凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax，p53在子宮內膜異位癥組織中的表達及相關研究

丁 麗 王艷萍 李彩慧

（日照市人民醫院婦科，山東 日照 276800）

子宮內膜異位癥（endometiosis，EMS）是一種具有惡性行為的良性疾病，在育齡婦女中的發病率為10%～15%，近幾年具有上升趨勢。占普通婦科手術的30%以上，內異癥所引起的痛經，下腹痛等嚴重地影響婦女的健康和生活質量，也是不孕癥的主要原因之一[1]。有研究表明，子宮內膜中存在凋亡并受一些凋亡調節因子的調控[2]。正常子宮內膜呈周期性增生和脫落，是通過調節子宮內膜細胞增生與凋亡等方式實現的。越來越多的證據證實凋亡是子宮內膜細胞保持穩定的關鍵因素。本文通過應用免疫組織化學法檢測凋亡調節因子Bcl-2、Bax及p53在子宮內膜異位癥患者子宮在位內膜及異位內膜組織中的表達，探討細胞凋亡機制在子宮內膜異位癥發生發展中的作用，為探討子宮內膜異位癥的病因及臨床治療提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2008年1月至2010年12月期間日照市人民醫院確診受控子宮內膜異位癥患者并手術治療者60例，年齡在30～55歲，平均為42歲，取盆腔異位內膜組織并刮取在位內膜分別60例。另取經期非子宮內膜異位癥（并排除其他婦科疾?。┑恼Ｈ斯稳饶そM織 40例為對照組（自愿），年齡30～55歲，平均為40歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

Bcl-2、Bax并克隆抗體、p53并克隆抗體，及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術開發公司。

1.2.2 免疫組織化學SP法檢測

標本均常規固定，包埋，過濾切片3張，分別作Bcl-2、Bax，p53免疫組織化學染色。Bcl-2陽性反應物為棕褐色顆粒，分布于細胞膜和（或）細胞質。Bax陽性反應物為桔黃色顆粒，分布于細胞核（或）細胞質。p53陽性反應物為棕黃色顆粒，分布于細胞核。

1.2.3 結果判定

根據細胞染色強度和染色細胞所占面積的得分之和進行評估：①染色強度評分標準；②不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；染色細胞占整張面積評分標準；無陽性細胞染色為0分，≤25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；③各種評分相加，0～1分為（-），2分為弱陽性（+），3～4分為陽性（++），5～6分為強陽性（+++）。

1.3 統計學方法

應用SPSS11.5統計軟件，秩和檢驗、χ2檢驗等統計學方法，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 Bcl-2在異位內膜組表達強于在位內膜及對照組（P值均＜0.05），Bax在異位內膜組的染色強度低于在位內膜組和對照組，有顯著性差異（P值均＜0.05）。見表1。

表1 Bcl-1、Bax在不同內膜組的表達

2.2 p53在正常子宮內膜及子宮內膜異位癥患者在位內膜中均呈陰性表達。在子宮內膜異位癥患者異位內膜中的陽性表達率為20%，有顯著性差異（P＜0.05）。見表2。

表2 p53在不同內膜組的表達

3 討 論

細胞凋亡是指有核細胞在一定條件下，通過啟動內部機制，經過一連串的細胞變性，最終發生死亡的過程。它在有機體的發育、生殖、老化、免疫等生理過程中，病毒感染、增殖性疾病、腫瘤發生等病理過程中都起到十分重要的作用，對維持個體組織器官的正常形態和功能有重要意義[3]。

Bcl-2為凋亡抑制基因，Bax為促凋亡基因。Bcl-2與Bax比例決定細胞對某一凋亡刺激的敏感性。Bcl-2是目前發現的與凋亡關系密切的基因之一。多出現在壽命長的干細胞群里，如子宮內膜、結腸、皮膚、和前列腺等[4]。John等通過培養神經元有絲分裂狀況也證實了Bcl-2在不引起細胞增殖的情況下，可以抑制細胞凋亡。Bax 的主要作用是加速細胞死亡，并與Bcl-2一起調節細胞凋亡，子宮內膜的周期性增生與脫落是通過細胞增殖和凋亡的形式來實現的[5]。

此外，Bcl-2/Bax 異二聚體的比值越低凋亡越明顯。本研究結果顯示，Bcl-2表達在異位內膜中最強，在正常內膜中最弱。Bax蛋白表達在異位內膜中最弱，正常內膜中最強。正常內膜中大量凋亡細胞的存在，使得正常月經期脫落的內膜細胞不再具有增殖分化的能力。在EMS異位內膜組Bcl-2表達增強，Bax表達減少，Bcl-2/Bax比值大于對照組。由此我們可以推測EMS異位內膜的抗凋亡性大大增強，使得月經期逆流至腹腔的子宮內膜的活性增高而具有繼續生長的潛能。有利于子宮異位內膜細胞的種植、侵襲和發展。這也是本研究結果的重要意義。

腫瘤抑制因子p53蛋白是人體內一個關鍵的細胞凋亡調節因子，Gylfason等[6]研究結果提示，體細胞p53基因隨機改變在發生重度子宮內膜異位癥中起一定作用。本實驗采用免疫組織化學SP法檢測發現p53在異位子宮內膜的陽性表達，顯著高于在位子宮內膜及正常子宮內膜中的表達。再次證明了異位的子宮內膜組織存在凋亡抑制，細胞周期調控機制發生了改變，從而使其存活種植，過度增生，促進了內膜異位癥的發生發展。

通過以上研究，我們得出子宮內膜異位癥中異位的子宮內膜組織抗凋亡性較內異癥的在位內膜及正常子宮內膜明顯增強的結論。為探討子宮內膜異位癥的發生發展機理及臨床治療提供理論依據。如果能用藥物抑制異位內膜增殖，誘導其凋亡，可能對EMS保守治療起積極作用。

[1]朗景和.子宮內膜異位癥的研究與設想[J].中華婦產科雜志,2003,38(8):478-480.

[2]任云青.子宮內膜異位癥與細胞凋亡[J].醫學綜述,2005,11(8):689-691.

[3]Biscotti CV,Hart WR.Apoptotic bodies: a consistent morphologic feature of endocervical adenocarcinoma in situ [J].Am J Surg Pathol,2008,22(3):434-439.

[4]Watanbe H,Kanzaki H,Narukawa S,et al.Bcl-2 and Fas expression in eutopic and ectopic human endometrium during the menstrual cycle in relation to endometrial cell apoptosis[J].Am J Obstet Gynecol,1997,176(2):360-368.

[5]王云霞.李亞里.細胞凋亡與子宮內膜異位癥[J].解放軍醫學雜志,2000,25(6):161-163.

[6]GyHason JT,Dang D,Petursdottir V,et al.Quantitative DNA perturbations of p53 in endometriosis : analysis of American and Icelandic cases [J].Fertil Steril,2005,84(5):1388-1394.