穴位埋線對糖尿病大鼠脂代謝紊亂及胰島素敏感性的影響*

羅 雄，凌湘力

（貴陽醫學院附屬醫院中醫科，貴陽 550004）

糖尿病血管病變（DA）是糖尿病（DM）致死致殘的主要原因，脂代謝紊亂是其重要危險因素，而胰島素抵抗（IR）則是致血脂異常的主要發病機制[1]。因此，探討IR與脂代謝紊亂之間的關系，并針對兩者及早進行治療對減少DA具有十分重要的意義。筆者觀察穴位埋線對DM大鼠脂代謝紊亂和胰島素敏感性等的影響并探討其可能機制，為臨床防治DA提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性Wistar大鼠48只，2～3月齡，體質量150～200 g，貴陽醫學院動物中心提供，合格證號：SCXK（黔）2002-0001。

1.1.2 試劑及儀器 四氧嘧啶（Sigma公司美國）、血漿內皮素（ET）試劑盒、胰島素試劑盒（天津九鼎醫學生物工程有限公司）、一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程研究所），載脂蛋白A（ApoAI）、載脂蛋白 B（ApoB）、載脂蛋白 a[Lp（a）]、空腹血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）（上海榮盛生物試劑廠）、全自動生化分析儀（雅培2000，日本）。

1.2 方法

1.2.1 造模及分組 隨機抽出10只大鼠作為正常組，其余空腹12 h后，按120 mg/（kg·d）的劑量腹腔注射2.5%四氧嘧啶檸檬酸緩沖液，連續2 d，正常組注射同等量檸檬酸緩沖液。48 h后尾靜脈取血測血糖，以血糖值連續3 d≥11.1 mmol/L[2]者為造模成功。共成模24只，采用隨機數字表法隨機分為模型組和埋線組，每組12只，均用高脂飼料喂養，給予正常飲水。

1.2.2 治療方法 造模成功第2天開始治療。參照華興邦大鼠穴位圖譜[3]，選取“胰俞”、“脾俞”、“足三里”。按照文獻[4]取“4-0”號羊腸線剪成約0.3 cm的線段若干，穿入7號注射針的針尖中備用。大鼠經3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，右手持針于選定的穴位處以15°角斜向刺入，到達預定深度后緩慢將腸線推入穴位內，退出毫針，穴區用碘酒燒灼。4周埋線1次，左右交替。

1.2.3 標本采集 治療16周后，模型組大鼠死亡5只，治療組大鼠死亡3只。各組大鼠空腹12 h后稱質量，經3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，右心室采血8～10 mL，取2 mL血液注入含7.5%乙二胺四乙酸二鈉（EDTA·2Na）30μL和抑肽酶40μL的試管內混勻，4℃3600 r/min離心10 min分離血漿，-20℃保存待測ET；余血靜置30 min后，常溫下以3000 r/min離心 10 min，分別吸取血清待測 ApoAI、ApoB、Lp（a）、TG、TC、ox-LDL、HDL、NO、空腹胰島素（FINS）、FBG。

1.2.4 指標檢測 FINS、ET用放免法測定，NO用硝酸還原酶法測定，胰島素敏感指數(ISI)采用李光偉等方法測算[5]，因其為非正態分布，分析時取其自然對數，即ISI=Ln［1/（FBG×FINS）］；ApoAI、ApoB、Lp（a）、TG、TC、HDL、ox-LDL、FBG 用全自動生化分析儀測定。

2 結果

2.1 血清 FBG、FINS、NO、血漿 ET含量及 NO/ET、ISI的比較 見表1。從表1可知，模型組較對照組血清FBG 含量顯著升高（P＜0.01），說明 DM 模型成功；血清FINS、血漿ET含量顯著增高（P<0.01或P<0.001），ISI、血清 NO 含量及 NO/ET 比值顯著降低（P＜0.01或 P＜0.001）。經治療后，血清 FBG、FINS 和血漿 ET均顯著下降（P<0.05，P<0.01或P<0.001），NO含量及ISI、NO/ET比值則明顯升高（P<0.05，P<0.01或P<0.001）。直線相關分析顯示，ET與ISI呈顯著負相關（r=-0.967，P<0.001 或 r=-0.986，P<0.001），NO 與ISI呈正相關（r=0.959，P<0.001）。

表1 各組血清FBG、FINS、NO、血漿ET含量及NO/ET、ISI的比較（±s）Tab.1 Comparison of serum FBG,FINS,NO,plasma ET and NO/ET,ISI between different groups（±s）

注：與模型組相比 *P<0.05，**P<0.01；△P<0.001。

組別 n FBG(mmol/L) FINS(μg/L) ISI正常組 10 5.19±0.64** 10.80±1.68** -4.00±0.15**模型組 7 18.54±0.97 16.66±1.24 -5.72±0.08埋線組 9 10.02±0.54** 14.62±1.08* -4.98±0.07**組別 n NO(μmol/L) ET(ng/L) NO/ET正常組 10 56.37±2.78△ 46.33± 9.36△ 1.26±0.26△模型組 7 28.82±3.76 119.17± 8.03 0.24±0.02埋線組 9 39.02±4.46△ 83.88±13.87△ 0.48±0.11△

表 2 各組血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量比較（±s）Tab.2 Comparison of serum TG,TC,HDL,ox-LDL,ApoAI,ApoB,Lp(a)among different groups（±s）

表 2 各組血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量比較（±s）Tab.2 Comparison of serum TG,TC,HDL,ox-LDL,ApoAI,ApoB,Lp(a)among different groups（±s）

注：與模型組相比*P<0.05，**P<0.01。

ApoAI ApoB Lp（a）(mmol/L) (mmol/L) (g/L) (g/L) (mg/L)正常組 10 1.50±0.13** 4.77±0.42** 1.59±0.05** 0.97±0.12** 187.31± 47.39**模型組 7 17.12±8.79** 19.25±5.74** 0.32±0.07** 7.21±1.87** 1319.69±352.78**埋線組 9 6.91±1.96** 8.13±0.83** 0.92±0.02** 3.16±0.35** 612.43±189.27**組別 n TG TC HDL(mmol/L)1.84±0.21**0.49±0.05**0.81±0.02**ox-LDL(μg/L)45.31±9.45**85.79±13.25**71.39±13.49**

2.2 血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量的比較 見表2。從表2可知，模型組較正常組血清 TG、TC、ox-LDL、ApoB 和 Lp（a）含量均顯著升高（P<0.01），HDL、ApoAI則明顯降低（P＜0.01），說明DM大鼠出現脂代謝紊亂。埋線治療后，血清TG、TC、ox-LDL、ApoB、Lp（a）均明顯下降（P<0.05，P<0.01），HDL、ApoAI含量明顯上升（P＜0.05，P<0.01）。

3 討論

研究認為，IR可能是引起脂代謝紊亂的中心環節。IR時由于激素敏感脂酶（HSL）活性增強、脂蛋白酯酶（LPL）活性降低，使TG及極低密度脂蛋白（VLDL）的合成增加而代謝緩慢，致使水平升高[6]。VLDL不斷分解為LDL，且IR使LDL經受體通路代謝受阻，使血中LDL升高。高濃度的LDL滅活內皮衍生松弛因子或NO，降低其清除氧的能力，從而導致了ox-LDL水平升高[7]。IR時，高胰島素通過激活 β-羥基－β-甲基戊二酰輔酶 A（HMG－CoA）還原酶的活性、增加肝甘油三酯酶（HTGL）的活性及使ApoAI濃度顯著降低等途徑，降低血漿HDL濃度及功能；IR使卵磷脂膽固醇酯酰轉移酶（LCAT）活性減弱也是HDL水平降低的機制。同時，脂代謝紊亂可通過抑制胰島素分泌、使胰島素受體減少和活性降低、干擾胰島素與受體結合等，使胰島素生物效應降低，促成和加重IR[8]。

脂代謝紊亂和IR在DA的發生發展中具有重要的作用。脂代謝紊亂產生的大量游離脂肪酸（FFA）可明顯抑制NO合成，從而間接導致內皮功能障礙，同時聚集在血管內皮細胞附近，使各種細胞因子的合成和表達增加，導致血管內皮損傷[9]。ox-LDL被巨噬細胞吞噬后形成泡沫細胞，滯留于血管壁上，使血管內皮細胞壞死脫落，內皮保護屏障遭到破壞；ox-LDL還與特異性抗體結合，激活補體系統產生免疫應答，提高單核巨噬細胞促凝血活性，從而促進血管病變的形成[10]。ApoAI和ApoB分別是HDL和LDL的主要載脂蛋白，ApoB被認為是最具有致動脈硬化的因子，ApoAI則是防止動脈粥樣硬化的保護因子，兩者影響著血漿HDL、LDL含量，調整兩者至正常水平對于防治DA具有重要意義。HDL能清除脂質在血管壁內的沉積，可促進TC逆轉運及防止LDL聚集于動脈壁，還通過其自身所含的對氧磷脂酶抑制LDL氧化，從而影響AS的產生和進展。高Lp（a）血癥是導致動脈粥樣硬化性的一個獨立危險因素。IR能使內皮依賴性的舒血管反應降低或消失，并伴隨縮血管反應增強以及血管平滑肌細胞增殖，導致血管內皮功能失調出現血管病變。

DA屬中醫“消渴病血瘀證”范疇，脾腎氣陰兩虛和瘀血痹阻是其主要病機。穴位埋線療法是多種方法和效應的集中和整合，有平衡陰陽、調理臟腑、運行氣血、疏通經絡等作用。“腎俞”可補腎生精，“脾俞”可健脾益氣，兩穴埋線可調節血管內皮功能，改善微循環[4]，增強 INS 的敏感性[2]；“足三里”對循環系統有整體調節作用，能改善患者的血液流變學，3穴合用可培補脾腎、益氣養陰活血。研究結果表明，治療后的DM大鼠血漿ET、血清FBG、TG、TC、ox-LDL 、ApoB、Lp（a）均明顯下降（P＜0.05，P<0.01或 P<0.001），NO、HDL、ApoAI含量及 NO/ET 比值、ISI明顯上升（P<0.05，P<0.01或 P<0.001）。提示穴位埋線對DM大鼠脂質代謝紊亂和IR具有良性調整作用，機制可能是羊腸線埋入穴位內，通過神經-內分泌-體液-免疫等多系統、多途徑和多靶點以提高機體各種代謝物質的活性，促進機體對葡萄糖和脂肪的利用；通過改善微循環，促進INS與受體結合，增強INS的敏感性，減輕機體的胰島素抵抗，使LPL、LCAT的活性增高，抑制HSL、HMG-CoA還原酶及HTGL的活性，從而調節脂質代謝，以緩解脂代謝紊亂；調整NO與ET的水平，改善血管內皮功能障礙，最終達到治療DA的目的。

[1] Grag A.Insulin resistance in the pathogensis of dyslipidemia[J].Diabetes Care,1996,19(4):387-396.

[2] 羅 雄，凌湘力.穴位埋線、中藥復方對糖尿病大鼠血管內皮功能及胰島素敏感性影響的研究[J].中華中醫藥雜志，2008，23（1）：489-491.

[3] 華興邦.大鼠穴位圖譜研制[J].實驗動物與動物實驗，1991，3（1）：1.

[4] 羅 雄，凌湘力.穴位埋線對糖尿病大鼠血漿內皮素、血清一氧化氮的影響[J].甘肅中醫，2007，20（3）：46－47.

[5] 李光偉，潘孝仁，Stephen Lillionja，等.檢測人群胰島素敏感性的一項新指數[J].中華內科雜志，1993，32（10）：656－660.

[6] 楊文英.2型糖尿病與脂代謝紊亂[J].中華心血管病雜志，2003，31（9）：718－720.

[7] 鄧晉紅.2型糖尿病血脂代謝紊亂在其血管病變發生發展中的意義[J].山西醫科大學學報，2003，34（6）：527－528.

[8] 李 晶，孫 侃，周 婷，等.2型糖尿病脂代謝紊亂及胰島素抵抗與視網膜病變的關系[J].石河子大學學報（自然科學版），2005，23（6）：715－718.

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[10] 陳 濤,王中心.血管內皮功能障礙與2型糖尿病[J].醫學綜述，2006，12（6）：376-379.