高危型HPV檢測及TCT方法在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用

王青 蔡永梅 魏軍 陳耀平

浸潤性子宮頸癌(invasional cervical cancer，ICC)是嚴(yán)重威脅婦女健康的最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率都較高。我國每年有新發(fā)病例近10萬［1］并呈現(xiàn)年輕化趨勢，病死人數(shù)3萬～5萬。癌前病變篩查及早期診斷是降低ICC發(fā)病率和病死率的關(guān)鍵，也是治療宮頸癌及預(yù)后監(jiān)測的有效手段。近年來研究表明，高危型人乳頭瘤病毒(high-risk human papillomaviruses，HR-HPV)持續(xù)性感染是宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)生發(fā)展的主要因素［2］。巴氏涂片細(xì)胞學(xué)檢查作為宮頸癌篩查的方法已運(yùn)用50多年，明顯降低了宮頸癌的病死率，但由于受取材、涂片、閱片等因素影響假陰性率較高，有文獻(xiàn)報(bào)道為20% ～40%［3］。本研究通過采集宮頸病變患者子宮頸上皮脫落細(xì)胞，采用第二代雜交捕獲實(shí)驗(yàn)(hybrid captureⅡ，HC-Ⅱ)檢測HR-HPV感染，并使用新柏氏液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)(Thinprep Cytologic Test，TCT)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查;旨在探討宮頸病變各階段中HR-HPV的感染情況;并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對TCT細(xì)胞學(xué)檢查和HC-Ⅱ檢測HR-HPV感染兩種方法的敏感度和特異度進(jìn)行評價(jià)，為臨床提供更為準(zhǔn)確可靠的宮頸癌篩查依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月至2009年6月在寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院就診的宮頸病變患者159例，年齡26～75歲;除外先天性遺傳病、妊娠、生殖道急性炎癥和嚴(yán)重內(nèi)科疾病患者。病理學(xué)分組：采用2007年WHO宮頸癌病理分類標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)病理診斷結(jié)果分為正常、宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、鱗癌(squamous cell carcinoma，SCC)六組。細(xì)胞學(xué)檢查采用2001年子宮頸細(xì)胞學(xué)Bethesda報(bào)告系統(tǒng)(The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology，TBS)診斷標(biāo)準(zhǔn)，將TCT細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果分為六類：正常范圍(within normal limit，WNL)、意義不明的非典型鱗狀上皮增生(atypical squamous cell of undetermined significance，ASCUS)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesions，LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL)和鱗癌。

1.2 研究方法

1.2.1 HC-II方法檢測HR-HPV DNA 使用美國Digene公司生產(chǎn)的DML 2000雜交捕獲系統(tǒng)，可以一次性精確地檢出13 種 HR-HPV 病毒亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。用專門HC宮頸采樣器采集標(biāo)本，常溫下可保存兩周;如在1周后進(jìn)行檢測，標(biāo)本于-20℃可保存3個(gè)月。通過裂解、雜交、捕獲、反應(yīng)、沖洗和信號(hào)收集等步驟，在DML2000系統(tǒng)上進(jìn)行判讀，分析演繹結(jié)果。參考范圍為0～1.00 pg/ml，檢測結(jié)果大于1.00 pg/ml時(shí)，判定HR-HPV DNA檢測陽性，表示存在HR-HPV感染。

1.2.2 TCT細(xì)胞學(xué)檢查 使用意大利HOSPITEX公司生產(chǎn)的Cyto Fast賽涂液基薄層制片系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。使用TCT檢查專用采樣器采集子宮頸細(xì)胞標(biāo)本后置入保存液中進(jìn)行漂洗，獲得全部細(xì)胞標(biāo)本，常溫下標(biāo)本可保存2周。經(jīng)過標(biāo)本預(yù)處理、液基薄層細(xì)胞制片、染色和透明封固后，采用2001TBS描述性分類診斷系統(tǒng)進(jìn)行閱片。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多個(gè)樣本率的比較采用檢驗(yàn)，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HR-HPV在宮頸病變各階段中的感染情況 HR-HPV的感染率隨著宮頸病變程度的加重而升高，各組HR-HPV感染率與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HR-HPV感染率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ各階段中逐步增高，各組感染率經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，=5.473，P=0.065;見表1。

2.2 TCT細(xì)胞學(xué)與病理學(xué)檢查結(jié)果比較 以病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，TCT細(xì)胞學(xué)檢查為LSIL的檢出率為50.00%(9/18);HSIL的檢出率為53.33%(40/75);鱗癌的檢出率為83.33%(15/18)。TCT細(xì)胞學(xué)檢查為ASCUS的17例中，病理學(xué)診斷為CIN者12例，占70.59%(12/17);CINⅡ/Ⅲ為7例，占41.18%(7/17);見表 2。

2.3 HC-II方法檢測HR-HPV感染和TCT細(xì)胞學(xué)檢查兩種方法篩查高級別CIN(CINⅡ/Ⅲ)的比較 在高級別CIN中，HC-Ⅱ檢測HR-HPV感染的靈敏度為86.67% 、特異度為51.19%;TCT細(xì)胞學(xué)檢查的靈敏度為53.33%、特異度為89.29%，見表3。

表1 宮頸病變各階段中HR-HPV感染的比較

表2 TCT細(xì)胞學(xué)與病理學(xué)檢查結(jié)果比較

表3 兩種方法篩查高級別CIN(CINⅡ/Ⅲ)的比較(%)

3 討論

宮頸癌是引起女性死亡最常見的、對社會(huì)和家庭影響極大的惡性腫瘤，屬于多病因、多因素、多階段性的疾病，其發(fā)病機(jī)理目前尚不明確。宮頸癌的發(fā)病是從正常宮頸→宮頸上皮內(nèi)瘤變→宮頸癌的一個(gè)漸進(jìn)過程，存在較長的可逆轉(zhuǎn)的癌前病變期。研究證明未經(jīng)治療的宮頸癌前病變的自然病程可表現(xiàn)為三種結(jié)局，即病變消退、持續(xù)不變或病變進(jìn)展，及時(shí)發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌，并進(jìn)行恰當(dāng)?shù)奶幚恚渲斡蕩缀踹_(dá)100%［4］。因此，宮頸癌是一種可以預(yù)防和治愈的疾病，其篩查和預(yù)防具有重要意義。

1996美國FDA批準(zhǔn)了改良的制片技術(shù)-液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)，避免了細(xì)胞易隨器材丟失、過度干燥的假象;使上皮細(xì)胞與粘液、血液等分離，制成薄層涂片后具有異常細(xì)胞易于被辨認(rèn)等優(yōu)點(diǎn)，成為國內(nèi)外婦產(chǎn)科宮頸陰道細(xì)胞學(xué)疾病檢查的常規(guī)方法［5］。本研究結(jié)果顯示：LSIL檢出率為50.00%(9/18);HSIL檢出率為53.33%(40/75);鱗癌檢出率為83.33%(15/18)。TCT細(xì)胞學(xué)檢查為ASCUS的結(jié)果，并不代表單一的診斷，它可以提示HPV感染、CIN、甚至是宮頸癌，也可能與炎癥或制片質(zhì)量有關(guān)，因此，篩查出ASCUS并進(jìn)一步予以診斷，找出其中潛在的高度病變，在宮頸癌篩查中具有重要意義。以上結(jié)果說明，僅憑細(xì)胞學(xué)檢查，很難完全達(dá)到早期篩查的目的，需要結(jié)合其他方法檢查。

自1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒顆粒以來，目前世界上已發(fā)現(xiàn)120余種HPV，其中30多種與宮頸病變有關(guān)。HR-HPV有16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82 等 15 種，主要導(dǎo)致CINⅡ、Ⅲ和宮頸癌的發(fā)生，尤其是 HPV16和18型［6］，HPV陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌。本研究結(jié)果證實(shí)了HR-HPV感染對于CIN和宮頸癌有著高度的一致性，是宮頸癌發(fā)生的必要因素;同時(shí)以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)方法，對TCT細(xì)胞學(xué)檢查和HC-Ⅱ方法檢測HR-HPV兩種方法篩查高級別CIN(Ⅱ/Ⅲ)的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值進(jìn)行比較，研究表明，HC-Ⅱ檢測HR-HPV感染的靈敏度和陰性預(yù)測值高于TCT細(xì)胞學(xué)檢查，而TCT細(xì)胞學(xué)檢查的特異度和陽性預(yù)測值，兩者聯(lián)合檢查可增加高級別CIN的檢出率，從而有效預(yù)防和減少宮頸癌的發(fā)生，在臨床診斷和治療中有重要的應(yīng)用價(jià)值。

［1］李廣燦，張玉玲，張敏.1999～2002年全球癌癥發(fā)病與死亡趨勢分析．中國腫瘤，2008，17(8)：646-649．

［2］Walboomers JM，Jaclbs MV，Manos MM，et al.Hunman papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical worldwide．Pathol，1999，189：12-19．

［3］鄔素芳，王薇，何福仙，等.宮頸癌早期診斷4種方法的比較和意義．中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2004，20(10)：612-614．

［4］Schiffman MH，Brinton LA.The epidemiology of cervical carcinogenesis．Cancer，1995，76(10 Suppl)：1888-1901．

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［6］Woodman C B，Stuart Collins，Heather Winter，et al.Natural history of cervical human papillomaviruses infection in young women：alongitudinal cohortstudy．Lancet，2001，357(9271)：1831-1836．