Graves病相關眼病患者血清白介素（IL）-16的測定

顧雪疆，林秀麗，張海凌，葛勝潔，陳咨苗，朱虹，沈飛霞

（溫州醫學院附屬第一醫院 內分泌科，浙江 溫州 325000）

白細胞介素-16（IL-16）是一種具有化學趨化活性的細胞因子，通過和細胞表面CD4分子結合，能引起CD4+的細胞，如T細胞、嗜酸性粒細胞等增殖及向炎癥部位遷移聚集[1]。有研究報道稱眼部組織受到來源于Graves病患者的IgG刺激時，IL-16的RNA及蛋白水平升高[2-3]。我們先前的研究發現IL-16基因的單核苷酸多態性和Graves病相關眼病（Graves’opthalmopathy，GO）的發病易感性相關[4]。但有關GO患者血清IL-16水平鮮有報道。本研究旨在探討GO患者的血清IL-16水平及其和疾病的活動性關系。

1 對象和方法

1.1 研究對象 根據美國甲狀腺協會制定的 NOSPECS分級標準及1989年Mourits等[5]提出的臨床活動度評分（clinical activity score，CAS）標準確定眼病的嚴重程度及病變活動度， 中重度眼病及CAS大于4者入組（CAS計算積分包括球后疼痛、壓迫感、上下側向轉動痛、眼瞼紅腫、球結膜彌散充血、結膜水腫、淚阜腫脹、眼瞼水腫、最近1～3個月眼球突出度增加2 mm或以上、最近1～3個月視力下降及眼球運動度降低5度以上，每項1分）；患者CAS評分均由眼科醫生專科檢查協助確定。6個月內眼病沒有變化定義為非活動性眼病。從我院內分泌門診與住院收治患者中篩查出活動性GO患者（未治療）70例（活動性GO組），其中男30例，女40例，年齡（49±11.3）歲；非活動性GO患者47例（非活動性GO組），其中男20例，女27例，年齡（45±10.34）歲，均經過激素和（或）免疫制劑治療。所有眼病患者在入選時甲狀腺功能均為正常。正常對照組為70例健康志愿者，其中男29例，女41例，年齡（47±8.9）歲。所有入組者均排除其他自身免疫性疾病和嚴重心、肝、腎疾病。

1.2 方法

1.2.1 病史詢問及體格檢查：研究方案經院倫理委員會批準，受試者簽署書面的知情同意書。按照統一制定的表格對研究對象進行病史詢問及體格檢查。1.2.2 生化指標的測定：對研究對象進行甲狀腺功能[uTSH、FT3、FT4和（或）TT3、TT4]、TRAb、TgAb和TPOAb測定，均用化學發光法測定。

1.2.3 血清標本保存在-80 ℃，利用酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（Quantine，R&D Systems，Minneapolis，MN， USA）檢測血清IL-16水平。

1.3 統計學處理方法 運用SPSS10.0統計學軟件對數據進行處理，計量資料用±s表示，兩組間比較采用t檢驗，計數資料采用x2檢驗。

2 結果

2.1 活動性GO組、非活動性GO組和正常對照組CAS評分和血清IL-16、FT3、FT4、TSH檢測結果 活動性GO組患者血清IL-16水平顯著高于非活動性GO組患者和正常對照組，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。相關分析顯示IL-16與FT3、FT4水平無相關（r=0.064，P>0.05），與sTSH水平無相關性（r=0.071，P>0.05）。

表1 各組CAS評分、一般資料和血清IL-16檢測結果比較

2.2 活動性GO組CAS評分與IL-16相關性 GO患者隨著CAS評分的升高，血清IL-16水平呈現出升高趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

表2 活動性GO組CAS評分與IL-16相關分析

3 討論

本研究中，我們發現活動性GO組患者血清IL-16水平顯著高于非活動性GO組患者和正常對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。進一步分析顯示CAS評分越高GO患者的IL-16水平也越高，但可能由于病例數的原因，差異無統計學意義（P>0.05）。

IL-16是一種CD4分子的配體，對表達CD4分子的細胞，如T細胞、嗜酸性粒細胞等，具有趨化活性；參與T細胞和樹突狀細胞的相互作用，促進并調節上述細胞合成釋放各種炎癥因子[6-9]。體外研究顯示，IL-16能夠促進外周血單核細胞IFN-γ的產生，并抑制IL-4、IL-5和IL-13的合成[9-10]。IFN-γ是一種TH1細胞因子，而IL-4、IL-5和IL-13則是一種TH2細胞因子。體內研究也顯示給小鼠加用IL-16會抑制TH2細胞因子的水平[11]。進一步研究發現，IL-16具有引起TH1細胞遷移的作用[12]。上述研究提示，IL-16對炎癥過程中TH1細胞的聚集和活化具有重要的作用，而對TH2免疫反應表現為抑制作用。

眾所周知，GO是一種以TH1免疫反應為主導的自身免疫性疾病[13-16]。Wakelkamp等[16]報道GO在活動期以TH1細胞因子表達增高為特征，TH2細胞因子則未顯示出和活動期GO相關。Aniszewski等[14]的研究發現，活動期GO患者眼部組織淋巴細胞浸潤以TH1為主，而病程長的GO患者則以TH2細胞浸潤為主。這些研究提示GO在疾病活動期以TH1免疫反應為主，在非活動期則以TH2免疫反應為主。研究者們推測這一現象可能是TH2細胞因子對TH1免疫反應的負反饋調控有關。本研究中，活動期GO患者的IL-16水平高于非活動期GO患者及正常對照者，非活動期GO患者IL-16水平和正常對照者相近，提示IL-16水平只是在活動期一過性升高，隨病情穩定出現下降趨勢。鑒于IL-16對TH1免疫反應具有重要作用，我們認為活動性GO患者IL-16水平升高和以往的研究結果是一致的。IL-16參與GO發病的機制還不是非常清楚，我們推測IL-16在引起/促進TH1細胞向眼部組織聚集，并刺激TH1細胞因子釋放的病理過程中起著重要作用。

本研究中所有的患者均有Graves病史，但是基于以下的原因我們認為升高的IL-16水平和甲狀腺高功能狀態無關，且甲狀腺疾病本身并不是引起IL-16升高的唯一原因。首先，所有的GO患者入組時，甲狀腺功能均是正常的；其次，本研究中并沒有發現IL-16和甲狀腺激素水平的相關性；第三，和先前研究相似的是本研究也沒有發現IL-16和自身抗體如TPOAb/TRAb水平的相關性[17-18]。因此，升高的IL-16水平至少部分反映眼部炎癥的存在。

總之，本研究顯示活動性GO組患者血清IL-16水平顯著高于非活動性GO組患者及正常對照組，該因子可以作為一個提示GO活動性的標志，及臨床用于評價GO治療效果的指標。

[1]Bacon K, Baggiolini M, Broxmeyer H, et al. IUIS/WHO Subcommittee on Chemokine Nomenclature. Chemokine/chemokine receptor nomenclature[J]. J Interferon Cytokine Res,2002,22(10):1067-1068.

[2]Pritchard J, Horst N, Cruikshank W, et al. Igs from patients with Graves’ disease induce the expression of T cell chemoattractants in their fibroblasts[J]. J Immunol, 2002,168(2):942-950.

[3]Pritchard J, Han R, Horst N, et al. Immunoglobulin activation of T cell chemoattractant expression in fibroblasts from patients with Graves' disease is mediated through the insulin-like growth factor I receptor pathway[J]. J Immunol,2003,170(12):6348-6354.

[4]Gu XJ, Cui B, Zhao ZF, et al. Association of the interleukin(IL)-16 gene polymorphisms with Graves’ disease[J]. Clin Immunol,2008,127(3):298-302.

[5]Mourits MP, Koornneef L, Wiersinga WM,et al. Clinical criteria for the assessment of disease activity in Graves’ophthalmopathy:a novel approach[J]. Br J Ophthalmol,1989,73(8):639-644.

[6]Rand TH, Cruikshank WW, Center DM, et al. CD4-mediated stimulation of human eosinophils:lymphocyte chemoattractant factor and other CD4-binding ligands elicit eosinophil migration[J]. J Exp Med,1991,173(6):1521-1528.

[7]Kaser A, Dunzendorfer S, Offner FA, et al. A role for IL-16 in the cross-talk between dendritic cells and T cells[J]. J Immunol,1999,163(6):3232-3238.

[8]Cruikshank WW, Lim K, Theodore AC, et al. IL-16 inhibi

tion of CD3-dependent lymphocyte activation and proliferation[J]. J Immunol,1996,157(12):5240-5248.

[9]Pinsonneault S, El Bassam S, Mazer B, et al. IL-16 inhibits IL-5 production by antigen-stimulated T cells in atopic subjects[J]. J Allergy Clin Immunol,2001,107(3):477-482.

[10]ElBassam S, Pinsonneault S, Kornfeld H, et al. Interleukin-16 inhibits interleukin-13 production by allergen-stimulated blood mononuclear cells[J]. Immunology,2006,117(1):89-96.

[11]de Bie JJ, Henricks PA, Cruikshank WW, et al. Effect of interleukin-16-blocking peptide on parameters of allergic asthma in a murine model[J]. Eur J Pharmacol,1999,383(2):189-196.

[12]Lynch EA, Heijens CA, Horst NF, et al. Cutting edge:IL-16/CD4 preferentially induces Th1 cell migration: requirement of CCR5[J]. J Immunol,2003,171(10):4965-4968.

[13]de Carli M, D’Elios MM, Mariotti S, et al. Cytolytic T cells with Th1-like cytokine profile predominate in retroorbital lymphocytic infiltrates of Graves’ophthalmopathy[J]. J Clin Endocrinol Metab,1993,77(5):1120-1124.

[14]Aniszewski JP, Valyasevi RW, Bahn RS. Relationship between disease duration and predominant orbital T cell subset in Graves’ ophthalmopathy[J]. J Clin Endocrinol Metab,2000,85(2):776-780.

[15]周素嫻, 夏寧,梁瑜禎,等.Graves眼病患者T細胞亞群的研究[J].中華內分泌代謝雜志,2006,2(2):126-127.

[16]Wakelkamp IM, Bakker O, Baldeschi L, et al. TSH-R expression and cytokine profile in orbital tissue of active vs.inactive Graves’ ophthalmopathy patients[J].Clin Endocrinol (Oxf),2003,58(3):280-287.

[17]Diez JJ, Hernanz A, Medina S,et al. Serum concentrations of tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and soluble TNF-alpha receptor p55 in patients with hypothyroidism and hyperthyroidism before and after normalization of thyroid function[J]. Clin Endocrinol (Oxf),2002,57(4):515-521.

[18]Salvi M, Pedrazzoni M, Girasole G, et al. Serum concentrations of proinflammatory cytokines in Graves’ disease:effect of treatment, thyroid function, ophthalmopathy and cigarette smoking [J]. Eur J Endocrinol,2000,143(2):197-202.