關(guān)于聯(lián)合免疫法和化學(xué)法檢測糞便隱血的臨床應(yīng)用研究

陳偉紅

（江蘇省昆山市錦溪人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 昆山 215324）

糞便隱血試驗是診斷各種原因引起的消化道出血和篩選胃腸道惡性腫瘤的重要手段。目前，臨床上應(yīng)用的糞便隱血檢測的方法不外乎兩大類：化學(xué)法和免疫法。過去一直沿用化學(xué)法檢測糞便隱血，為了探討轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）/血紅蛋白（Hb）聯(lián)合免疫法在臨床應(yīng)用中的價值，我們隨機選取昆山市錦溪人民醫(yī)院確診消化道出血患者112例的糞便標本進行了檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑

便隱血免疫雙聯(lián)法檢測試劑盒由萬華普曼生物工程有限公司提供；化學(xué)法檢測試劑盒由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 方法

同時用上述2種方法進行檢測，并計算其相應(yīng)的特異性、敏感性、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值。

1.3 標本來源

在昆山市錦溪人民醫(yī)院就診經(jīng)內(nèi)鏡確診消化道出血患者112例糞便標本，其中73例為上消化道出血病例，39例為下消化道出血病例，陰性對照為65名為昆山市錦溪人民醫(yī)院門診的健康體檢者。

1.4 結(jié)果判斷

2種檢測方法均按說明書要求在規(guī)定時間內(nèi)觀察結(jié)果。化學(xué)法按反應(yīng)顏色深淺判斷陽性結(jié)果。聯(lián)合免疫法2條反應(yīng)線分別代表Tf和Hb，任何1條出現(xiàn)陽性，結(jié)果判為陽性。

1.5 線性范圍檢測

將已知Hb濃度的人抗凝全血用生理鹽水稀釋成濃度為5000、2500、500、100、20、1.0、0.5、0.1μg/mL的紅細胞（RBC）懸液，再用2種方法分別進行檢測。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

采用Excel 2003計算2種方法的特異性、敏感性、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值。

2 結(jié) 果

2.1 聯(lián)合免疫法和化學(xué)法檢測患者標本結(jié)果比較，結(jié)果見表1。

表1 聯(lián)合免疫法、化學(xué)法檢測糞便隱血

2.2 聯(lián)合免疫法和化學(xué)法特異性、敏感性、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值比較，結(jié)果見表2。

表2 聯(lián)合免疫法和化學(xué)法特異性、敏感性、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值（%）

2.3 聯(lián)合免疫法和化學(xué)法線性檢測結(jié)果見表3。

表3 聯(lián)合免疫法和化學(xué)法線性范圍檢測

3 討 論

糞便隱血試驗是各級醫(yī)院對消化道出血的診斷及鑒別診斷有重要價值，同時也是消化道惡性腫瘤普查的一個篩選指標[1]。目前在糞便隱血的實驗室檢查中，化學(xué)法是目前主要采用的方法，比較常用的有鄰甲苯胺法、還原酚酞法、匹拉米洞法等。其原理基本相同，都是基于Hb中的亞鐵血紅素有類似過氧化酶活性，能催化H2O2作為電子受體使色原氧化呈色，呈色的深淺與Hb含量呈正比。但干擾因素多，易受飲食（肉類、蔬菜、藥物、鐵劑等）的影響[2]。而免疫法應(yīng)用較早的是免疫學(xué)檢測Hb法，該方法利用抗人Hb的單克隆抗體進行隱血檢測，特異地與糞便中人Hb結(jié)合，再利用膠體金標記的抗人血紅蛋白抗體顯色測定，其特異性較強，靈敏度較高，被廣泛應(yīng)用于臨床，已被世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界胃腸鏡檢查協(xié)會（OMED）作為糞便隱血試驗的一種較為確認的方法[3]。但是也有研究表明上消化道出血Hb法陽性率較低，是因為Hb在消化道中消化酶及細菌充分分解后不再具有原來的免疫原性，而且出血量過多時因血紅蛋白（抗原）濃度過高造成前帶現(xiàn)象以及患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配，均可導(dǎo)致假陰性[4]。國外學(xué)者對Hb以外的血液成分如Tf、結(jié)合血紅素、纖維蛋白原等作為出血示蹤進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tf具有消化道出血的特異性和在對抗細菌分解的穩(wěn)定性，在檢測Hb的同時檢測Tf就能減少假陰性反應(yīng)的出現(xiàn)，提高臨床診斷準確率[5]。從表1中可以看出，Hb法在檢測下消化道出血時確實不及Tf法，而化學(xué)法與臨床診符合率更低，甚至低于2種免疫法單獨所得結(jié)果，這與相關(guān)報道[6]也較一致。表2中聯(lián)合免疫法特異性、敏感性、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值與臨床診斷符合率均明顯高于化學(xué)法，其特異性和陽性預(yù)測值更是達到98.5%和99.1%，是由于該法按照Tf和Hb兩種方法來判斷，已知遺傳性無轉(zhuǎn)鐵蛋白血癥、各種惡性疾病、炎癥為主的多種疾病均可導(dǎo)致轉(zhuǎn)鐵蛋白低下，所以與血紅蛋白同時檢測可起到優(yōu)勢互補的作用[7]。從表3中我們還可以發(fā)現(xiàn)，Hb檢測法檢測線性下限為0.5μg/mL左右，由于血液中Hb的含量高于Tf所以此檢測閾值下限也代表了雙聯(lián)法的最小檢出限，微量病理性出血就可以檢測出。而化學(xué)法在20μg/mL以下已無法檢出，消化道微量出血有可能發(fā)生漏檢。聯(lián)合免疫法可測出樣本中的微量Hb（0.5μg/mL），Tf法在Hb濃度為5000μg/mL仍可呈現(xiàn)陽性[8]。需要注意的是，在糞便形成過程中，少量的消化道出血不一定與之混合均勻，且消化道出血具有間斷性。因此，欲提高陽性率，必須遵照操作規(guī)程連續(xù)3d采集標本，要告知患者多部位取便，實驗室檢驗人員對標本要多點采樣進行檢測。

綜上所述，聯(lián)合免疫法既可消除化學(xué)法的假陽性問題，又可避免因抗原過量產(chǎn)生前帶反應(yīng)和Hb被消化而出現(xiàn)的假陰性問題，有效提高消化道出血的檢出率，是消化道出血性疾病輔助診斷的可靠依據(jù)，值得廣泛推廣應(yīng)用于臨床。

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