絞股藍的繁殖特性和育苗技術

彭小列，彭秀建，張顯卓，劉世彪

（1.吉首大學生物資源與環(huán)境科學學院，湖南 吉首 416000；2.湖南湘泉制藥有限公司，湖南 吉首 416000）

絞股藍（Gynostemma pentaphyllum）為葫蘆科絞股藍屬草質藤本植物，又名五葉參、七葉參、七葉膽、小苦草、遍地生根等，主要分布于我國秦嶺南坡、長江流域及其以南廣大地區(qū)。絞股藍作為普通中藥可用于消炎解毒、止咳祛痰、治療慢性氣管炎[1]。自20世紀70年代以來，從絞股藍中分離出84種絞股藍皂苷，全部具有達瑪烷型的基本結構，其中6種與人參皂苷結構完全相同，其余大部分種類的水解次級苷與人參皂苷或其次級苷是同一物質[2]，因而絞股藍被稱為“南方人參”。絞股藍皂苷在抗疲勞、抗衰老、改善心血管和神經系統(tǒng)功能等多方面具有重要生理功效，臨床上還用于治療多種惡性腫瘤，故已成為重要的藥食兩用資源植物。近年來，由于野生絞股藍資源的減少，人工栽培的絞股藍已成為絞股藍加工利用的主要原料。絞股藍種苗是影響絞股藍人工栽培的首要因素，因此，絞股藍的繁殖特性及育苗技術成為了科學工作者研究的重點。

1 絞股藍的無性繁殖

絞股藍的無性繁殖即通過植株營養(yǎng)器官的增殖而增加個體數(shù)量的繁殖方式，包括自然營養(yǎng)繁殖和人工營養(yǎng)繁殖兩種類型。

1.1 自然營養(yǎng)繁殖

絞股藍在自然條件下以營養(yǎng)繁殖為主。絞股藍的莖分為地上莖和地下莖，其匍匐于地面上的莖節(jié)可生出不定根伸入土層，節(jié)上長出新芽，成為植株。絞股藍粗大的地下莖屬于根狀莖，莖上具有明顯的節(jié)和節(jié)間，節(jié)上有鱗片葉，葉脫落后留有葉痕，葉腋內有腋芽，前端有頂芽。這些腋芽和頂芽伸出地面后都能發(fā)育成新的植株。在華中、西安等地的冬季來臨前，絞股藍藤蔓從空中下垂，鉆入土中，其前端的節(jié)間縮短膨大，成為珠芽，珠芽可能形成多枝，在土中越冬，地上的藤蔓則枯死。珠芽作為獨立的繁殖群體，來年可萌發(fā)成多株絞股藍。但在湖南一帶，絞股藍地上藤蔓很難形成珠芽，甚至在冬季也不會枯死。絞股藍地下莖出苗和生長快慢主要受溫度的影響，20～25℃為絞股藍快速生長的最適宜溫度。

1.2 人工營養(yǎng)繁殖

自然生長的絞股藍雌雄比例約為1∶20，雌株較少，生產中要大量采種較為困難。因此，絞股藍種苗的生產主要采用人工營養(yǎng)繁殖。生產上常采用地下莖分株、地上莖扦插和葉的扦插繁殖以及壓條繁殖來進行絞股藍育苗。

1.2.1 地下莖分株 又稱根莖繁殖或埋根育苗。在春季3～4月或秋季9～10月，挖出絞股藍地下莖，將叢生的莖枝分開成單枝，或單枝剪成每段含有2～3節(jié)的小段。苗床按行株距50 cm×30 cm開穴，穴下施少許復合肥作底肥，蓋上5 cm厚的松土，植入絞股藍地下莖段，覆上細土即可。若土壤較干旱時要及時澆水保濕。根莖的種植密度約5000株/667m2，種苗密度約 50 kg/667m2。

1.2.2 扦插繁殖 扦插育苗是絞股藍繁殖的重要手段，它既簡單易行又能保持母本的優(yōu)良性狀。絞股藍扦插取材部位以地上莖（藤蔓）的基部和中部為佳，扦插基質以河沙最好，也可以在大田直接扦插，搭棚遮蔭，4～6月份扦插10 d后可普遍生根，成活率可達90%以上。扦插后3～5 d在插條莖節(jié)處即產生不定根，第7天不定根形成一級側根，第10天形成二級側根。插條莖節(jié)不定根形成比基部切口處節(jié)間不定根形成早2 d，但切口處形成的不定根數(shù)量較多。10 d后地下腋芽開始萌動，20 d后由腋芽萌發(fā)形成的新梢陸續(xù)鉆出地面。絞股藍扦插產生的新生根為不定根，生根過程可歸納為三個結構變化階段：部分髓射線細胞分裂活動→根原基的產生→不定根的形成[3]。用生長素或萘乙酸處理絞股藍莖或地下嫩莖，能有效地促進出苗和生根。吳永朋等[4]報道，在全光噴霧條件下，吲哚乙酸（IAA）處理的絞股藍插穗的平均發(fā)根數(shù)和最長根長都極顯著高于吲哚丁酸（IBA）和萘乙酸（NAA）及無激素處理組。

葉的扦插繁殖[5]則在9月中下旬進行，從絞股藍植株上剪取健壯的復葉，連同葉柄及其生根莖節(jié)一同剪下，帶有有完好的腋芽。將莖節(jié)插入疏松肥沃、排水良好的苗床，葉柄入土深1 cm，行株距12 cm×20 cm，插后將土壤稍壓實，澆透水。當氣溫降至12℃以下時，應在苗床上覆蓋薄膜，來年春天視氣溫回升情況揭去薄膜，按常規(guī)技術管理。葉的扦插可以有效地增加絞股藍的繁殖系數(shù)。

1.2.3 壓條繁殖 在生長季節(jié)將絞股藍的藤蔓平放在栽培地的土畦行間，用土壓緊，每節(jié)都可生出新芽和新根，約40 d左右，當新枝梢達到20 cm的定植標準時，即可切割另植[6]。

2 絞股藍的有性繁殖

有性繁殖即用種子來進行繁殖。絞股藍為雌雄異株植物，栽培當年即能開花結實，用種子進行有性繁殖是絞股藍育苗的又一重要方法。絞股藍的漿果為假果，大如豌豆，果實內有2～3粒種子，種子側面有縱溝，表面有光滑型和具紋飾型兩個類型?？捎?1～12月，收集成熟絞股藍果實或帶果枝蔓，晾干，于通風干燥處貯藏。翌年3～4月地溫10℃左右時，于播種前搓去果皮，選黑褐色的成熟種子，在30℃溫水中浸泡過夜，撈出晾干水分即可播種。可在整平耙細的苗床上條播或穴播。條播按行距30～40 cm橫向開淺溝，溝深5 cm，寬10 cm。將種子與5倍的細砂混合后均勻撒入溝內，覆細肥土，淋透水即可。當幼苗出現(xiàn)4～5片真葉時，即可移栽。穴播按行株距60 cm×30 cm挖穴，穴深2 cm，每穴播種5～8粒，覆薄細肥土。絞股藍播種量約為1 kg/667m2，種子播后約20 d左右出苗。移植后的大田栽植密度為6000～8000株/667m2，1 m寬的畦面上開2行栽植溝，深、寬各為10～15 cm，行株距30 cm×（10～15）cm。

絞股藍種子的發(fā)芽率受種源和貯藏時間影響，種子應在低溫干燥的環(huán)境條件下保存，貯存超過一年種子失去活性。有報道稱絞股藍種子中含有抑制物質，具休眠現(xiàn)象，故種子萌發(fā)率較低[7]。但前一年的種子在第二年后播種，即使不經任何處理，其萌發(fā)率也可達到90%以上。

3 組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)具有繁殖種苗周期短、繁殖速度快和繁殖系數(shù)高等優(yōu)點，可在短期內獲得大量種苗，且能保持種苗的遺傳穩(wěn)定性，是科學研究和生產栽培中的重要手段。絞股藍組織培養(yǎng)的程序主要包括“外植體選擇→消毒→接種→愈傷組織及芽的誘導→繼代培養(yǎng)及叢生芽的增殖→生根誘導→煉苗→移栽”等步驟。絞股藍組織培養(yǎng)通常是在MS培養(yǎng)基的基礎上，加上適量的6-BA、NAA、IAA培養(yǎng)基作為芽誘導、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度24～26℃，光照10～12 h，光照強度約1500 lx。試管苗通過煉苗后移栽極易成活。

3.1 以營養(yǎng)器官為外植體的組織培養(yǎng)

莖尖的組織培養(yǎng)是取絞股藍莖尖，接種于添加不同濃度6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基中，以MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的培養(yǎng)基最為適宜。培養(yǎng)25 d后莖尖長成叢生芽。當外植體莖尖長出約20個芽苗時，分割芽苗進行繼代培養(yǎng)增殖，接種在MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的增殖培養(yǎng)基中，每隔20 d天繼代培養(yǎng)1次，可增多次。當芽苗伸長到2 cm左右時，可分離出無根芽苗培養(yǎng)于不含激素的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，約8 d幼苗形成根，到20 d左右即形成完整的植株[8]。

莖段的組織培養(yǎng)是取絞股藍的有節(jié)莖段為外植體進行組織培養(yǎng)。其適宜的芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L，繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0 mg/L。在此條件下，絞股藍的誘導增殖、繼代培養(yǎng)、生根及移植成活都較高[9-10]。

3.2 以花芽為外植體的組織培養(yǎng)

與上述方法相比，用花芽作為外植體進行組織培養(yǎng)是解決絞股藍種苗的另一途徑?；ㄑ颗囵B(yǎng)的誘導分化率高，生長快，污染率低，且操作簡便，得到的幼苗整齊一致。其主要方法是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA和NAA。愈傷組織及芽的誘導的最適培養(yǎng)基為MS+1.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，花芽接種于芽誘導培養(yǎng)基16 d后，在外植體周圍即能產生叢生芽。繼代培養(yǎng)及叢生芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA。芽苗培養(yǎng)12 d后從基部長出叢生芽。每個芽苗可分化出1500多個芽，平均21 d增殖1次。誘導生根的最適培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L NAA，增殖芽轉入10 d后基部逐漸長出根，20 d即可開瓶煉苗[11]。

此外，通過對絞股藍的細胞培養(yǎng)也能獲得再生植物。細胞培養(yǎng)的細胞來源于絞股藍幼莖組織培養(yǎng)所產生的愈傷組織，經液體懸浮培養(yǎng)，原生體的游離和培養(yǎng)，再轉移到固體培養(yǎng)基上，最后培養(yǎng)分化成完整的植株[12]。由于絞股藍細胞培養(yǎng)的過程復雜，成本較高，在生產上尚無規(guī)模性的應用。

[1]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典（上冊）（第一版）[M].上海：上海人民出版社，1977.

[2]郭文源，王萬賢.絞股藍栽培與產品開發(fā)[M].成都：電子科技大學出版社，1993.

[3]林 如，曹玉芳，胡正海.絞股藍扦插生根的解剖學研究[J].福建農林大學學報（自然科學版），2003，32（4）：464-467.

[4]吳永朋，肖婭萍，原雅玲，等.不同處理對絞股藍生根的影響[J].陜西林業(yè)科技，2009，（5）：1-4.

[5]黃天芳.秋季扦葉繁殖絞股藍[J].中草藥，1995，26（11）：598-599.

[6]吳成妹.絞股藍的育苗技術[J].中國林業(yè)，2003，1（A）：43.

[7]黃天芳，田春元.磁處理對絞股藍種子出土萌發(fā)的影響[J].孝感師專學報（自然版），1998，18（4）：52-53.

[8]劉松青，武成榮.絞股藍莖尖組織培養(yǎng)和植株再生研究[J].中國野生植物資源，2000，19（6）：60-61.

[9]劉曉燕.絞股藍的莖段培養(yǎng)及試管繁殖[J].耕作與栽培，2000，（1）：46-47.

[10]吳建生.絞股藍機械組成與其活性成分的浸出動態(tài)分析[J].廣東農業(yè)科學，2011，38（2）：96-98.

[11]朱素琴，謝煥松，曹云英，等.絞股藍快速繁殖的新方法[J].種子，2004，23（11）：96.

[12]張航寧，吳琴生，劉大鈞.絞股藍懸浮細胞的原生質體再生植株[J].生物工程學報，1995，11（3）：285-287.