漢族人群Megsin基因C-25663G多態性與IgA腎病的關系①

李露 張天云 崔麗瓊

(解放軍第一醫院呼吸科 蘭州 730000)

IgA腎病在我國約占原發腎小球疾病的1/3,也是導致終末期腎病的常見病因之一,當前認為遺傳因素與該病的易感性有關,并影響疾病的發生和發展。國內學者在IgA腎病患者及其家庭成員中采用傳遞不平衡檢驗(transmission disequili-brium test,TDT)和單倍體相對風險(haplotype relative risk,HRR)分析法對megsin基因3＇端非翻譯區的C-2180T區的基因多態性進行分析研究后發現,C-2180T區的等位基因明顯是由雜合親代傳向子代患者,且這個等位基因共同傳遞的比率明顯增加,說明megsin基因的變異性與IgA腎病發生的易感性相關［1］。本文用PCR-RFLP法及基因測序法鑒定基因型,采用病例對照研究的方法,探討了蘭州地區漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態性分子遺傳學意義。

圖1 1,2為CG雜合子;3為CC純合子;4為GG純合子;M為DAN標準分子量(DNA Marker)

1 對象與方法

1.1 對象

1.1.1 IgA腎病組 解放軍第一醫院心腎科經皮腎穿刺活檢證實為IgA腎病的蘭州地區漢族的患者44例(男23例,女21例),年齡(10～49)歲,平均(32±5)歲。IgA腎病病理診斷標準采用2001年全國腎活檢病理診斷標準［2］。均排除繼發性腎臟疾病和其他合并癥及并發癥。

1.1.2 正常對照組 解放軍第一醫院100名(男72名,女28名)體檢正常的蘭州地區漢族健康人群,年齡(19～46)歲,平均(23±4)歲。

1.2 基因組DNA的提取

采用QIAamp (r)DNA試劑盒從EDTA抗凝200μL外周靜脈血中提取基因組DNA。

1.3 Megsin基因C-25663G基因鑒定

應用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性(poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法做基因型鑒定。上下游引物分別為5＇-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3＇和5＇-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3＇(美國生命技術公司合成)。PCR反應條件:95°C預變性15s,94°C變性30s,51退火15s,72°C延伸30s,共35個循環,最后72°C延伸5min。PCR反應體積為30μL。產物用限制性內切酶Hinf I(Promega公司)37°C消化6h以上或過夜,2%瓊脂糖凝膠電泳確定基因型。

表1 IgA腎病患者C-2093T多態性分部與正常人群比較[例（%)]

1.4 統計學處理

統計學分析經遺傳平衡檢測證明,IgA腎病患者與對照組均符合Hardy-Weinberg平衡,具有群體代表性。應用SPSS 13.0統計軟件進行分析。所有統計分析中,P<0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Megsin基因C-25663G基因鑒定

酶切后,等位基因CC型產生200、117bp2條片段;CG型產生317、200、117bp3條片段;GG型產生317bp1條片段,見圖1。

2.2 Megsin基因C-25663G基因多態性檢測結果

基因分布CC型者28例,CG型者12例,GG型者4例,等位基因C型68例,G型20例,與正常對照組基因分布相比,均無統計學意義(P<0.01),見表1。

3 討論

我們以往的研究發現,Megsin基因3＇端非翻譯區C-2093T和C-2180T多態性與中國漢族人群IgA腎病的發生顯著相關［3］。國內學者應用PCR-RFLP方法鑒定IgA腎病患者基因型,用以家庭為基礎的傳遞不平衡檢驗(TDT)、單倍型相對危險度(HRR)分析結合病例對照研究方法,首先分析Megsin基因C-25663G多態性與我國漢族人群IgA腎病發生的關系,結果顯示,Megsin基因C-25663G多態性與中國漢族人群IgA腎病的發生及病情進展無關［4］。但由于基因多態性研究多受人群、地域、標本量、研究方法等多方面影響,單一的研究結果無明顯的參考價值。

本研究用PCR-RFLP法鑒定基因型,采用病例對照研究的方法,探討蘭州地區漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態性分子遺傳學意義。研究結果顯示,IgA腎病基因分布CC型者28例(63.63%),CG型者12例(27.27%),GG型者4例(9.09%),等位基因C型68例(77.27%),T型20例(22.73%),與正常對照組基因分布相比,均無統計學意義(P<0.01)。研究結果提示Megsin基因C-2093T多態性與IgA腎病的發病可能無關,此結果和夏運風教授研究結果相似,但這個研究結果對IgA腎病的發病機制、臨床用藥,以及未來基因監測和基因治療將具有重要的指導意義。

[1]Li YJ,Du Y,Li CX,et al.Family- based association study showing that immunoglobul in A nephropathy is associated with the polymorphisms 2093C and 2180T in the 3＇untranslated region of the Megsin gene[J].J Am Soc Nephrol, 2004,15:1739～1743.

[2]全國腎活檢病理研討會.腎活檢病理診斷標準指導意見[J].中華腎臟病志,2001,17:270.

[3]M iyata T,NangakuM,Su zuk iD,et al.A mesangium predominant gene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].JC lin Invest,1998,102(4):828～836.

[4]Miyata T,Nangaku M,Suzuk iD,et al.Amesangium predominantgene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].J Clin Invest,1998,102(1):828～836.