不同檢測方法對低水平乙型肝炎表面抗原的測定及其臨床評估

費春榮，葉愛青，張 鈞

(浙江大學醫學院附屬邵逸夫醫院檢驗科，浙江杭州310016)

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的世界性傳染病，部分患者可轉為慢性感染，甚至發展為肝硬化或肝癌，其危害遠遠大于其他類型肝癌。HBsAg是乙型肝炎病毒感染和療效觀察的主要標志物之一。有資料顯示，低水平HBsAg攜帶者在人群中占有不小的比例，正常人群HBsAg水平在5ng/ml以下者占2.34%［1］。有人進一步對 HBsAg陽性人群進行研究發現，HBsAg質量濃度在5 ng/ml以下者占陽性人群的13.5%，其中HBsAg質量濃度在1 ng/ml以下者占陽性人群的8.4%，占低水平感染者的 61.9%［2］。因此，對低水平的HBsAg有效檢測，在臨床診斷、治療以及流行病學調查中具有重要意義。也因為如此，選擇合適的方法來檢測HBsAg顯得十分重要。我們選擇已在國內應用較多的三種方法:①美國雅培公司Architect i2000自動化免疫發光分析儀(CMIA法)，②德國羅氏公司模塊電化學發光免疫分析系統 MODULAR〈E〉170(ECLIA法)，③ELISA法，對臨床70例標本進行測定，并進行比較和評價。

1 材料和方法

1.1 標本來源 收集2009年5月-2009年12月本院門診和病房患者血清標本，檢測0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml病例共70例，分離血清，-20℃冷凍保存待檢。此70例標本的測定值均為雅培Architect i2000的測定結果，且重復測定兩次值均0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml。同時收集HBsAg＜0.05 IU/ml血清標本50例，即雅培Architect i2000測定為陰性的標本50例，分離血清，-20℃冷凍保存待檢。

1.2 試劑

1.2.1 Architect i2000檢測血清HBsAg試劑

為美國雅培Architect i2000自動化免疫發光分析儀隨機試劑及標準品和質控品。

1.2.2 MODULAR〈E〉170檢測血清HBsAg試劑 為德國羅氏公司模塊電化學發光免疫分析系統MODULAR〈E〉170隨機試劑及標準品和質控品。

1.2.3 ELISA檢測方法試劑 由上海科華實業技術有限公司生產。

1.2.4 1 ng/ml、5 ng/ml HBsAg 定值參比血清

由衛生部臨檢中心提供，批號為0912。

1.3 儀器 Architect i2000自動化免疫發光分析儀(美國 ABBOTT 公司)，MODULAR〈E〉170模塊電化學發光免疫分析系統(德國羅氏公司)，酶標儀(Elx 800)，洗板機(Elx 50)。

1.4 方法

1.4.1 Architect i2000采用化學發光微粒子免役分析(CMIA)技術，測定血清中HBsAg。結果報告方式:HBsAg為定量分析，并以濃度≥0.05 IU/ml為陽性。所有陽性標本用中和試驗證實。

1.4.2 MODULAR〈E〉170采用電化學發光免疫分析(ECLIA)技術，測定血清中HBsAg。結果報告方式:HBsAg以標本相對光強度單位(RLU)與臨界質控相對光強度單位之比(S/CO)≥1.0為陽性。

1.4.3 ELISA法檢測血清HBsAg，采用雙抗體夾心法。結果報告方式:HBsAg以樣本OD值與陰性對照OD值之比≥2.1為陽性。

以上三種方法的詳細操作方法和原理參照各自的說明書。

1.5 結果比較和數據處理 我們在實驗中以雅培Architect i2000測定結果為參照，并設置1 ng/ml、5 ng/ml定值血清的對照，分別測定三次，取平均值。在Architect i2000上1 ng/ml定值血清測定平均值為0.72 IU/ml，5 ng/ml定值血清測定平均值為4.77 IU/ml。我們將低水平HBsAg分為兩個級別，第一級別為＜1 ng/ml，第二級別為1 ng/ml到5 ng/ml之間。因此，70例Architect i2000測定結果為0.05 IU/ml＜HBsAg＜50 IU/ml的標本被分成三組，低水平的兩組以及＞5 ng/ml的一組，再用MODULAR〈E〉170和ELISA法進行測定。同樣，Architect i2000測定為陰性(即HBsAg＜0.05 IU/ml)的50例標本，也用 MODULAR〈E〉170和 ELISA法進行測定。統計分析采用SPSS 13.0統計軟件進行配對χ2檢驗。

2 結果

2.1 以雅培Architect i2000測定結果為參照，MODULAR〈E〉170測定各組結果見表1。

2.2 以雅培Architect i2000測定結果為參照，ELISA方法測定各組結果如表2。

2.3 鑒于表1、2，有必要對 Architect i2000和MODULAR〈E〉170在總120例標本與＜1 ng/ml組24例標本兩種方法測定結果做四格表配對χ2檢驗。同樣，對 Architect i2000和 ELISA方法在總120例標本與1～5 ng/ml組22例標本兩種方法測定結果作四格表配對χ2檢驗。結果見表3。

表1 MODULAR〈E〉170測定各組結果Table 1 Coincidence analysis of HbsAg results between MODULAR〈E〉170 and Architect i2000

表2 ELISA方法測定各組結果Table 2 Coincidence analysis of HbsAg results between Architect i2000 and ELISA

表3 三種不同檢測方法的配對χ2檢驗結果Table 3 Correlation analysis between the three different methodology

3 討論

目前，對HBsAg弱陽性的研究報道較少，這應引起臨床的重視［3-4］。有報道［5-7］認為，HBsAg低值弱陽性的HBV感染，可能與HBsAg低水平表達、HBV的整合、含HBV循環免疫復合物的形成等有關，并與來自宿主方面的諸多因素有關。低濃度的HBsAg的出現，可作為乙肝的早期感染的標志。因此，檢測并報告低濃度的HBsAg，具有重要的流行病學和臨床意義。

我們以美國雅培Architect i2000自動化免疫發光分析儀的測定結果(≥0.05 IU/ml的血清標本經中和試驗證實)為參考，與電化學免疫發光測定Roche MODULAR〈E〉170和ELISA方法進行比較分析。結果顯示免疫發光測定Architect i2000與電化學免疫發光MODULAR〈E〉170在測定低水平HBsAg上無顯著差別，在＜1 ng/ml組，兩者符合率為79.2%(P﹥0.05);1～5 ng/ml組和≥5 ng/ml組符合率都為100%。Architect i2000與ELISA法在測定低水平HBsAg有顯著差別(P＜0.05)，兩種方法在＜1 ng/ml組符合率為0%，1～5 ng/ml組符合率為 45.5%;≥5 ng/ml組符合率為100%。研究初步表明，在高濃度HBsAg，即≥5 ng/ml時，這三種方法有很高的符合率，結果一致。而在低水平HBsAg檢測時，Architect i2000與MODULAR〈E〉170顯示了很高的靈敏度，且兩種方法之間的符合率也很高。ELISA方法檢測靈敏度相對較低，在HBsAg＜1 ng/ml時，很難檢出，1～5 ng/ml之間的HbsAg也有54.5%的漏檢率。

篩選試驗是傳染病(例如艾滋病、乙肝等)控制的重要措施，特別強調靈敏度。乙肝是我國第一大傳染病，提高篩選靈敏度，對有效切斷通過輸血、手術等途徑傳播、蔓延意義重大。最近國家權威部門調查顯示，我國成年人群乙肝感染率下降不明顯，主要原因是對傳播途徑控制不嚴所至。我們認為，臨床對HBsAg的篩選，特別是低水平HBsAg檢測，采用免疫發光測定或者電化學免疫發光定量方法為佳。

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