紫花高烏頭醇提物對(duì)大鼠肺組織中表皮生長(zhǎng)因子和白細(xì)胞介素1β含量的影響＊

韓瑞蘭，肖云峰，常福厚，陸景琨，王敏杰

(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

蒙藥紫花高烏頭 Aconitum excelsum Reichd的蒙名為噶布日迪老，系毛茛科烏頭屬牛扁亞屬植物，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古自治區(qū)東部，其根和地上部分為習(xí)用蒙藥。內(nèi)蒙古自治區(qū)錫林郭勒盟蒙醫(yī)研究所用紫花高烏頭全草治療慢性支氣管炎，有效率可達(dá)96.89%[1]。現(xiàn)代研究表明，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和白細(xì)胞介素1β(IL－1β)在慢性支氣管炎的發(fā)病機(jī)理中均起著重要作用。筆者通過建立慢性支管炎大鼠模型，觀察紫花高烏頭全草醇提物對(duì)肺組織中EGF和IL－1β含量的影響，初步探討其治療慢性支氣管炎的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和試藥

Wist大鼠44只，雌雄各半，體重(200±20)g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)為SCXK(蒙)2002－0001，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。EGF放免試劑盒(批號(hào)為20100725)、IL－1β放免試劑盒(批號(hào)為20100625)均購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所;硫酸脂多糖(Sigma公司生產(chǎn)，北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司提供)用生理鹽水稀釋至1 g/L;2%戊巴比妥鈉溶液;0.5%羧甲基纖維素鈉溶液。紫花高烏頭原藥材產(chǎn)自內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市喀喇沁旗，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥用植物學(xué)教研室龐秀生教授鑒定為正品;紫花高烏頭全草醇提物浸膏(AER，1 g浸膏相當(dāng)于原藥材10.8 g)，用5%羧甲基纖維素鈉配制成質(zhì)量濃度分別為 0.9，0.6，0.3 g/L的溶液;蛤蚧定喘膠囊(三金集團(tuán)桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為10940033)，用5%羧甲基纖維素鈉配制成質(zhì)量濃度為0.1 g/L溶液，備用。

1.2 方法

1.2.1 分組

取Wist大鼠44只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、模型對(duì)照組(B組)、AER低劑量組(C1組)、AER中劑量組(C2組)、AER高劑量組(C3組)、蛤蚧定喘膠囊組(D組)，模型對(duì)照組9只，其余各組7只。

1.2.2 造模與給藥

大鼠慢性支氣管炎模型的建立參照文獻(xiàn)[2－3]。除空白對(duì)照組(A組)外，其余各組大鼠用2%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰臥位固定于操作臺(tái)，常規(guī)消毒，縱向切開頸部，分離皮下，暴露氣管，4號(hào)針頭穿刺氣管，注入脂多糖0.2 mL。第8天時(shí)，隨機(jī)選取模型對(duì)照組(B組)大鼠雌雄各1只，斷頸處死，取右肺中部組織在4%甲醛溶液中固定，再經(jīng)過脫水、浸蠟、包埋等處理后切片，常規(guī)HE染色，制作成病理切片，光鏡下觀察。從造模第8天起，空白對(duì)照組(A組)灌服5%羧甲基纖維素鈉10 mL/kg，1次/d;模型對(duì)照組(B組)灌服5% 羧甲基纖維素鈉10 mL/kg，1次/d;AER低、中、小劑量組(C1，C2，C3組)灌胃 AER 0.3，0.6，0.9 mg/kg，每日1次;陽性對(duì)照組(D組)用蛤蚧定喘膠囊，每日用藥劑量為1.0 g/kg(相當(dāng)于臨床用量20倍)[4]，每天灌胃1次。均給藥20 d。

1.2.3 標(biāo)本制備與檢測(cè)方法

給藥結(jié)束后第2天，所有大鼠斷頭處死，取肺組織，將肺組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取0.3 g左右加入預(yù)冷的生理鹽水，用電動(dòng)勻漿器制成10%的肺組織勻漿，于4℃，6000 r/min離心5 min，提取上清液，超低溫冰箱凍存。指標(biāo)檢測(cè)采用放射免疫法，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行組間 t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示。

2 結(jié)果

2.1 大鼠支氣管和肺泡組織形態(tài)學(xué)比較

病理切片見圖1。可知，空白對(duì)照組(A組)的細(xì)支氣管黏膜上皮完整，細(xì)胞排列整齊，支氣管壁及肺泡無明顯病理形態(tài)學(xué)改變;模型對(duì)照組(B組)的支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞部分脫落，肺泡上皮細(xì)胞部分壞死脫落，肺泡間隔明顯增大(即肺泡擴(kuò)張)，伴有大量慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，說明造模成功。

圖1 大鼠肺組織切片

2.2 大鼠肺組織中EGF和IL－1β含量

結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠肺組織中EGF和IL－1β的含量(ng/mL，)

表1 各組大鼠肺組織中EGF和IL－1β的含量(ng/mL，)

注:與 A 組比較，△P ＜0.05，▲P ＞ 0.01;與 B 組比較，＊P ＜0.05。

組別A組(n=7)B組(n=7)C1組(n=7)C2組(n=7)C3組(n=7)D組(n=7)劑量10 mL/kg 10 mL/kg 0.3 mg/kg 0.6 mg/kg 0.9 mg/kg 1 g/kg EGF 0.433 ± 0.1810.641 ± 0.090▲0.639 ± 0.040▲0.631 ± 0.013▲0.631 ± 0.118▲0.461 ± 0.153 IL－1β 0.113 ± 0.050.261 ± 0.090▲0.210 ± 0.061▲0.190 ± 0.060▲0.145 ± 0.077＊0.119 ± 0.050

3 討論

采用氣管內(nèi)注入脂多糖的方法建立慢性支氣管炎的大鼠模型，造模后大鼠出現(xiàn)倦怠、活動(dòng)減少等癥狀。造模后最初幾天，模型對(duì)照組大鼠飲水增加，1周后進(jìn)食飲水均減少，體重增加較空白對(duì)照組慢。光鏡下可見模型對(duì)照組大鼠支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞部分脫落，肺泡上皮細(xì)胞部分壞死脫落，肺泡間隔明顯增大(即肺泡擴(kuò)張)，伴有大量慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。其組織病理學(xué)改變與文獻(xiàn)報(bào)道相近[5]。

近年的研究顯示，慢性支氣管炎的病理改變主要表現(xiàn)為氣管、支氣管壁的慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體的黏液泡增生、肥大，漿液型及混合型腺泡發(fā)生黏液變，腺泡及導(dǎo)管因黏液潴留而擴(kuò)張，黏液上皮的杯細(xì)胞增生、分泌亢進(jìn)。如果慢性支氣管炎反復(fù)急性發(fā)作，氣管會(huì)逐漸壁增厚，支氣管軟骨被破壞，病變向細(xì)支氣管、肺泡蔓延[4，6]。

脂多糖是革蘭陰性菌細(xì)胞壁層結(jié)構(gòu)，可刺激單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等合成釋放一系列炎性介質(zhì)，如腫瘤壞死因子α(TNF－α)和IL－1β，介導(dǎo)氣道和肺組織的炎癥反應(yīng)。IL－1β通過促進(jìn)趨化因子、環(huán)化加氧酶22以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和細(xì)胞黏附分子的表達(dá)而引起炎癥反應(yīng);可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞合成黏附分子增加;還可激活白細(xì)胞表面的黏附分子，使其表達(dá)上調(diào)，并與內(nèi)皮細(xì)胞上相應(yīng)的黏附分子相互作用，導(dǎo)致白細(xì)胞快速黏附，并跨過內(nèi)皮轉(zhuǎn)移到炎癥部位參與炎癥反應(yīng)。

EGF是一種含53個(gè)氨基酸的單鏈多肽類生長(zhǎng)因子，其對(duì)上皮細(xì)胞以及許多其他細(xì)胞有促進(jìn)分裂的作用，對(duì)細(xì)胞代謝也具有短期和長(zhǎng)期作用。EGF在炎癥反應(yīng)及變態(tài)反應(yīng)中具有重要的調(diào)節(jié)作用。慢性支氣管炎患者肺組織中EGF的含量增高，且與病情輕重程度有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，模型對(duì)照組大鼠肺組織中EGF和IL－1β含量較空白對(duì)照組均明顯升高(P＜0.01)，紫花高烏頭醇提物給藥組肺組織中EGF含量均與模型對(duì)照組無顯著差異，而高劑量組肺組織中IL－1β含量明顯低于模型組(P＜0.05)，說明紫花高烏頭醇提物可能通過降低IL－1β的含量以減少炎性細(xì)胞的趨化和炎性因子的釋放，控制慢性支氣管炎的發(fā)展。而蛤蚧定喘膠囊組肺組織中EGF和IL－1β含量均比模型對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，說明蛤蚧定喘膠囊可通過降低EGF和IL－1β的含量，以減少炎性細(xì)胞的趨化和炎性因子的釋放，控制慢性支氣管炎的發(fā)展。

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[6]任 勃，陶慶豐，馬淑揚(yáng).慢性支氣管炎動(dòng)物模型的復(fù)制及病理形態(tài)學(xué)觀察[J].天津醫(yī)藥，1995，23(2):102 －103.