藏藥大籽獐牙菜的化學(xué)成分研究

熊成文，林鵬程

（1.青海民族大學(xué)，青海 西寧 810006；2.青海省藥品檢驗(yàn)所，青海 西寧 810016）

藏藥大籽獐牙菜的化學(xué)成分研究

熊成文1，2，林鵬程1

（1.青海民族大學(xué)，青海 西寧 810006；2.青海省藥品檢驗(yàn)所，青海 西寧 810016）

目的 研究藏藥大籽獐牙菜Swertia macrosperma C.B.Clark全草的化學(xué)成分。方法 運(yùn)用硅膠柱層析和高效液相色譜法進(jìn)行化學(xué)成分的分離純化，通過理化常數(shù)和波譜分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果 從大籽獐牙菜的80%乙醇提取物中分離得到9個(gè)化合物，分別鑒定為芒果苷(Ⅰ)、1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮（Ⅱ）、1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮（Ⅲ）、1，7-二羥基-3，8-二甲氧基口山酮（Ⅳ）、1，5，8-三羥基-3-甲氧基口山酮（Ⅴ）、1，7，8-三羥基-3-甲氧基口山酮（Ⅵ）、獐牙菜苦苷（Ⅶ）、龍膽苦苷（Ⅷ）、獐牙菜苷（Ⅸ）。結(jié)論 上述化合物Ⅳ、Ⅵ～Ⅸ為首次從大籽獐牙菜中分離得到。

大籽獐牙菜；口山酮；環(huán)烯醚萜苷

大籽獐牙菜（Swertia macrosperma C.B.Clark）系龍膽科（Gentianaceae）獐牙菜屬植物，主產(chǎn)于西藏、貴州、云南等省，資源豐富，為藏族民間常用的一種草藥，以全草入藥，具有清熱解毒和利膽退黃的功效，主要用于治療各種急慢性肝炎、慢性膽囊炎等癥。該屬植物的主要化學(xué)成分為口山酮類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、三萜類化合物。我們運(yùn)用硅膠柱色譜和制備高效液相色譜分離技術(shù)對(duì)大籽獐牙菜的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，分離得到9個(gè)化合物：分別為芒果苷 (Ⅰ)、1-羥基-3,7,8-三甲氧基口山酮（Ⅱ）、1,8-二羥基-3,7二甲氧基口山酮（Ⅲ）、1,7-二羥基-3,8-二甲氧基口山酮（Ⅳ）、1,5,8-三羥基-3-甲氧基口山酮（Ⅴ）、1,7,8-三羥基-3-甲氧基口山酮（Ⅵ）、 獐牙菜苦苷（Ⅶ）、龍膽苦苷（Ⅷ）、獐牙菜苷（Ⅸ）。其中化合物Ⅳ、Ⅵ～Ⅸ為首次從大籽獐牙菜中分離得到。

1 儀器與試藥

大籽獐牙菜購自西藏，經(jīng)青海省藥品檢驗(yàn)所駱桂法副主任藥師鑒定為Swertia macrosperma C.B.Clark的干燥全草。Mettler FP5熔點(diǎn)儀；島津UV-2401型紫外可見分光光度計(jì)；島津IR Prestige-21型傅里葉變換紅外分光光度計(jì)（KBr壓片）；A-vanceⅡ 400 Bruker Biospin核磁共振波譜儀；Waters TQ Detector型質(zhì)譜儀；柱色譜和薄層色譜用硅膠均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；其余試劑均為分析純。

2 提取分離

大籽獐牙菜干燥全草5.5 kg，粉碎后用80%乙醇回流提取3次，每次4 h，提取液合并后減壓回收至無醇味，得浸膏1 080 g。浸膏用水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部分120 g、乙酸乙酯部分104 g、正丁醇部分112 g。取乙酸乙酯部分90g經(jīng)硅膠柱層析，以不同配比的石油醚-乙酸乙酯、氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫。石油醚-乙酸乙酯（20∶1）洗脫部分，經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，得化合物Ⅱ（50 mg），Ⅲ（10 mg），Ⅳ（10 mg），Ⅵ（15 mg）。石油醚-乙酸乙酯（10∶1）洗脫部分，經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，得化合物Ⅴ（40 mg）。氯仿-甲醇（10∶1）洗脫部分，經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，得化合物Ⅰ（10 mg）。取正丁醇部分100 g用聚酰胺柱層析進(jìn)行分離，依次用水和10%、30%、50%、70%、90%乙醇洗脫，水洗脫部分用制備高效液相色譜分離，得化合物Ⅶ～Ⅸ（20、40、15 mg）。

3 結(jié)果

化合物Ⅰ：淡黃色柱狀結(jié)晶（甲醇），mp272～273℃。 UVλmax(MeOH)nm：240，258，316，365。（+）ESI-MS m/z：423[M+H]+。 IR(KBr)cm-1：3370（brs，OH），1650（C=O），1625，1525，1500（Φ），與芒果苷對(duì)照品IR圖譜一致。與芒果苷對(duì)照品混合后，熔點(diǎn)不下降。故化合物Ⅰ鑒定為芒果苷。

化合物Ⅱ：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp159～160 ℃。 UVλmax(MeOH)nm:238，256，312，372。（+）ESI-MS m/z：303[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：13.205(1H，s，C1-OH)，7.604（1H，d，J=8.4 Hz，C6-H），7.326（1H，d，J=8.4 Hz，C5-H）,6.509（1H，s，C4-H），6.324（1H，s，C2-H），3.869(6H，s，C7，C8-OCH3)，3.824（3H，s，C3-OCH3）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：163.4(C-1)，97.3(C-2)，166.7(C-3)，92.4(C-4)，157.2(C-4a)，150.5(C-4b)，113.2(C-5)，121.6(C-6)，148.2(C-7)，149.6(C-8)，115.4(C-8a)，103.7(C-8b)，181.0(C-9)，56.5(3-OMe)，57.2(7-OMe)，61.5(8-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[2]的1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮一致。

化合物Ⅲ：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp189～191 ℃。 UVλmax(MeOH)nm:238，263，328。（+）ESIMS m/z：289[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：11.840(2H，s，C1，C8-OH)，7.520（1H，d，J=8.8 Hz，C6-H），6.997（1H，d，J=8.8 Hz，C5-H），6.629（1H，s，C4-H），6.418（1H，s，C2-H），3.898（3H，s，C7-OCH3），3.845（3H，s，C3-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[3]的1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮一致。

化合物Ⅳ：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp158～159℃。UVλmax(MeOH)nm:232，254，277，332。（+）ESIMS m/z：289[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.815(1H，s，C1-OH)，11.241(1H，s，C7-OH)，7.467（1H，d，J=8.8 Hz，C6-H），6.733（1H，d，J=8.8 Hz，C5-H），6.682（1H，s，C4-H），6.415（1H，s，C2-H），3.900（3H，s，C8-OCH3），3.886（3H，s，C3-OCH3）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：162.5(C-1)，98.3(C-2)，167.7(C-3)，93.5(C-4)，157.9(C-4a)，145.1(C-4b)，109.6(C-5)，121.4(C-6)，153.3(C-7)，140.1(C-8)，108.1(C-8a)，102.8(C-8b)，184.3(C-9)，56.8(3-OMe)。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[4]的1，7-二羥基-3，8-二甲氧基口山酮一致。

化合物Ⅴ：黃色針狀結(jié)晶 （甲醇），mp258～260 ℃。 UVλmax(MeOH)nm:253，278，332。（+）ESIMS m/z：275[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：11.925(1H，s，C1-OH)，11.092(1H，s，C8-OH)，9.748(1H，s，C5-OH)，7.259（1H，d，J=8.8 Hz，C6-H），6.671（1H，d，J=8.8 Hz，C7-H），6.638（1H，s，C4-H），6.426（1H，s，C2-H），3.907（3H，s，C3-OCH3）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：162.4(C-1)，98.0(C-2)，167.6(C-3)，93.5(C-4)，157.9(C-4a)，143.9(C-4b)，137.8(C-5)，124.4(C-6)，110.0(C-7)，152.3(C-8)，108.0(C-8a)，102.7(C-8b)，184.6(C-9)，56.8(3-OMe)。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[5]的1，5，8-三羥基-3-甲氧基口山酮一致。

化合物Ⅵ：黃色針狀結(jié)晶 （甲醇），mp202～204 ℃。 UVλmax(MeOH)nm:238，267，325。（+）ESIMS m/z：275[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：11.866(1H，s，C1-OH)，11.616(1H，s，C8-OH)，9.376(1H，s，C7-OH)，7.289（1H，s，C6-H），6.888（1H，J=8.8 Hz，C5-H），6.572（1H，s，C4-H），6.366（1H，s，C2-H），3.879（3H，s，C3-OCH3）；13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ：162.4(C-1)，97.6(C-2)，167.5(C-3)，93.2(C-4)，158.2(C-4a)，148.5(C-4b)，106.5(C-5)，124.7(C-6)，141.0(C-7)，147.6(C-8)，107.9(C-8a)，102.2(C-8b)，184.7(C-9)，56.7(3-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[6]的1，7，8-三羥基-3-甲氧基口山酮一致。

化合物Ⅶ：白色無定形粉末，mp102～104℃。U-Vλmax(MeOH)nm:238.7。（+）ESI-MS m/z：375[M+H]+,397[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.47(1H，s，C3-H)，5.91（1H，s，C1-H），5.02-5.20（3H，m，C8,10-H），5.28（1H，d，J=9.6 Hz，C1′-H），2.96（1H，d，J=10.6 Hz，C9-H）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6) δ：96.4(C-1)，152.3(C-3)，109.7(C-4)，63.9(C-5)，33.0(C-6)，64.3(C-7)，132.8(C-8)，49.9(C-9)，120.9(C-10)，165.1(C-11)，98.9(C-1′)，74.2(C-2′)，77.8(C-3′)，71.3(C-4′)，79.0(C-5′)，62.5(C-6′)。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[7]的獐牙菜苦苷一致。

化合物Ⅷ：白色無定形粉末，mp122～124℃。UVλmax(MeOH)nm:243.0，271.0。（+）ESI-MS m/z：379[M+Na]+，357[M+H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.41(1H，s，C3-H)，5.70（1H，m，C6-H），5.62（1H，m，C8-H），5.57（1H，d，J=3.0 Hz，C1-H），5.22（2H，m，C10-H），5.00（2H，m，C7-H），4.48（1H，d，J=7.6 Hz，C1′-H），2.96（1H，m，C9-H）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6) δ：97.1(C-1)，149.2(C-3)，103.6(C-4)，125.0(C-5)，116.1(C-6)，69.5(C-7)，134.3(C-8)，44.4(C-9)，117.8(C-10)，162.7(C-11)，98.8(C-1′)，72.9(C-2′)，76.4(C-3′)，70.1(C-4′)，76.7(C-5′)，61.4(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[8]的龍膽苦苷一致。

化合物Ⅸ：白色無定形粉末，mp100～102℃。UVλmax(MeOH)nm:242.8。（+）ESI-MS m/z：381[M+Na]+，359[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.49(1H，s，C3-H)，5.49（1H，d，J=1.6 Hz，C1-H），5.23（2H，m，C10-H），4.62（1H，d，J=7.6 Hz，C1′-H），2.69（1H，m，C9-H），1.68（2H，m，C6-H）；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6) δ：95.6(C-1)，151.4(C-3)，104.9(C-4)，26.7(C-5)，24.4(C-6)，67.7(C-7)，133.3(C-8)，41.5(C-9)，120.2(C-10)，164.8(C-11)，98.3(C-1′)，73.2(C-2′)，76.8(C-3′)，70.1(C-4′)，77.5(C-5′)，61.2(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[9]的獐牙菜苷一致。

4 討論

大籽獐牙菜主要含有口山酮及其苷類、環(huán)烯醚萜苷類化合物。其中口山酮類化合物在獐牙菜屬植物中分布廣泛，具有多種生理活性，尤其在治療肝炎、降血糖和抗氧化等方面的活性，引起了很多學(xué)者的重視， 其中1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮具有較強(qiáng)的抑菌活性[10]，可作為治療細(xì)菌感染的藥物；1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮、1，5，8-三羥基-3-甲氧基口山酮、1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮具有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用，能有效抑制MDA的產(chǎn)生，減少大鼠紅細(xì)胞氧化性溶血，減輕肝線粒體膨脹程度[11]，而腫瘤、炎癥、腦缺血等均與氧自由基有密切關(guān)系；芒果苷對(duì)大鼠和兔子有興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用[12]。而環(huán)烯醚萜苷類化合物也具有保肝、抗膽堿和護(hù)膚換發(fā)等藥理作用，其中獐牙菜苦苷具有助消化、鎮(zhèn)痛等作用[13]，民間有使用獐牙菜治療小兒腹痛，同時(shí)獐牙菜苦苷經(jīng)皮膚吸收后的代謝產(chǎn)物可擴(kuò)張毛細(xì)血管，提高皮膚的生化功能，在日本用于治療脫發(fā)癥和皮膚美容劑[14]，龍膽苦苷具有保肝、利膽、抗炎的生物活性，獐牙菜苷能有效地保護(hù)肝細(xì)胞，防止或減輕肝粒細(xì)胞損傷，促進(jìn)受損細(xì)胞修復(fù)[15]，在治療甲、乙型肝炎方面取得了較好的療效。對(duì)大籽獐牙菜的化學(xué)成分研究為以后獐牙菜屬藥用植物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志[M].第62卷.北京:科學(xué)出版社,1988:397-399.

[2]丁經(jīng)業(yè),樊淑芬.抱莖獐牙菜口山酮成分分離與鑒定[J].高原生物藥集刊,1982,（1）:267-270.

[3]周 青,陳家春,劉焱文.貴州獐牙菜化學(xué)成分研究[J].中藥材,2004,27(12):908-910.

[4]徐康平,李福雙,劉建鋒，等.顯脈獐牙菜化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志,2008,43(21):1 612-1 615.

[5]卞慶亞，侯翠英，陳建民.抱萼獐牙菜的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1998,10(1)：1-5.

[6]紀(jì)蘭菊,丁經(jīng)業(yè),樊淑芬,等.細(xì)萼扁蕾的化學(xué)成分研究[J].植物學(xué)報(bào),1992,34(3):203-207.

[7]孔德云,蔣 毅，姚 英，等.伸梗獐牙菜的苷類成分[J].中草藥,1995,26(1):7-10.

[8]張聿梅，許旭東，侯翠英.毛獐牙菜化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志,1996,21(2):103-105.

[9]蔡 樂,王 曙,李 濤,等.印度獐牙菜的化學(xué)成分研究[J].華西藥學(xué)雜志,2006,21(2)111-113.

[10]曹長年,米 琴,屠蘭英,等.川西獐牙菜有效成分的分離及其抑茵活性測(cè)定[J].青海大學(xué)學(xué)報(bào),2004,22(1):16-18.

[11]張媛媛.藏藥大籽獐牙菜化學(xué)成分及生物活性研究[D].西南交通大學(xué),2006.

[12]郭愛華.龍膽科獐牙菜屬藥用植物化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,1(6):57-59.

[13]雷偉亞，史栓桃，余恩暢.小兒腹痛草的藥理作用——I.獐牙菜苦苷的解痙作用[J].云南醫(yī)藥,1982,1(2):92-95.

[14]Sedawy A I,Shu Y Z,Hattori M,et al.Metabdism of swertiamarin from swertia japonioa by human intestinal bacterial[J].Planta medica，1989,55(2):147-150.

[15]胡若琪,饒嫻宜,盧明義,等.獐牙菜苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷大鼠血漿cAMP含量的影響[J].中藥藥理與臨床,1989,5(4):31-32.

（本文編輯 楊 瑛）

Study on compounds in Swertia macrosperma C.B.Clark

XIONG Cheng-wen,LIN Peng-cheng
(Nations University of Qinghai,Xining,Qinghai 810006,China)

Objective To determine the compounds in Swertia macrosperma C.B.Clark.Methods The compounds were isolated by silica gel column chromatography and HPLC,and their structures were elucidated by spectral analysis.Results Nine compounds were isolated from 80%ethanol extract and their structures were elucidated as mangiferin(Ⅰ),1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone(Ⅱ),1,8-dihydroxy-3,7-dimethoxyxanthone(Ⅲ),1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone(Ⅳ),1,5,8-trihydroxy-3-methoxyxanthone(Ⅴ),1,7,8-trihydroxy-3-methoxyxanthone(Ⅵ),swertiamarin（Ⅶ）,gentipicroside（Ⅷ）,sweroside（Ⅸ）.Conclusion Compounds Ⅳand Ⅵ～Ⅸ were isolated from Swertia macrosperma C.B.Clark in first time.

Swertia macrosperma C.B.Clark;xanthone;secoiridoid glycoside

R284.1

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2011.05.011.034.03

2011-03-08

熊成文（1980-），男，青海西寧人，主管藥師，碩士研究生，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>