CD109、CD117、Vimentin在基底細胞樣乳腺癌中的表達及臨床價值

林 靜,朱秀梅,李 楠,張金庫

(1.承德醫學院,河北承德 067000;2.吉林大學南湖校區醫院,吉林長春 130012;3.保定市第一中心醫院,河北保定 071000）

根據基因表達分析,給幾種癌定義出了新的亞型,其中乳腺癌從基因角度鑒定出五個亞型:管腔A型(luminal subtype A）,管腔B型(luminal subtype B）,HER-2過表達型(HER-2 over-expression subtype）,正常乳腺樣型(normal breast-like subtype）和基底細胞樣型(basal-like subtype）。其中,基底細胞樣乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC）約占全部乳腺癌的8%-20%,且臨床預后較差[1]。基底細胞樣乳腺癌表達高分子量細胞角蛋白(如CK5/6）和/或EGFR等,而不表達ER、PR、HER-2[2]。目前,針對BLBC 這個特定亞型的抗癌治療尚未建立起來,因此,探尋其有效的分子治療靶點成為BLBC的研究熱點。本實驗通過免疫組化方法檢測 CD109、CD117、Vimentin在BLBC中的表達情況,以增加對該類乳腺癌亞型的認識。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集保定市第一中心醫院病理科2006年1月～2011年3月手術治療及會診的乳腺浸潤性導管癌患者的存檔蠟塊325例。標本均常規取材,中性甲醛固定,常規石蠟包埋,4μ m厚連續切片。根據被大多數學者所認同的BLBC判斷標準(ER、PR、HER-2呈三聯陰性,同時表達一種或一種以上的基底細胞型角蛋白和/或P63和/或EGFR）篩選出BLBC病例51例,同時從余下的274例非BLBC病例中隨機選出50例作為對照組。全部標本均經病理證實,所有病例術前均未進行放療、化療及內分泌治療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 免疫組織化學采用EnVision二步法,抗體選用 CD109、CD117、Vimentin、ER、PR、HER-2、CK5/6、P63、EGFR。以上抗體與試劑除 CD109 購自武漢華瑞康生物科技有限公司,其余均購自福州邁新生物技術開發有限公司。陰性對照:以PBS替代第一抗體的乳腺浸潤性導管癌組織免疫組化染色結果為陰性對照。陽性對照:以預試驗中己證明陽性的乳腺癌組織切片免疫組化染色結果為陽性對照。

1.2.2 免疫組化染色結果的判定和分析 采用雙盲法觀察陽性反應,閱片由兩位高年資病理科醫師獨立觀察每張切片后分別做出判斷。ER、PR、p63陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞核,CD109、CD117、HER-2陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞膜,CK5/6陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞漿,EGFR陽性表達顯示棕黃色均勻細顆粒位于細胞膜和細胞漿。判斷標準:根據陽性細胞占同類病變細胞數的比例和著色程度分為4級:(-）為腫瘤組織無細胞膜/漿/核染色或≤10%細胞膜/漿/核染色;(+）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核部分染色;(++）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核弱～中度完全染色;(+++）為＞10%腫瘤組織細胞膜/漿/核高度完全染色。其中HER-2蛋白(-）或(+）定性為陰性;(++）定性為可疑陽性;(+++）定性為陽性(參照《中華病理學雜志》2003年10月第32卷第5期《乳腺癌HER-2/neu的免疫組織化學檢測》中的HER-2陽性判斷標準）。CD109、CD117、ER、PR、p63、CK5/6、EGFR(-）定性為陰性,(+）～(+++）定性為陽性。

圖1 免疫組織化學染色 CD109陽性(×200）

1.3 統計分析

數據結果采用統計軟件SPSS16.0進行統計分析,組間率比較采用 χ2檢驗進行分析,以 α=0.05作為檢驗水準,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

免疫組化染色CD109蛋白主要表達于BLBC腫瘤組織的細胞膜上,非BLBC腫瘤組織不著色。BLBC組和非 BLBC組中CD109、CD117、Vimentin陽性表達率詳見表1。結果采用 χ2檢驗進行組間陽性率的比較,其中CD109的組間率比較差異有統計學意義(P＜0.05）。CD117、Vimentin的比較差異沒有統計學意義(P＞0.05）。CD109陽性組與CD109陰性組在組織形態學上的比較,不具有統計學意義。上述結果提示,CD109在BLBC中的表達具有特異性,可以作為一個判斷BLBC的免疫標記;CD117、Vimentin在BLBC中的表達不具有特異性,尚不適宜做BLBC的判斷標記。

表1 CD109,CD117,Vimentin在 BLBC與非BLBC中的表達情況

3 討論

CD109蛋白是新近克隆到的一種細胞表面抗原,屬于含硫酯的α 2巨球蛋白/C3、C4、C5家族成員之一[4]。研究顯示,CD109表達于胎兒和成人CD34陽性的造血干和祖細胞,內皮細胞,活化的T淋巴細胞和活化的血小板;另外,CD109可表達于肺、食管及子宮的鱗狀細胞癌[6-8]。最新的研究發現,CD109還可表達于乳腺、涎腺、淚腺的肌上皮細胞及前列腺基底細胞和肌上皮組分的良性腫瘤[9]。目前,盡管CD109的生理功能尚不十分清楚,但在人類角化細胞中CD109能夠通過與TGF-β(transforming growth factor β）受體結合而抑制 TGF-β信號[10]。這些研究結果表明,可將CD109作為一種新的乳腺上皮細胞標記[11],另外,由于CD109是一種細胞表面蛋白,它很可能成為乳腺癌治療的一個潛在分子靶點。本研究中,CD109在BLBC中的陽性表達率為60.78(31/51）,而在非 BLBC中均呈陰性,提示CD109可以作為一個判斷 BLBC的免疫標記。另外,在CK5/6和或P63和或EGFR陰性的病例中有CD109陽性表達,提示檢測CD109可以協同CK5/6、P63、EGFR提高BLBC的檢出率。

CDl17是由c-kit原癌基因編碼的一種跨膜酪氨酸激酶受體,最初被用于胃腸道間質瘤的檢測,現在已經發現它在多種細胞中均有表達,正常乳腺組織的上皮細胞可以表達,BLBC的腫瘤細胞也可以表達,相對于其它乳腺癌它在BLBC中的表達更常見,在mRNA檢測時,CD117是乳腺癌基底細胞樣表型最好的指標之一,但在免疫組化時其表達率較低[11]。本研究的BLBC組中CD117的免疫組化陽性表達率為11.76%(6/51）,沒有發現其表達與BLBC之間存在密切關系,這可能與我們所選的檢測方法及樣本量不足夠大有關。

Vimentin是最普遍的中間絲蛋白,在所有干細胞中表達,但分化過程中它可轉化成其他中間絲[12]。它參與細胞骨架的構成,與細胞的膜系統廣泛連接。有研究表明可溶性Vimentin多肽還具有與細胞的核酸和組蛋白結合的能力,具有調控細胞生長、分裂的作用[13]。有文獻報道,Vimentin的陽性表達具有提示乳腺癌預后的意義與淋巴結的狀態相關:Vimentin提示預后不良的情況僅存在于淋巴結轉移陰性的乳癌,不包括淋巴結轉移者[14]。有報道表明BLBC易發生內臟特別是腦和肺轉移與Vimentin的高表達有關。我們的實驗發現,Vimentin在BLBC中表達增高,但和其在非BLBC中的表達無顯著差異,與淋巴結轉移無相關性,因此,本研究顯示Vimentin尚不能作為鑒別BLBC的特異性標記物。

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