樺褐孔菌粗多糖對(duì)急性感染弓形蟲小鼠的存活時(shí)間及SOD的影響

劉 妍,鞠玉琳,劉利本

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,吉林 龍井 133400)

弓形蟲病是由龔地弓形蟲引起的一種分布極為廣泛的全球性人獸共患病,可在人和牛、羊、豬、雞等多種動(dòng)物之間進(jìn)行傳播,世界平均感染率為25%～50%,嚴(yán)重的威脅人類的健康與生活[1]。弓形蟲急性感染期患者治療尚無理想藥物,目前公認(rèn)有效的西藥有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、復(fù)方胺甲唑、阿奇霉素、螺旋霉素、克林霉素等,但它們均有較大副作用。與西藥相比,中藥副作用較小,近些年有關(guān)中藥治療弓形蟲病研究的報(bào)道很多,多數(shù)收到了很好的療效[2]。為此本試驗(yàn)擬以樺褐孔菌粗多糖(IOCP)為研究對(duì)象,通過試驗(yàn)觀察IOCP對(duì)急性弓形蟲感染小鼠存活時(shí)間及體內(nèi)主要臟器中超氧化物歧化酸(SOD)的影響,以期為探索一種用于治療弓形蟲病的有效藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康昆明系小鼠,雌雄各半,體重18～22 g,由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 蟲株 弓形蟲RH株由日本帶廣原蟲病研究所惠贈(zèng)。

1.3 藥物及試劑 樺褐孔菌購自延吉市某藥材專柜。提取粗多糖的含量為500 mg/mL,4℃冰箱保存。陽性對(duì)照藥物蒿甲醚片劑,由昆明制藥集團(tuán)股份有限公司提供,每片含萘酚喹50 mg,青蒿素125 mg,用雙蒸水配置成懸濁液,濃度3 mg/mL。

1.4 試劑 SOD活性檢測(cè)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5 試驗(yàn)分組 分空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組(蒿甲醚)和IOCP組。每組20只小鼠。

1.6 動(dòng)物模型建立 除空白對(duì)照組外,其余各組每只鼠均腹腔注射濃度為1×103/m L弓形蟲速殖子。

1.7 給藥 小鼠感染弓形蟲4 h后灌胃給藥,每天1次,灌胃量為0.2 m L/10 g體重。正常飼養(yǎng),療程14 d,觀察至30 d。

1.8 觀察小鼠一般情況 自感染后,每天觀察小鼠有無拱背聳毛,拉稀;記錄小鼠死亡時(shí)間、飲食及活動(dòng)狀況,直到30 d。

1.9 指標(biāo)測(cè)定 分別在小鼠感染后第3天、第6天用羥胺法測(cè)定各組小鼠的血清、心、肝和肺組織中SOD活性;SOD活性檢測(cè)方法按照試劑盒說明書操作。

1.10 組織勻漿制備 取小鼠心、肝、肺稱重,在冷生理鹽水中漂洗,濾紙拭干,再切取相應(yīng)部位組織適當(dāng)大小稱重,加入組織重量9倍的生理鹽水,置入勻漿器中在冰水中勻漿5 min,3000 r/min離心10 min,分別吸取0.1 m L上清液測(cè)定SOD活性。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用t檢驗(yàn),用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般情況 除空白對(duì)照組外,其余3組小鼠均不同程度的出現(xiàn)拱背聳毛、食欲下降,活動(dòng)減少的情況,但陰性對(duì)照組的小鼠最為嚴(yán)重。接種弓形蟲及治療后各組小鼠存活時(shí)間見表1。

表1 各組小鼠存活時(shí)間比較

2.2 SOD檢測(cè)結(jié)果 見表2。

表2 各組小鼠不同時(shí)間、不同臟器中SOD活性的測(cè)定)

表2 各組小鼠不同時(shí)間、不同臟器中SOD活性的測(cè)定)

注:第3天與空白對(duì)照組比較,P＜0.05(▲);第6天與陰性對(duì)照組比較,P＜0.05(△)

治療天數(shù) 組別 只 血清SOD(U/mL) 組織勻漿(U/mg)心臟 肝臟 肺臟空白對(duì)照組 5 16.50±0.11 16.66±0.06 17.34±0.13 22.19±0.11第3天陰性對(duì)照組 5 23.60±0.11▲ 20.92±0.14▲ 20.14±0.17▲ 24.60±0.17▲陽性對(duì)照組 5 20.05±0.11▲ 17.48±0.11▲ 14.95±0.09▲ 22.39±0.12▲粗多糖組 5 20.46±0.07▲ 19.56±0.07▲ 17.24±0.09▲ 22.47±0.06▲第6天空白對(duì)照組 5 16.50±0.11 16.66±0.06 17.34±0.13 22.19±0.11陰性對(duì)照組 5 11.09±0.10 9.95±0.08 9.45±0.18 10.82±0.11陽性對(duì)照組 5 17.47±0.08△ 13.27±0.12△ 12.47±0.07△ 18.02±0.07△粗多糖組 5 17.70±0.10△ 16.90±0.09△ 13.97±0.17△ 18.48±0.08△

3 討論

上述試驗(yàn)結(jié)果提示,IOCP及陽性藥物均能有效的延長(zhǎng)感染弓形蟲小鼠的存活時(shí)間,但I(xiàn)OCP延長(zhǎng)感染弓形蟲小鼠的存活時(shí)間高于陽性藥物達(dá)5 d。游運(yùn)輝等[3]作了蒿甲醚治療試驗(yàn)小鼠急性弓形蟲感染的研究,揭示了蒿甲醚對(duì)小鼠試驗(yàn)型急性弓形蟲感染有一定的療效。王明建[4]等作了4種中藥抗弓形蟲效果比較的研究,其研究說明樺褐孔菌及蒿甲醚均對(duì)弓形蟲具有一定的治療效果,本試驗(yàn)與其試驗(yàn)結(jié)果相一致。

弓形蟲的致病作用主要是速殖子在細(xì)胞內(nèi)繁殖,以致細(xì)胞被反復(fù)破壞,引起組織的炎癥反應(yīng),氧依賴性殺菌系統(tǒng)活化,呼吸暴發(fā),產(chǎn)生許多氧自由基,其可以破壞生物膜,SOD會(huì)清除氧自由基,對(duì)急性感染弓形蟲小鼠有保護(hù)作用。從試驗(yàn)結(jié)果得知治療第3天時(shí),IOCP組、陽性藥物組及陰性對(duì)照組小鼠體內(nèi)SOD活性都有不同程度的升高,與正常組相比差異顯著(P＜0.05)。這可能是小鼠感染初期在應(yīng)激狀態(tài)下,為消除過多的OFR,保護(hù)組織及其靶器官膜系統(tǒng)不受損傷,反饋性地導(dǎo)致機(jī)體SOD合成增多的結(jié)果,因而得出弓形蟲感染時(shí)機(jī)體有氧化損傷的發(fā)生,為此在治療弓形蟲感染時(shí)考慮到抗氧化損傷的治療是很有必要的[5]。治療第6天時(shí),IOCP組及陽性藥物對(duì)照組小鼠體內(nèi)的SOD活性降低程度不明顯,但與陰性對(duì)照組的小鼠血清、心、肝和肺的SOD活性比較差異顯著(P＜0.05),這可能是模型組沒有得到治療,隨著感染加重,病情惡化,炎癥加重,加上飲食減少、蛋白合成降低,SOD消耗過多,以致SOD活性急劇下降;也有可能和體內(nèi)的微量元素的消耗有關(guān)系[5]。耿志輝等[6]在弓形蟲感染鼠肝脾腦微量元素測(cè)定中也證實(shí)了弓形蟲感染會(huì)引起體內(nèi)Cu2+減少。因?yàn)镃u2+是SOD生物合成的必需原料,所以它的不足使體內(nèi)SOD合成減少。從試驗(yàn)結(jié)果中可得知,IOCP組和陽性藥物小鼠血清及臟器的SOD活性均高于陰性對(duì)照組,這可能是IOCP和陽性藥物具有清除體內(nèi)氧自由基的作用,但I(xiàn)OCP組略高于陽性藥物對(duì)照組,說明IOCP比陽性藥物的治療效果更佳,而陰性對(duì)照組因缺乏藥物治療,體內(nèi)過多的氧化代謝終產(chǎn)物超出了機(jī)體的清除能力。這表明IOCP對(duì)弓形蟲感染小鼠體內(nèi)氧化損傷具有較好的保護(hù)作用。

[1] 吳觀陵.人體寄生蟲學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:247.

[2] 詹希美.人體寄生蟲學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:95.

[3] 游運(yùn)輝.歐陽顆,向選東.用蒿甲醚治療實(shí)驗(yàn)小鼠急性弓形蟲感染的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2000,10(6):35.

[4] 王明建,鞠玉琳,高威,等.4種中藥治療急性弓形蟲感染小鼠的療效觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2010,46(1):32-33.

[5] 萬紅嬌,楊翠萍,王敏章.自擬抗弓形蟲湯對(duì)急性弓形蟲感染小鼠SOD、MDA的影響[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,19(4):61-63.

[6] 耿志輝,石毅,方艷秋,等.弓形蟲感染鼠肝脾腦微量元素的測(cè)定[J].中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志,2000,18(6):347-348.