科技進(jìn)展

樹突狀細(xì)胞對豬鏈球菌的應(yīng)答特性

對豬來說鏈球菌是一個(gè)重要的致病菌，可引起豬的敗血癥和腦膜炎。然而，目前還不清楚宿主對鏈球菌的先天、后天免疫應(yīng)答及鏈球菌對宿主免疫應(yīng)答的抵抗作用。

在本研究中首次評估了鏈球菌與骨髓中提取的樹突狀細(xì)胞 （DC）相互作用的能力，另外，鏈球菌莢膜多糖調(diào)節(jié)DC分泌細(xì)胞因子的作用也被評定。具有生物莢膜的豬鏈球菌可以抵御DC的吞噬，但是它可促進(jìn)機(jī)體表達(dá)TLR2和TLR6以及促進(jìn) DC表達(dá) IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12p40、TNF-α。 鏈球菌的莢膜多糖干擾DC的吞噬作用，如果沒有莢膜多糖的鏈球菌被吞入，很容易被DC分解。鏈球菌的細(xì)胞壁成分主要負(fù)責(zé)激活DC，因?yàn)榍v膜多糖負(fù)突變型菌株誘導(dǎo)DC細(xì)胞因子的水平高于野生型菌株。莢膜多糖干擾DC的共刺激分子CD80/86和MHC-Ⅱ的表達(dá)。

我們研究得出鏈球菌與豬的DC相互作用，揭示了DC在宿主對2型鏈球菌的先天和獲得性免疫中起到重要的作用。

譯自：Lecours MP，Segura M，Lachance C，et al.Characterization of porcine dendritic cell response to Streptococcus suis.Vet Res， 2011， 42 （1） :72.

甘露寡糖調(diào)節(jié)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染豬的基因表達(dá)譜

通過研究對照組和甘露寡糖 （MOS）飼喂組實(shí)驗(yàn)豬外周血單核細(xì)胞 （PBMC）和支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞 （BALF）基因表達(dá)的特點(diǎn)（對照組和MOS飼喂組又分別分為兩組——感染PRRSV組和不感染PRRSV組，感染病毒組在感染病毒后7天采樣）。斷奶豬 （3周齡）飼喂分別含0%和0.2%MOS（Bio-Mos）的日糧，然后在5周齡時(shí)接種PRRSV（對照組進(jìn)行假接種）。從細(xì)胞中提出總 RNA（3只豬/每個(gè)處理）。雙鏈cDNA擴(kuò)增、標(biāo)記，并進(jìn)一步雜交豬基因組的Affymetrix基因芯片陣列，該基因芯片陣列由23937套探針組成，代表20201個(gè)基因。運(yùn)用在R語言環(huán)境上的生物芯片數(shù)據(jù)和基因組數(shù)據(jù)分析軟件包進(jìn)行微陣列數(shù)據(jù)分析 （BioConductor）。差異表達(dá)基因用limma分析，通過擬合混合線性模型相當(dāng)于一個(gè)2×2因子方差分析。

飼喂MOS和PRRSV感染因素改變了PBMC和BALF細(xì)胞 （P＜0.05）幾千套探針基因的表達(dá)。MOS×PRRSV組實(shí)驗(yàn)豬在飼喂MOS和PRRSV感染兩個(gè)因素作用下， PBMC（977基因探針上調(diào)，1128基因探針下調(diào)）比BALF（117基因探針上調(diào)，78基因探針下調(diào)）改變更多的免疫不相關(guān)基因探針表達(dá)。MOS×PRRSV組實(shí)驗(yàn)豬的PBMC編碼炎性介質(zhì)的免疫相關(guān)基因探針表達(dá)受影響 （P＜0.05）。在未感染的豬中，飼喂MOS的豬只 PBMC表達(dá) IL-1α、IL-6、髓樣分化因子 88、TLR4、 MHCⅡ和 DDX58 增加 （P＜0.05）。

這就證明飼喂MOS可提高豬的抗病力，而且在感染后3天和7天可以很快增加白細(xì)胞的數(shù)量。在感染豬，MOS使PBMC表達(dá) IL-1β、IL-6、IL-8、巨噬細(xì)胞炎性蛋白（MIP-1α、 MIP-1β）、 單核細(xì)胞趨化蛋白 （MCP-1）和 TLR4基因減少 （P＜0.05）。這個(gè)發(fā)現(xiàn)解釋了為什么飼用MOS組的感染PRRSV 7天后的豬只發(fā)燒癥狀能得以改善。

IL-1β、IL-6、MIP-1β、MCP-1和 TLR4基因表達(dá)被實(shí)時(shí)定量PCR檢測證實(shí)。MOS使感染豬的BALF細(xì)胞表達(dá)TLR4、MHCⅡ、補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)基因下降，但是MHCI基因表達(dá)增加。

總之，MOS調(diào)節(jié)豬白細(xì)胞的免疫相關(guān)和免疫不相關(guān)基因的表達(dá)，也許能提供一個(gè)提高豬免疫力對抗感染的方法，避免免疫系統(tǒng)的應(yīng)激。

譯自：Che TM， Johnson RW， Kelley KW，et al.Mannan oligosaccharide modulates gene expression profile in pigs experimentally infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus.J Anim Sci.2011 May 27.[Epub ahead of print]

用PCR方法在豬胴體中檢測豬帶絳蟲囊尾蚴

PCR檢測肌肉病變中豬帶絳蟲囊狀幼蟲DNA，對屠豬胴體肉品進(jìn)行檢疫。在本研究中兩對引物 （TBR引物和Cox1引物）擴(kuò)增兩個(gè)目的基因 （一個(gè)是大亞基rRNA基因；一個(gè)是細(xì)胞色素C氧化酶第Ⅰ亞基基因）用于檢測豬帶絳蟲。在豬囊蟲病檢測中陽性樣品TBR引物和Cox1引物可分別擴(kuò)增出286 bp和984 bp的產(chǎn)物。在陰性樣品中沒有擴(kuò)增出任何片段，因此認(rèn)為這兩對引物非常特異。

總共225頭豬采樣檢測豬囊蟲病，其中在25頭豬的酮體中見到囊尾蚴包囊 （16個(gè)發(fā)育的包囊和9個(gè)退化的包囊）被確認(rèn)為豬囊蟲病陽性病例，PCR檢測與上述眼觀檢查一致。其中有35個(gè)胴體的肌肉病變懷疑是豬囊蟲病，只有2個(gè)在PCR檢測中為陽性。對兩個(gè)引物的檢測限度進(jìn)行了分析，TBR引物最低檢測量為10 pg囊狀幼蟲DNA，而Cox1引物最低檢測量為1 ng囊狀幼蟲DNA。

這個(gè)研究說明PCR方法是一個(gè)高效檢測囊蟲病豬肉的方法，對于排除疑似囊蟲病豬肉具有重要作用。

譯自：Sreedevi C， Hafeez M， Kumar PA，et al.PCR test for detecting Taenia solium cysticercosis in pig carcasses.Trop Anim Health Prod，2011 Jun 3.[Epub ahead of print]

中國南方典型豬瘟病毒遺傳多樣性和豬瘟病毒毒株正選擇分析

典型豬瘟病毒（CSFV）在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致高度傳染性疾病流行，給生豬產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前一直缺乏中國南方地區(qū)CSFV的準(zhǔn)確的基因分型。這項(xiàng)研究對2008～2010年分離到的中國南方地區(qū)家豬不同毒株的E2基因進(jìn)行分析（14株豬瘟病毒）。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，所有的14株豬瘟病毒的基因聚在遺傳亞群1.1。在中國其他地區(qū)分離的豬瘟病毒與其不同，主要為基因2群。

此外，對作用于豬瘟病毒E（rns）和E2囊膜蛋白基因的正選擇壓力進(jìn)行了評估，逐一分析了dN/dS率以確定特殊的密碼子多元化改變。

盡管沒有明顯證據(jù)顯示觀察到E（rns）基因的正選擇，但E2基因的兩個(gè)正選擇在編碼49和72氨基酸殘基位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)。我們的研究結(jié)果顯示，中國南部的一些地區(qū)目前主要流行1.1亞群豬瘟病毒，與中國豬瘟病毒C-株疫苗毒株相差較大。

此外，囊膜蛋白E2基因經(jīng)過了陽性選擇，兩個(gè)陽性選擇位點(diǎn)被確定。了解分子流行病學(xué)和這些正選擇氨基酸位點(diǎn)的作用是非常重要的，可以幫助預(yù)測豬瘟病毒的毒力變化，促進(jìn)疫苗開發(fā)和疾病控制。

譯自：Shen H， Pei J， Bai J， Zhao M，et al.Genetic diversity and positive selection analysis of classical swine fever virus isolates in south China.Virus Genes.2011 Jun 4.[Epub ahead of print]

桿狀病毒展示豬繁殖與呼吸綜合征病毒的GP3蛋白的免疫原性

豬繁殖與呼吸綜合征病毒 （PRRSV）是世界范圍內(nèi)最為重要的豬病病原。PRRSV較小的包膜蛋白GP3在清除病毒感染和保護(hù)動物方面起著重要的作用。在這個(gè)研究中，一個(gè)重組的桿狀病毒 （BacSC-GP3）被構(gòu)建，表達(dá)His6-tagged GP3，這個(gè)蛋白位于其包膜蛋白gp64的跨膜 （TM）和細(xì)胞質(zhì) （CT）域，免疫原性在仔豬和小鼠中進(jìn)行評估。

His6-tagged GP3蛋白成功的展示在病毒粒子的表面，而且此病毒能感染Sf-9細(xì)胞。用BacSC-GP3免疫動物，體液免疫反應(yīng)和淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)高于商業(yè)滅活苗 （對仔豬免疫，效果比商業(yè)滅活苗稍微好一些；如果對小鼠免疫，則免疫效果顯著高于商業(yè)滅活苗）。這是首次研究GP3-桿狀病毒免疫原性，這為研發(fā)新的PRRSV疫苗提供新的策略。

譯自：Wang ZS,Xu XG,Liu HJ,et al.Immunogenicity of the envelope GP3 protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus displayed on baculovirus.Acta Virol， 2011， 55（2）:139-46.

日糧中鈣磷水平、植酸酶的添加對斷奶仔豬生長性能、骨的性狀、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及礦物質(zhì)、氮的利用率和生長肥育階段骨性狀的影響

通過兩個(gè)試驗(yàn) （試驗(yàn)1和試驗(yàn)2）在日糧中添加鈣和磷以研究日糧中磷水平以及植酸酶的添加對11～30 kg體重?cái)嗄套胸i生長性能、全消化道營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及鈣、磷和氮的利用率的影響和生長育肥階段 （體重：30～100 kg）骨性狀的影響。

試驗(yàn)1采用3×2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì) （總磷的含量為4.5 g/kg、5.5 g/kg和 6.4 g/kg，植酸酶的活性為 0 IU/kg和 500 IU/kg），選擇96頭斷奶仔豬 （n=8）用于研究磷和植酸酶對仔豬生長性能、骨性狀以及糞便性狀的影響。由于試驗(yàn)日糧中磷的濃度逐漸變化，為保證日糧中的鈣磷比為1.6:1，在不同磷水平的日糧中同時(shí)調(diào)整鈣的水平。30 kg體重時(shí)采集48頭豬的骨樣品 （每個(gè)處理8頭）。另外 48頭豬的飼料變更為生長育肥豬日糧 ，同時(shí)保證日糧的鈣磷水平，直至體重達(dá)到100 kg再采樣。

試驗(yàn)2選擇24頭公豬 （n=4）試驗(yàn)日糧的設(shè)計(jì)同試驗(yàn)1，測定鈣、磷和氮的利用率。仔豬斷奶后轉(zhuǎn)入代謝籠內(nèi)進(jìn)行單獨(dú)飼養(yǎng)，分別收集糞和尿。

試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加植酸酶的仔豬較未添加植酸酶的仔豬具有較高的飼料轉(zhuǎn)化率 （P＜0.05）。30kg體重時(shí)，日糧中高磷含量組仔豬骨中灰分含量較低、中磷含量組仔豬的骨中灰分含量高 （P＜0.05）。體重100kg時(shí)，日糧中添加植酸酶的豬 （P＜0.001）以及日糧中含有中、高水平磷的實(shí)驗(yàn)組豬（P＜0.05）骨中灰分含量高于日糧中沒有添加植酸酶的豬以及日糧中只含有低水平磷的豬。試驗(yàn)2中，添加植酸酶的豬較未添加植酸酶的豬具有較高的磷消化率以及磷沉積量 （P＜0.001）。

總之，斷奶后日糧中總磷的水平高于5.5 g/kg對商品豬的生產(chǎn)性能沒有特別的益處。但是斷奶后日糧中總磷為6.4 g/kg會使豬100 kg體重時(shí)骨中礦物質(zhì)含量積聚達(dá)到最高。

譯自：Varley PF,Callan JJ,O’Doherty JV.Effect of dietary phosphorus and calcium level and phytase addition on performance,bone parameters,apparent nutrient digestibility,mineral and nitrogen utilization of weaner pigs and the subsequent effect on finisher pig bone parameters.Animal Feed Science and Technology， 2011 （165）:201-209.