中藥免疫增強劑Ⅱ對草魚的毒性試驗

李春濤，李 超，張其中，2，楊瑩瑩，陳 霞

（1.西南大學生命科學學院 淡水生物生殖與發育教育部重點實驗室 三峽庫區生態環境教育部重點實驗室水產科學重慶市市級重點實驗室，重慶 北碚 400715；2.暨南大學水生生物研究所，廣東 廣州 510632）

草魚（Ctenopharyngodon idellus），屬鯉科、雅羅魚亞科、草魚屬，俗稱草鯇、草根（東北），是我國著名的“四大家魚”之一，深受人們的青睞。但是在養殖過程中容易感染疾病。大量使用抗生素和化學藥品，在動物體內造成殘留，影響和惡化產品質量，嚴重危害人體健康。而中藥具有天然、高效、毒副作用小、抗藥性不顯著、資源豐富以及性能多樣等優點［1］。鑒于中藥以上的優點，中藥在水產動物疾病防治中的潛在作用引起人們廣泛關注。然而，由于目前研究的局限性，使得實際生產中存在忽視某些中藥毒性、盲目使用甚至亂用現象。因而時常發生因對中藥的毒性不明、濃度使用不當而造成魚類中毒的情況。本試驗在前期已篩選出具有較好促生長和免疫增強效果的中藥免疫增強劑Ⅱ基礎上，研究了中藥免疫增強劑Ⅱ對草魚急性毒性的影響，為草魚的健康養殖和病害防治提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚 試驗用二齡草魚初始體重60.15±7.78g，體質健康，規格一致，購于重慶北碚。

1.2 中藥免疫增強劑Ⅱ的制備 中藥免疫增強劑Ⅱ由黃芪、大蒜、菊花、山楂和板藍根、蘆薈、白術、金銀花、當歸、桑枝10種中藥按等比組成，中藥購于重慶北碚心連心大藥房。先加自來水浸泡30min，再煮沸20min，最后文火煎熬30min，藥物經3次煎熬、合并、濃縮到所需要體積（40mL），制成1mL相當于原中藥2.5g。

1.3 飼養管理 試驗用魚飼養在玻璃缸（0.54m×0.26m×0.45m）里。試驗開始前用基礎飼料馴養草魚7d，以適應環境和試驗飼料。試驗開始后，除每日正常投喂飼料外，8：00開始灌喂中藥免疫增強劑Ⅱ1mL／尾，每天1次。玻璃缸24h不間斷充氣。養殖期間水溫為22℃～24℃，pH值為7.6±0.5，溶解氧為6.7～7.4mg／L。

1.4 試驗方法 在初次預試驗中，將150尾草魚隨機分成5組，每組設3個重復，每個重復10尾，組間魚體重量無顯著差異（P＞0.05）。以10倍之差確定5個濃度（2.5g／mL、0.25g／mL、0.025g／mL、0.0025g／mL、0.00025g／mL），試驗處理96h.經過多次試驗，并逐步縮小濃度范圍，最后找出100%致死濃度（g／mL）與最大耐受濃度（g／mL），并根據等對比間距法［2］確定各試驗組濃度（具體方法：r=n-式中r為相鄰兩個劑量比值；b為最高劑量；a為最低劑量；n為劑量組數）。

根據預試驗結果確定試驗濃度范圍。按等對數間距設置5個濃度組及1個對照組，每個組設3個重復。試驗藥物采取先配制最高濃度，再按要求采取逐級稀釋方法配制成各試驗組所需濃度藥液。試驗藥物現配現用，從低濃度到高濃度逐級口灌。試驗期間每天口灌1次。試驗開始的24h，持續觀察記錄草魚的活動情況，然后分別于24h、48h、96h時記錄草魚的活動和存活情況。判斷魚死亡的方法是當魚中毒停止呼吸后，用小鑷子夾魚的尾柄部，5 min內不出現反應可判定為死亡［3］。

1.5 計算方法 采用Karber法［4］計算半致死濃度LC50計算公式：

式中XM為死亡組最大劑量的常用對數；d為相鄰組濃度常用對數差；p為各組的死亡率；∑p為各組死亡率的總和。

安全濃度計算公式：

2 試驗結果

根據各個試驗組的死亡情況研究中藥免疫增強劑Ⅱ對草魚的毒性影響，結果見表1：各試驗組在24、48、96h死亡率均為0。根據公式無法計算其半致死濃度和安全濃度，但24hLC50一定大于2.5 g／mL。

表1 中藥免疫增強劑Ⅱ對草魚的死亡率、半致死濃度和安全濃度

3 討論

藥物對試驗魚的毒性大小可用半致死濃度（LC50）衡量。LC50越小，毒性越強。本中藥免疫增強劑Ⅱ在制備時，其水提取物從最小濃度為0.00025g／mL（成液態）到最大濃度為2.5g／mL（成膠狀）之間，在96h周期中均未出現死亡現象。依據LC50值的大小，可以將化學物質的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5級［5］，如表2所示。

表2 有毒物質對魚類的毒性標準

經換算其24hLC50大于～mg／L，表明本試驗采用的中藥免疫增強劑Ⅱ對草魚的毒性為微毒或者無毒，且對草魚有良好的抗病促生長效果，可作為一種新型的綠色飼料添加劑，在魚類養殖業中具有應用價值。

［1］王吉橋，孫永新，張劍誠.金銀花等復方草藥對牙鲆生長、消化和免疫能力的影響［J］.水產學報，2006，30（1）：90-96.

［2］沈建忠.動物毒理學［M］.北京：中國農業出版社，2004：83-87.

［3］朱蓓蕾.動物毒理學［M］.上海：上海科學技術出版社，1989：37-40.

［4］楊治國，楊東輝，葉新太.八種藥物對瓦氏黃顙魚種的急性毒性［J］.中國水產，2002（3）：59-61.

［5］盧玲，宋福.魚類急性毒性實驗［J］.生物學通報，2002，37（7）：52-53.