高效液相色譜法測定顛茄草中硫酸阿托品含量

孔 泉，石國明，李志紅，邱 松

(河南羚銳制藥股份有限公司，河南 信陽 464000)

顛茄草為茄科植物顛茄的干燥全草，是制備顛茄浸膏和提取阿托品的原料。阿托品為主要有效成分，而歷版《中華人民共和國藥典》[1－3]中均采用酸堿滴定法測定總生物堿含量，但操作煩瑣，誤差大。筆者采用高效液相色譜法測定顛茄草中硫酸阿托品的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20A型高效液相色譜儀(自動進(jìn)樣器)，SPD－20A型檢測器，島津化學(xué)工作站。硫酸阿托品對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為100040－200510);乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸二氫鉀、三乙胺、磷酸為分析純;顛茄草由河南羚銳制藥股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[4]

色譜柱:XDB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相:磷酸鹽緩沖液(取6.8 g磷酸二氫鉀溶于1000 mL水中，加入10 mL三乙胺，用磷酸調(diào)pH至2.8)－乙腈(93∶7);檢測波長:210 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下，高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取本品的中粉約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇10 mL、濃氨試液8 mL與乙醚20 mL的混合溶液適量，靜置12 h，加乙醚70 mL，加熱回流3 h，至生物堿提盡，提取液置水浴上蒸去大部分乙醚，移置分液漏斗中，用0.5 mol/L硫酸溶液分次振搖提取，每次10 mL，至生物堿提盡，合并酸液，用三氯甲烷分次振搖提取，每次10 mL，至三氯甲烷層無色，合并三氯甲烷液，用0.5 mol/L硫酸溶液10 mL振搖提取，棄去三氯甲烷，合并前后兩次得到的酸液，濾過，濾器用0.5 mol/L硫酸溶液洗滌，合并洗液與濾液，加過量的濃氨試液使成堿性，迅速用三氯甲烷分次振搖提取，至生物堿提盡，合并三氯甲烷液，蒸干，用流動相適量使溶解，并定容至10 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取硫酸阿托品對照品適量，加流動相制成每1 mL含48 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取對照品溶液，稀釋至一定質(zhì)量濃度，進(jìn)樣量分別為 0.0688，0.344，1.032，1.72，3.44 μg，進(jìn)樣體積均為 10 μL。以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)作圖。回歸方程為 Y=1477.9228 X+9.5137，r=1.0000(n=5)。結(jié)果表明，硫酸阿托品進(jìn)樣量在0.0688～3.44 μg之間與峰面積值線性關(guān)系良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一顛茄草樣品6份，按供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD=0.86%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD=0.21%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):將供試品溶液配制好后，于24 h內(nèi)每隔一定時間測定1次。結(jié)果的 RSD=0.52%，表明硫酸阿托品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的樣品約1 g，精密稱定，分別加入不同量的硫酸阿托品對照品，同供試品溶液制備后測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 mL，注入液相色譜儀測定，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為091106，091107，091108的樣品含硫酸阿托品 0.28% ，0.26% ，0.27%。

3 討論

方法學(xué)研究結(jié)果表明，本法操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可用于顛茄草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定的方法。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1977:656－657.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:628－629.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:284.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:355－396.