日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)、屠宰性能和盲腸微生物的影響

湖南省畜牧獸醫(yī)研究所 王向榮 蔣桂韜 張 旭 唐建忠 戴求仲

益生菌因其具有促生長(zhǎng)、抗腹瀉、增強(qiáng)免疫力等作用（蔣正宇等，2005；陳天游等，2005），近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于替代畜禽日糧中的飼用抗生素。飼用益生菌的研究應(yīng)用類也越來(lái)越多。目前，我國(guó)農(nóng)業(yè)部允許飼用的芽孢桿菌包括地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等12種（李研東等，2008）。有關(guān)地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌在畜禽日糧中的應(yīng)用研究較多，普遍認(rèn)為芽孢桿菌能促進(jìn)腸道有益菌的生長(zhǎng)，提高養(yǎng)分利用率，從而起到促生長(zhǎng)，提高飼料報(bào)酬的作用 （郝生宏等，2008；Nayak等，2007；Abdulrahim等，1999），但不同芽孢桿菌在黃羽肉雞日糧中聯(lián)合應(yīng)用的研究并不多見(jiàn)，本試驗(yàn)將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌混合后，按照不同水平添加至黃羽肉雞日糧中，考察復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞部分血清生化指標(biāo)、屠宰性能和盲腸微生物的影響，以期為復(fù)合芽孢桿菌制劑在黃羽肉雞生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 芽孢桿菌制劑由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌混合而成，孢子含量為2×1010CFU/g，由武漢雄峰科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 將375羽健康快長(zhǎng)型黃羽肉雞隨機(jī)分成5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25羽。試驗(yàn)為期49 d，分為7～28 d和29～56 d兩個(gè)階段。試驗(yàn)Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)Ⅱ～Ⅴ組為試驗(yàn)組，分別在基礎(chǔ)日糧中添加150、200、250 g/t和 300 g/t芽孢桿菌制劑。

1.3 試驗(yàn)日糧 基礎(chǔ)日糧以玉米、豆粕、次粉和油糠等為主要原料，參考NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要和中國(guó)黃雞營(yíng)養(yǎng)需要（NY/T33-2004）制成，其原料組成與營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)肉雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，雞舍自然通風(fēng)，紅外燈供暖，相對(duì)濕度保持在55%～65%之間，試驗(yàn)期間所有雞只自由采食（計(jì)量不限量）和飲水，采用常規(guī)免疫程序免疫。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

1.5.1 血清生化指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)抽取1羽雞屠宰取血8 mL，血凝0.5 h后以3000 r/m離心15 min，收集上層血清，于-20℃下保存。

三碘甲腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）和胰島素（Ins）均采用放射免疫法（RIA）測(cè)定；葡萄糖（GLU）、膽固醇（CHO）和堿性磷酸酶（ALP）用CX4Pro全自動(dòng)生化分析儀（Beckman Coulte公司生產(chǎn)）測(cè)定。

1.5.2 屠宰性能的測(cè)定 在56日齡早晨，從每處理隨機(jī)選取6只接近該處理平均體重的雞 （每重復(fù)2只），稱活重后頸靜脈放血處死，用濕法拔毛，瀝干水分后稱重，參照全國(guó)家禽育種委員會(huì)頒布的“家禽生產(chǎn)性能與計(jì)算方法”測(cè)定肉雞屠體重、半凈膛重、全凈膛重，計(jì)算全凈膛率、腹脂率、胸肌率和腿肌率。

1.5.3 盲腸微生物的測(cè)定 測(cè)定盲腸微生物中大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸桿菌和總需氧菌的含量。

檢測(cè)方法：取盲腸內(nèi)容物經(jīng)勻質(zhì)后在超凈工作臺(tái)取樣0.5 g左右，加入到裝有4.5 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中，在震蕩器上混勻后取0.5 mL放入第二管混勻，依次稀釋至10-6倍。采用平板菌落記數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，培養(yǎng)基為各細(xì)菌的選擇性培養(yǎng)基，總需氧菌為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。乳酸桿菌采用燭缸法進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，其余均采用需氧培養(yǎng)。選擇3個(gè)合適的稀釋度，由高稀釋度開始，用微量取樣器吸取100 μL放入各培養(yǎng)基平皿內(nèi)，每個(gè)平皿三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度做3個(gè)重復(fù)，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，計(jì)算每克內(nèi)容物所含菌數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007初步整理后，用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行One-way ANOVA分析，采用LSD方法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響 由表2可見(jiàn)，試驗(yàn)組肉雞血清中葡萄糖含量均低于對(duì)照組，堿性磷酸酶含量高于對(duì)照組，差異均不顯著（P＞0.05）；血清中膽固醇含量表現(xiàn)出隨日糧中芽孢桿菌添水平增加而降低的趨勢(shì) （P＞0.05），T3和T4表現(xiàn)出隨芽孢桿菌添加水平增加而增加的趨勢(shì)（P＞0.05）；血清中胰島素含量以試驗(yàn)Ⅴ組最高，為4.65 mmol/L，比對(duì)照組的2.53 mmol/L提高了83.79%，差異顯著（P＜0.05），也分別比試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的3.88、3.89 mmol/L和 4.63 mmol/L高 19.85%、19.54%和0.43%，但差異不顯著（P ＞ 0.05）。

2.2 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞屠宰性能的影響 由表3可見(jiàn)，日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率均無(wú)顯著影響。試驗(yàn)Ⅴ組肉雞的屠宰率達(dá)69.93%，為所有組中最高，比對(duì)照組的66.94%提高了 4.28%，差異顯著（P ＜ 0.05），也高于試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表2 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞部分血清理化指標(biāo)的影響mmol/L

表3 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞屠宰性能的影響

2.3 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞盲腸微生物的影響 由表4可見(jiàn)，芽孢桿菌制劑可以減少黃羽肉雞盲腸中有害菌的數(shù)量，增加有益菌的數(shù)量。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組能夠降低黃羽肉雞肓腸中大腸桿菌、沙門氏菌及總需氧菌的數(shù)量，分別在添加量為200 g/t和250 g/t及以上時(shí)達(dá)顯著水平（P ＜ 0.05）。 乳酸桿菌的數(shù)量增加（P ＜ 0.05）。

表4 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞肓腸菌群數(shù)量的影響 lg CFU/g

3 討論

3.1 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響 有關(guān)芽孢桿菌對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)影響的研究較多，滑靜等（2003）研究認(rèn)為，日糧添加0.2%枯草芽孢桿菌可顯著提高AA肉雞血清總蛋白、總膽固醇含量和堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性；陳家祥等（2010）認(rèn)為，飼糧中添加不同劑量的地衣芽孢桿菌提高了麻羽肉雞血清中總蛋白和白蛋白含量，但對(duì)肉雞血清中膽固醇含量和堿性磷酸酶活性均無(wú)顯著影響；而本研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加復(fù)合芽孢桿菌制劑使血清中胰島素的含量增加，且添加量為300 g/t時(shí)，差異達(dá)顯著水平，而對(duì)血糖和膽固醇含量，以及堿性磷酸酶活性均無(wú)顯著影響；對(duì)T3、T4的影響雖然表現(xiàn)出了隨添加劑量的增加而增加的趨勢(shì)，但差異未達(dá)顯著水平。由此可見(jiàn)，芽孢桿菌對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)影響的結(jié)果并不一致，這可能與芽孢桿菌種類、畜禽品種、持續(xù)飼喂時(shí)間和添加劑量以及日糧加工方式有很大關(guān)系。

3.2 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉屠宰性能的影響 日糧中添加芽孢桿菌對(duì)肉雞屠宰性能影響的研究并不多見(jiàn)，張仁義等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加50、100、200 mg/kg地衣芽孢桿菌制劑，對(duì)麻羽肉雞屠宰率、全凈膛率和半凈膛率無(wú)顯著影響，卻能提高胸肌率和腿肌率，各指標(biāo)與抗生素組均無(wú)顯著差異。本研究認(rèn)為，日糧中芽孢桿菌的添加僅影響了黃羽肉雞屠宰率，對(duì)全凈膛率、胸肌率和腿肌率等指標(biāo)無(wú)顯著影響，這與前人研究出現(xiàn)分歧，具體原因尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

3.3 日糧添加芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞盲腸微生物的影響 許多研究表明，芽孢桿菌可抑制腸道有害菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌的增殖，郝生宏等（2010）研究認(rèn)為，枯草芽孢桿菌能顯著降低1、3周齡肉仔雞糞便大腸桿菌數(shù)量；閆鳳蘭等（1996）用枯草芽孢桿菌飼喂AA肉仔雞，結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌可顯著增加3周齡仔雞腸道中乳酸桿菌的數(shù)量，減少沙門氏菌的數(shù)量，但對(duì)大腸桿菌影響不顯著。本研究取得了類似結(jié)果，日糧添加復(fù)合芽孢桿菌制劑，可減少盲腸大腸桿菌、沙門氏菌和腸道總需氧菌的數(shù)量，分別在添加200、250 g/t和250 g/t及以上時(shí)芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)組與對(duì)照組差異達(dá)顯著水平；所有試驗(yàn)組肉雞盲腸中乳酸桿菌含量均顯著高于對(duì)照組。這可能與芽孢桿菌能維持腸道菌群平衡有關(guān)，同時(shí)，因芽孢桿菌不能在消化道內(nèi)定植，只有動(dòng)物不斷采食添加芽孢桿菌的飼料才能發(fā)揮作用。所以芽孢桿菌的添加量在添加量較大時(shí)（250 g/t和300 g/t）能表現(xiàn)出較好的效果。

4 結(jié)論

本研究認(rèn)為，日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌制劑可提高黃羽肉雞血清中胰島素含量，對(duì)血清中血糖、膽固醇等無(wú)顯著影響；可提高黃羽肉雞的屠宰率；同時(shí)，芽孢桿菌在黃羽肉雞中的長(zhǎng)期添加，可抑制盲腸中有害菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌的增殖，且以300 g/t的水平添加較佳。

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