星形膠質細胞在完全弗氏佐劑誘導的炎性痛中的作用

張濤 陳磊 張怡靚 李楚彥 陳仁義

星形膠質細胞活化會釋放某些炎癥因子及細胞因子與神經元相應受體結合，增強神經元興奮性[1]，從而在神經病理性痛中發揮重要作用[2]。炎性痛與神經病理性痛具有不同的發病機制[3]，因此本實驗以完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)誘導炎性痛動物模型，觀察脊髓背角星形膠質細胞在CFA致痛模型中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料220～250 g雄性SD大鼠由第四軍醫大學實驗動物中心提供。

1.2 主要儀器和試劑機械痛敏測試儀(North Coast公司);熱痛敏測試儀(西安博邦化工有限公司);Real-time PCR反應體系及水平電泳槽(Bio-Rad公司);膠原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)PCR引物(正義鏈:5'-AGAGGGACTTCCATCCACTG-3'反義鏈:5'-GGTTGTGGACTCTTCCAGGT-3'南京金斯瑞生物科技有限公司);CFA，L-α-aminoadipate(LAA)及Real-time PCR試劑盒(Sigma公司)。

1.3 實驗分組及給藥SD大鼠隨機分為3組(n=6/組):CFA組(以60 mg/kg劑量腹腔注射4%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，俯臥位固定于手術臺上，于左下肢足底注射100 μl CFA誘導炎性痛模型，同時參照文獻[3]行鞘內置管術，術后6 d鞘內給予生理鹽水10 μl);LAA組(處理方式同CFA組，但鞘內給予LAA溶液10 μl);對照組(處理方式同CFA組，但足底及鞘內均給予生理鹽水)。LAA藥物配置:以生理鹽水配制，濃度為100 nmol/10 μl。

1.4 疼痛閾值的檢測參照文獻所述方法[2]，于術前2 d及術后7 d運用von Frey絲檢測大鼠左后肢足底機械性痛域，運用Hargreaves熱輻射法檢測大鼠左后肢足底熱痛閾。

1.5 Real-time PCR檢測大鼠脊髓背角GFAP mRNA變化行為學測試之后，腹腔注射4%戊巴比妥鈉溶液麻醉大鼠(60 mg/kg)，剝離脊髓腰膨大，分離腹背側，參照文獻[4]反轉錄脊髓背角GFAP mRNA，利用公式2-deltadeltaCt分析數據結果。

1.6 統計學方法數值以均數±標準差表示，利用SPSS 17.0軟件行單因素方差分析LSD檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。……