高效液相色譜法測定小檗堿甲氧芐啶膠囊中甲氧芐啶含量

陳江濤，辛俊衡

(廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002)

小檗堿甲氧芐啶膠囊(曾用名為增效黃連素膠囊)是由鹽酸小檗堿和甲氧芐啶組成的常用復方制劑，主要用于治療腸炎、細菌性痢疾等疾病。在國家標準[1]中鹽酸小檗堿的含量測定方法為高效液相色譜(HPLC)法，而甲氧芐啶的含量測定方法為萃取－紫外分光光度法，方法煩瑣。為此，筆者采用高效液相色譜法測定該制劑中甲氧芐啶的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀，包括G1311A型四元溶劑洗脫系統，G1329A型全自動進樣器，G1314B型紫外檢測器，Chemstation色譜工作站;島津UV－2450型紫外－可見分光光度計;sartorius BP211D型電子天平(d=0.01 mg，80 g)。甲氧芐啶對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為200304);鹽酸小檗堿原料、藥用淀粉和小檗堿甲氧芐啶膠囊(批號分別為080311，080317，080321，每粒含甲氧芐啶50 mg)，均由廣西梧州三箭制藥有限公司提供。甲醇為色譜純;水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agelent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(60 ∶40); 檢測波長:265 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:20 μL;柱溫:30℃。

2.2 溶液制備

精密稱取甲氧芐啶對照品50 mg，置200 mL量瓶中，加稀醋酸4 mL使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取膠囊10粒，精密稱定內容物，研細，精密稱取細粉(約相當于甲氧芐啶12.5 mg)，置50 mL容量瓶中，加稀醋酸1 mL振搖使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例稱取鹽酸小檗堿原料和藥用淀粉，同法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

取2.2項下3種溶液，依法進樣，按色譜條件分析，得空白對照溶液色譜。結果與對照品溶液色譜和供試品溶液色譜相比較，陰性對照品溶液不影響色譜分析。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL，分別置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液，按色譜條件進行分析。結果甲氧芐啶進樣量在0.5～1.5μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，回歸方程為 Y=3373 X－52，r=0.9998。

加樣回收試驗:精密稱取批號為080311的膠囊內容物(平均0.2017 g，含甲氧芐啶為標示量的97.7%)，約相當于甲氧芐啶5，6.25，7.5 mg各3份，分別置9個50 mL量瓶中，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，按擬訂的色譜條件進行分析，以峰面積外標法計算含量。結果見表1。

表1 甲氧芐啶加樣回收試驗結果(%，n=9)

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續進樣6次。結果甲氧芐啶峰面積的 RSD為0.8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8 h時進樣。結果甲氧芐啶峰面積的 RSD為0.8%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗:取批號為080311的樣品6份，依法配制供試品溶液，以峰面積外標法測定甲氧芐啶的含量為98.3%，97.6%，97.3%，97.7% ，96.9%，96.9%，RSD 為 0.6%(n=6)。

2.4 樣品含量測定

取樣品 3批，依法制備供試品溶液，以峰面積外標法測定甲氧芐啶的含量。結果見表2。

3 討論

甲氧芐啶對照品溶液在200～300 nm波長處掃描紫外圖譜，結果甲氧芐啶在此范圍內均有吸光度。本法選取265 nm作為檢測波長。

有關小檗堿甲氧芐啶膠囊含量測定的文獻比較多，測定各組分的方法有差示分光光度法[2]、雙波長分光光度法[3－4]、一階導數光譜法[5]、組合光譜法[6]、紫外分光光度法[7]、高效液相色譜法[8－9]等。莊惠清[8]采用C18柱、甲醇－醋酸銨溶液為流動相、檢測波長為290 nm、外標法測定雙組分，許波等[9]采用C18柱、0.1%十二烷基硫酸鈉的甲醇－0.2 mol/mL酒石酸為流動相、檢測波長為240 nm、內標法測定雙組分。本法嘗試單獨測定小檗堿甲氧芐啶膠囊中甲氧芐啶的含量，作為本制劑含量測定法研究的補充。標準方法為萃取－照分光光度法，樣品處理方法煩瑣，容易產生由于樣品損失而導致的誤差。本法直接溶解樣品，可避免這種誤差的發生，與標準方法測定樣品的結果相近。試驗結果表明，本法適用于小檗堿甲氧芐啶膠囊中甲氧芐啶的含量測定。

表2 制劑含量測定結果(標示量%，n=3)

[1]WS－10001－(HD－1062)－2002.國家藥品標準·化學藥品地方標準上升國家標準(第十一冊)[S].

[2]杜福軒.差示分光光度法測定增效黃連素膠囊及其片劑中TMP的含量 [J].西北藥學雜志，1994，9(4):152－154.

[3]陳愛年，時衛東.雙波長分光光度法測定增效黃連素膠囊的含量 [J].基層中藥雜志，1998，12(2):31.

[4]黃金銘.雙波長分光光度法測定增效黃連素膠囊中甲氧芐氨嘧啶和鹽酸小檗堿的含量 [J].海峽藥學，2005，17(2):61－63.

[5]尚秀敏，田 蘭，郭 毅.一階導數光譜法測定增效黃連素膠囊中甲氧芐氨嘧啶的含量 [J].河北醫學院學報，1995，16(5):289－290.

[6]王 妹，周二燕.組合光譜法測定增效黃連素膠囊的含量 [J].丹東醫藥，2002(2):51－52.

[7]陳寧寧，解健博.紫外分光光度法同時測定增效黃連素膠囊中二組分含量 [J].沈陽藥學院學報，1994，11(3):168－171.

[8]莊惠清.高效液相色譜法測定增效黃連素膠囊中鹽酸小檗堿和甲氧芐氨嘧啶的含量 [J].海峽藥學，2003，15(3):14－16.

[9]許 波，高良美.高效液相色譜法測定增效黃連素膠囊中鹽酸小檗堿和甲氧芐啶的含量 [J].藥物分析雜志，2001，21(1):21－23.