供試品溶液，分別測定5次，每次間隔1小時，結果表明蛇床子素對照品與蛇床子配方顆粒供試品溶液在4小時內穩定，穩定性良好，峰面積RSD值分別為0.13%和0.31%。

2.2.7 精密度試驗 取蛇床子素對照品溶液，連續5次重復進樣，得到峰面積積分值并計算其RSD為0.23%，結果表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復性試驗 取同一供試品5份，按供試品制備與測定方法進行重復性試驗樣品制備并測定，得到供試品的蛇床子素含量為1.53 mg/g，RSD為1.77%，結果表明該方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 稱取已知含量的樣品共5份，分別精密加入蛇床子素對照品溶液各0.1 ml，按供試品制備與測定方法進行回收率試驗樣品溶液的制備并測定，結果見表1。得到的蛇床子素回收率在98%～102.2%之間，說明樣品制備方法和檢測方法均可行。

表1 回收率試驗結果

2.2.10 樣品含量測定

精密吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μl，分別注入液相色譜儀，測定，外標法計算，結果見表2。

表2 10批樣品中蛇床子素含量測定結果

批號含量(mg/g) 批號 含量(mg/g) 0812411.7980812461.8380812421.9030812471.8940812431.8550812481.8880812441.9130901011.8260812451.8610901021.797

3 討論

蛇床子化學成分主要包括揮發油及香豆素類化合物等[4]，其中香豆素類化合物蛇床子素為其主要活性成分，故本實驗以蛇床子素含量作為控制指標。

蛇床子配方顆粒為單味中藥濃縮顆粒，根據《中藥配方顆粒質量標準起草說明的編寫要求》，鑒別方法盡量保持與藥典的一致性[1]。本試驗薄層色譜鑒別和含量測定方法依據中國藥典一部蛇床子藥材鑒別和含量測定項下方法進行，為了與配方顆粒的制備工藝一致,對照藥材溶液的制備采取水煮提取,水提液蒸干再用乙醇提取的方法。得到的薄層色譜圖斑點清晰、背景干擾少，靈敏度高、重現性好；液相色譜圖蛇床子素的對稱性、分離度良好。蛇床子配方顆粒質量標準研究未見文獻報道，該研究經過反復實驗，最終確定以藥典藥材鑒別方法建立蛇床子配方顆粒鑒別方法，取得較好的效果，對中藥配方顆粒質量標準規范化研究具有示范意義。

根據蛇床子藥材含量測定結果10批蛇床子配方顆粒含測結果、中試生產投料量、出膏率等指標，可暫定蛇床子配方顆粒每袋裝0.6 g，相當于10 g飲片，每袋含蛇床子素不得少于0.75 mg。

[1] 國家藥品監督管理局.關于印發《中藥配方顆粒管理暫行規定》的通知(國藥監注[2001]325號).2001-07-05.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社，2005：219-220,295-266.

[3] 陳培勝，廖彩震，成守玲,等.白花蛇舌草配方顆粒薄層色譜鑒別方法研究.環球中醫藥，2010,3(5)：347-348.

[4] 鄭虎占，董澤宏，佘靖. 中藥現代研究與應用[M]. 北京：學苑出版社，1997: 4133.