2010年廣東沿海地區不同養殖模式下凡納濱對蝦攜帶WSSV和IHHNV的調查

張家松 ，李卓佳 ，陳義平 ，文國樑 ，羅 亮 ，王奕玲 ，冷加華 ，曹煜成

（1. 中國水產科學研究院南海水產研究所，廣東廣州510300；2. 中國動物衛生與流行病學中心，山東青島266032）

WSSV自從1993年在日本首次報道以來，該病已經成為危害世界對蝦養殖業最為嚴重的一種病毒性疾病。WSSV對養殖對蝦是一種易傳染、高致死性的病毒，養殖條件下可使感染對蝦在3~10天內死亡，死亡率高達80~100%。感染對蝦的主要癥狀是活力差、少食，瀕死者體色變紅，頭胸甲往往出現直徑0.5 mm~2 mm左右的白色斑點。IHHNV可引起凡納濱對蝦出現慢性“矮小殘缺綜合癥”，患病對蝦生長緩慢，表皮畸形，經濟損失可達50%。臨床上這2種病原混合感染現象很常見，并且感染了WSSV和IHHNV的對蝦可終身帶毒，通過垂直傳播把病毒傳給下一代和水平傳播傳給其他種群[1]。

本次調查，對廣東沿海地區不同類型養殖池塘和養殖技術條件下的對蝦進行采樣檢測，以了解養殖模式和養殖技術對WSSV和IHHNV流行感染狀況的影響，希望為疾病的防治提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 采樣

2010年4月至12月間，隨機選取廣東沿海地區高位池精養、土池半精養和灘涂混養三種養殖模式中的17口池塘進行了采樣，其中7口池塘在春夏和冬季的不同養殖季節進行了采樣。每個池塘采樣15尾，每5尾合并為一個樣。

1.2 DNA提取

樣品DNA提取按照海洋動物基因組提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）說明書進行，DNA樣品-20 ℃保存備用。

1.3 WSSV感染的分子方法診斷

PCR采用楊衛帆[2]設計的套式PCR引物，可以同時檢測WSSV和IHHNV，外引物擴增片段分別為988 bp和860 bp，內引物擴增片段分別為461 bp和344 bp。一步PCR擴增產物為陰性的樣品，再采用兩步PCR檢測。

2 結果和討論

不同養殖模式下凡納濱對蝦攜帶WSSV和IHHNV的檢測結果如表1。

高位池精養池塘對蝦樣本采自廣東省的汕尾市（1~3號池塘和6、7號池塘）和電白縣（4、5號池塘）。春夏季節高位池養殖情況良好，檢測均為WSSV兩步PCR陽性，其中2號和4號池塘IHHNV檢測一步PCR陽性，偶爾出現對蝦死亡現象。但是到了2010年秋冬季節，由于寒流來的早和突然，眾多養殖戶突擊加蓋塑料膜，未按操作程序工作，直接將塑料膜覆蓋養殖池，導致冬棚內室溫和水溫急升，水溫從21~23℃驟升至26~28℃，達到WSSV復制增殖的最佳溫度，致使眾多養殖池塘暴發WSS（1~3號、7號池塘）。而按照操作程序工作，逐步加蓋塑料膜的池塘，使得室溫和水溫逐步上升的冬棚池塘則沒有發生WSS（4、5、6號池塘）。秋冬季節各池塘對蝦IHHNV檢測均為兩步PCR陽性，攜帶病毒量低。

表1 2010年4~12月對廣東省不同養殖模式下凡納濱對蝦攜帶WSSV和IHHNV的檢測結果

土池養殖對蝦樣本采自廣東省電白縣（8、9、12、13號池塘）、珠海市（10、11號池塘）、汕尾市（14、15號池塘）。春夏季，采用水質生態調控技術的土池，雖然對蝦樣本WSSV和IHHNV攜帶率100%，但是均為兩步PCR陽性，攜帶病毒量低，未出現對蝦死亡。但是到了冬季，也是因為寒流來的早，加蓋塑料膜時未按照程序進行，導致冬棚內室溫和水溫急升，致使眾多養殖池塘暴發WSS（8~10號池塘）。未采用水質生態調控技術的土池所采對蝦，檢測均為一步PCR陽性，且有池塘出現因WSSV感染的死蝦（12~15號池塘）。土池各池塘不同季節對蝦IHHNV的檢測結果均為兩步PCR陽性。

灘涂混養池塘（16和17號池塘）對蝦樣本采自廣東省汕尾市，為凡納濱對蝦和卵形鯧鲹、鋸緣青蟹混養池塘，兩個池塘面積分別是14.7 hm2和24.7 hm2，每天隨潮差換水，日換水量在20%以上，對蝦放苗量為30萬尾/ hm2。由于對蝦放養密度低，加之卵形鯧鲹、鋸緣青蟹對病弱對蝦的捕食，使得對蝦自相殘食現象減少，因此對蝦病毒傳播少，雖然WSSV和IHHNV病毒攜帶率高為100%，但攜帶病毒量均較低，為兩步PCR陽性，且未見發病。

綜上所述，從2010年度廣東省沿海地區抽樣檢測結果可以看出：①養殖池塘對蝦攜帶病毒的問題仍然比較普遍，這為養殖管理帶來了潛在的危險，養殖過程中各種不良因素極易導致病毒大量繁殖復制，致使病害發生。②越冬暖棚養殖操作仍需進一步規范，不當的操作往往會給對蝦帶來應激，導致病害發生。③WSSV感染程度要大于IHHNV，并造成WSS暴發。④水質生態調控技術具有營造良好水質，維持環境穩定的功能，對控制對蝦病毒性疾病的暴發具有良好的作用，值得推廣使用[3-6]。⑤混養模式對對蝦病毒性疾病控制也有良好的作用，通過合理搭配養殖品種，利用池塘食物鏈中各生物的生態位特性，及時清理養殖系統中的病弱養殖生物，從而達到控制病害的水平傳播[6-8]。

[1] 閆冬春，魏福強.水產養殖動物病毒傳播途徑的研究現狀[J].水利漁業，2006，26（1）：110-112.

[2] 楊衛帆.海南南美白對蝦（Penaeus Vannamei）病毒病病原分析及其分子檢測技術的建立[D]. 華南熱帶農業大學，2006

[3] 彭錦新，王侃 劉葒 等. 深圳東部地區水生動物養殖病害情況報告[J]. 中國動物檢疫 1999，16（6）： 14-15.

[4] 張家松 李卓佳 文國樑 等. 廣東和福建地區不同養殖模式下凡納濱對蝦成蝦攜帶WSSV的調查[J]. 中國動物檢疫，2010，27（11）：40-41.

[5] 彭聰聰，李卓佳，曹煜成，等.蝦池浮游微藻與養殖水環境調控的研究概況[J]. 南方水產，2010，6（5）：74-80.